發(fā)布時間：2020-06-20 17:58

【摘要】：研究背景與目的:隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展,心血管事件發(fā)生呈逐年遞增的趨勢。其中,高致死、高致殘的急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)已成為導(dǎo)致人類死亡的首要病因。急性心肌梗死(AMI)是指冠狀動脈急性、持續(xù)性缺血血氧所引起的心肌壞死,為了對抗這個心肌梗死,人類已經(jīng)從不同方向上進行探索。例如鑒于心肌細胞無法生長的特性,干細胞方向的研究就是尋求形成新的心肌細胞來補充心梗后梗死區(qū)域死亡的心肌細胞,以期進一步恢復(fù)心功能,改善患者預(yù)后。另一個方向就是針對心梗后邊緣區(qū)域的瀕死狀態(tài)的心肌細胞的拯救,通過研究某些特殊非編碼RNA或蛋白質(zhì)的功能來拯救瀕死狀態(tài)心肌細胞,減小梗死區(qū)域范圍是其中較為新穎的研究方向。長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)是一組轉(zhuǎn)錄物長度大200個nt(核苷酸),缺少特異完整開放閱讀框并且無蛋白質(zhì)編碼功能的RNA。研究發(fā)現(xiàn),長鏈非編碼RNA通過調(diào)控組蛋白修飾、染色質(zhì)重構(gòu)、轉(zhuǎn)綠水平以及轉(zhuǎn)綠后水平等方式,在細胞周期、增殖、遷移和代謝等方面發(fā)揮重要作用,近年關(guān)于lnc RNA的研究已然成為各個領(lǐng)域的研究熱點。近年來,多項研究成果都表明lnc RNA對急性心梗等多種心血管疾病具有調(diào)控作用。Morrbid(myeloid RNA regulator of Bim-induced death)是2016年發(fā)現(xiàn)的一個新的與細胞死亡相關(guān)的lnc RNA而且人鼠同源,但在心血管領(lǐng)域并沒有任何與Morrbid相關(guān)的研究成果發(fā)表。通過前期對乳鼠原代心肌細胞以及HCM細胞內(nèi)Morrbid表達量等的探索性研究,認為Morrbid可能對心肌細胞的死亡也具有一定的調(diào)節(jié)作用。實驗?zāi)康?(1)通過q PCR技術(shù)探究Morrbid在C57小鼠急性心梗模型中的表達。(2)通過q PCR技術(shù)探究Morrbid在人與小鼠心肌細胞缺氧模型中的表達趨勢。(3)在細胞層面調(diào)控Morrbid表達,觀察其對細胞凋亡的影響。(4)在野生型C57小鼠體內(nèi)調(diào)控Morrbid表達,觀察其對急性心梗后心功能的影響。(5)在敲除Morrbid基因的小鼠上觀察Morrbid-KO后其對急性心梗后心功能的影響。(6)通過數(shù)據(jù)庫篩選,尋找Morrbid可能的上下游基因。(7)在乳鼠原代心肌細胞缺氧模型與C57小鼠急性心梗模型中通過q PCR與Western blot技術(shù)驗證下游基因的可靠性。(8)在調(diào)控后的人與小鼠細胞樣本上通過q PCR與Western blot技術(shù)驗證下游基因的可靠性。(9)在調(diào)控后的C57小鼠心臟與敲除Morrbid基因的小鼠心臟上驗證下游基因的可靠性。(10)用乳鼠原代心肌細胞凋亡實驗,驗證上下游基因的可靠性。材料與方法:實驗用購買自美國模式培養(yǎng)物集存庫,(American Type Culture Collection,ATCC)的人類心肌細胞(Human Cardiac Myocyte,HCM),購買自Jackson Lab的C57小鼠和C57乳鼠原代心肌細胞(Neonatal Mouse Cardiomyocyte,NMC),以及購買自北京百奧賽圖公司的Morrbid-KO基因小鼠作為研究對象,采用q PCR技術(shù)檢測樣本中基因表達量的變化;通過Tunel染色觀察缺氧處理后各組細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。通過B超測量各組小鼠急性心梗模型后心功能的變化,采用TTC與Evans blue雙染色的方法拍照心臟切片心梗區(qū)去危險區(qū)的比值。同時,對同一心臟組織進行固定,做冰凍切片后,通過Tunel染色觀察各組心肌組織細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。應(yīng)用Western blot技術(shù)驗證下游基因在缺氧模型、心梗模型以及調(diào)控后樣本中的含量變化。結(jié)果:1.在小鼠急性心梗模型中,心梗組比Sham組Morrbid表達量明顯增高;在NMC細胞缺氧模型中Morrbid表達量在缺氧的各個時間點都比未做缺氧處理的對照組(0h)有所升高;在HCM細胞的缺氧模型中,Morrbid的整體趨勢依然是上升的,缺氧48小時組Morrbid表達量比0h的對照組Morrbid表達量明顯增高。2.在NCM細胞凋亡實驗中,Morrbid上調(diào)組細胞凋亡率明顯低于對照組,Morrbid下調(diào)組細胞凋亡率明顯高于對照組,即Morrbid在NCM細胞凋亡模型中起抗凋亡作用。3.在小鼠急性心梗模型中,Morrbid上調(diào)組的心功能明顯優(yōu)于對照組,且Morrbid基因敲除組的心功能也明顯比對照組差;Morrbid上調(diào)組的I/A明顯小于對照組,Morrbid基因敲除組的I/A也明顯大于對照組;Morrbid上調(diào)組的心肌組織凋亡率明顯低于對照組,Morrbid基因敲除組的心肌組織凋亡率也明顯高于對照組。4.Morrbid下游基因Serpine1在小鼠急性心模型、NMC細胞H202損傷模型中,其表達量均與Morrbid表達量相一致。5.在小鼠體內(nèi)心肌注射腺病毒上調(diào)Morrbid后,下游基因Serpine1的表達也上調(diào),敲除Morrbid基因后,下游基因Serpine1的表達下降;同時在HCM細胞中用腺病毒調(diào)控Morrbid后,下游基因Serpine1的表達均出現(xiàn)相應(yīng)的變化,與小鼠體內(nèi)實驗相一致。6.在NCM細胞凋亡實驗中,上調(diào)Morrbid后,用Si RNA下調(diào)Serpine1,可以部分的阻斷Morrbid抗凋亡作用。7.在NCM細胞中,加入PI3K抑制劑LY294002處理,可以抑制Morrbid表達增高。結(jié)論:1.長鏈非編碼基因Morrbid在NMC細胞中起抗凋亡作用。2.長鏈非編碼基因Morrbid在小鼠急性心梗中對心功能具有保護作用。3.長鏈非編碼基因Morrbid的抗凋亡作用有部分是通過調(diào)控其下游基因Serpine1實現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R542.22
【圖文】：

圖4-B：第一行是加 GFP,但不缺氧組；第二行是加 GFP,缺氧組；第三行是是加 MB OVE缺氧組；（100 倍鏡圖像）0102030CON&MB SI RNAApoptosiscels(%)***Hypoxia-24hVehicleMorrbid-siRNA+++_+_

圖 4-D：第一行是 control 缺氧組；第二行是加 Morrbid siRNA 缺氧組；（100 倍鏡圖像5. 動物實驗結(jié)果5.1 心臟注射腺病毒調(diào)控 Morrbid，小鼠急性心梗模型后各項結(jié)果對 12 周齡的 C57 小鼠進行隨機分組，一組注射 GFP 腺病毒，一組注射Morrbid over expression 腺病毒[76]，48 小時之后，結(jié)扎小鼠左前降支，構(gòu)建性心梗模型。建模 24 小時后，B 超檢測兩組小鼠心功能，取出心臟做 TTC 與伊文氏藍雙染色以及心肌組織 Tunel 染色。5.1.1 心臟注射腺病毒調(diào)控 Morrbid，小鼠急性心梗模型后 B 超結(jié)果急性心梗建模 24 小時后，B 超檢測兩組小鼠各項指標，其中左室射血分數(shù)，Morrbid over expression 組的 EF%值（37.91 ±1.872, n=20）明顯高于 GF組的 EF%值（26.3 ±1.385, n=24）且（P＜0.0001）；左室短軸縮短率，Morrover expression 組的 FS%值（18.05 ±0.9934, n=20）明顯高于 GFP 組的 FS%值（12.09 ±0.68, n=24）且（P＜0.0001）；左室舒張期內(nèi)徑，Morrbid over express組的 LVEDD 值（3.737 ±0.08455, n=20）明顯低于 GFP 組的 LVEDD（4.153

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉巧玲;;熱射病患者疑似急性心梗的救治體會[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2018年31期

2 羅助榮;;突發(fā)急性心梗 學(xué)會院前自救[J];農(nóng)家之友;2017年02期

3 田靜;;96例不典型急性心梗臨床誤診的原因及預(yù)防措施[J];臨床醫(yī)學(xué)研究與實踐;2017年28期

4 張明紅;;早期急性心梗合并惡性室性心律失常的治療分析[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2015年32期

5 田紅霞;閆玉杰;;無痛性急性心梗的特點與急診策略分析[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2016年09期

6 冀俠;;情緒波動容易引起急性心梗[J];老同志之友;2017年08期

7 壽博士;;冠心病患者如何運動?[J];益壽寶典;2017年13期

8 陳桂馥;;小承氣湯治療急性心梗后便秘的觀察與護理[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2011年07期

9 彭曉蘭;4例青年人急性心梗的診治體會[J];醫(yī)學(xué)理論與實踐;2005年06期

10 ;急性心梗應(yīng)引起高度警惕[J];中國社區(qū)醫(yī)師;2005年20期

相關(guān)會議論文 前10條

1 白熙平;張海;沈春雷;楊慶鐘;;以R波丟失為特征的急性心梗5例分析報道[A];第三屆心臟學(xué)會、第六屆心功能學(xué)會及心功能雜志創(chuàng)刊10周年學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];1996年

2 石麗;;不同性別、患有及不患有糖尿病人群,發(fā)生急性心梗后短期和長期死亡率的對比[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國心血管病學(xué)大會論文匯編[C];2013年

3 楊琰娜;金妮;;急性心梗急診經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)的護理對策[A];全國內(nèi)科護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議、全國心臟內(nèi)、外科護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2008年

4 楊芳芳;郭航遠;邢楊波;;中青年人急性心梗臨床及直接經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)的特征[A];2012年浙江省心電生理與起搏學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

5 楊書香;蘆良花;;急性心梗的搶救與護理[A];中華醫(yī)學(xué)會全國第五次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];1994年

6 劉淑英;;尿激酶治療急性心梗的護理體會[A];中華醫(yī)學(xué)會全國第五次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];1994年

7 蘇書華;蘇禹;孫建舉;張秀梅;;基層門診部院前搶救急性心梗時值得注意幾個問題對策探討[A];第十一次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

8 金艷芳;;急性心梗病人的一般護理[A];吉林省護理學(xué)會2008學(xué)術(shù)年會暨護理技能培訓(xùn)班論文匯編[C];2008年

9 金艷芳;;急性心梗病人的急救護理[A];吉林省護理學(xué)會2008學(xué)術(shù)年會暨護理技能培訓(xùn)班論文匯編[C];2008年

10 韓青;孫國華;;CK-MB質(zhì)量、CK-MB活性在急性心梗及腦疾病中的應(yīng)用探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院上海市心血管病研究所 主任醫(yī)師 程蕾蕾;急性心梗的正確急救方式(四)[N];家庭醫(yī)生報;2019年

2 本報記者 董超;“高敏感”心肌標志物助力急性心梗早診早治[N];保健時報;2016年

3 山東大學(xué)齊魯醫(yī)院副院長、中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會候任主委 陳玉國;“高敏感”心肌標志物縮短急性心梗診斷時間[N];光明日報;2016年

4 劉靜;老齡化給心梗防治帶來新挑戰(zhàn)[N];健康報;2016年

5 本報記者 白毅;高敏感心肌標志物提速急性心梗診治[N];中國醫(yī)藥報;2016年

6 記者 王丹 譚嘉;我國首個急性心梗注冊研究平臺建立[N];健康報;2013年

7 記者 李亞紅;京居民急性心梗發(fā)病和死亡呈現(xiàn)年輕化[N];新華每日電訊;2011年

8 張獻懷;無征兆急性心梗就在你身邊[N];保健時報;2005年

9 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 王華榮;注意急性心梗的特殊表現(xiàn)[N];河北科技報;2010年

10 徐文端;高溫天氣防心梗[N];人民政協(xié)報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 王金平;基于運氣學(xué)說與代謝組學(xué)的急性心梗預(yù)后的風險研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 項飛;急性心肌梗死后早期心室重構(gòu)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

3 劉崢;MicroRNA-150在房顫及急性心梗中的表達及機制研究[D];華中科技大學(xué);2014年

4 曾建平;骨髓干細胞移植改善豬急性心梗后左室重構(gòu)及相關(guān)機制的研究[D];中南大學(xué);2009年

5 溫霞;N-甲基-D-天門冬氨酸受體對大鼠急性心肌梗死的影響及機制研究[D];武漢大學(xué);2015年

6 胡昕嬰;瑞舒伐他汀促大鼠急性心梗后心肌組織修復(fù)的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

7 閔笑顏;冠心病患者血清細胞因子表達譜特征及其與疾病嚴重程度的關(guān)系研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2017年

8 付倩;STI評價大鼠急性心梗模型整體與局部心肌功能改變實驗研究[D];華中科技大學(xué);2010年

9 黃素麗;血漿microRNA與急性心梗發(fā)病風險和焦爐工心率變異性改變的關(guān)聯(lián)性研究[D];華中科技大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 余烊;長鏈非編碼RNA-Morrbid與急性心梗相關(guān)性研究[D];華南理工大學(xué);2019年

2 趙瑞環(huán);超聲斑點追蹤技術(shù)評價急性心梗PCI前后心肌力學(xué)改變[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 龔志堅;急性心肌梗死患者血漿外泌體介導(dǎo)促炎免疫反應(yīng)[D];南昌大學(xué);2018年

4 閆曉倩;羊急性心梗卸負荷模型的miRNA表達譜[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

5 程輝;經(jīng)胸實時三維超聲心動圖評價急性心梗PCI前后二尖瓣構(gòu)型變化[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

6 秦娟;四種心肌標志物聯(lián)合檢測在急性心梗診斷中的應(yīng)用[D];暨南大學(xué);2012年

7 馬杰;紅景天苷及心復(fù)力顆粒對大鼠急性心梗后心室重構(gòu)心肌纖維化作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

8 肖蕾;丹參聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞靜脈注射對急性心梗兔心肌修復(fù)影響的實驗研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

9 楊敏;動員自體骨髓干細胞治療大鼠急性心肌梗死的實驗研究[D];汕頭大學(xué);2004年

10 賴衛(wèi)強;表面增強拉曼光譜技術(shù)診斷急性心肌梗死的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：2722763