【摘要】：研究背景:氯吡格雷作為一種口服抗血小板藥物,本身沒有活性,必須經(jīng)過肝臟藥物代謝酶細(xì)胞色素P450代謝活化生成其活性代謝產(chǎn)物(CAM)而發(fā)揮抑制血小板聚集的作用。研究表明,在服用標(biāo)準(zhǔn)劑量的氯吡格雷后,約15%～40%的冠心病病人不能獲得預(yù)期的氯吡格雷抗血小板作用,這一現(xiàn)象被稱之為“氯吡格雷抵抗”。然而,氯吡格雷抵抗的機(jī)制尚不完全清楚。有研究表明:外周血中的ABCC3 mRNA、miR-223的表達(dá)水平與氯吡格雷抵抗相關(guān);肝組織中的miR-150與氯吡格雷的代謝酶相關(guān);miR-542-3p可能與氯吡格雷的代謝酶相關(guān)。研究目的:探究外周血mmRNA、miRNA和IncRNA在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表達(dá),尋找與氯吡格雷抵抗相關(guān)的分子標(biāo)志物。研究方法:收集PCI術(shù)后口服氯吡格雷患者的臨床資料和血標(biāo)本,用電阻法檢測血小板聚集率。對血小板聚集率結(jié)果進(jìn)行排序后將患者分成4等份(Q1,Q2,Q3,Q4),Q1認(rèn)為是氯吡格雷敏感(≤1Ω),Q4認(rèn)為是氯吡格雷抵抗(10Ω)。1.ABCC3mRNA在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表達(dá):選擇氯吡格雷敏感患者與氯吡格雷抵抗患者各47例,提取白細(xì)胞總RNA,使用Agilent 2100 Bioanalyzer進(jìn)行總RNA質(zhì)檢。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):總量≥0.11μ g;RNA完整性計(jì)數(shù)≥6.0;28S/18S≥0.7。合格的標(biāo)本使用SYBR Green熒光定量PCR檢測外周血白細(xì)胞中的ABCC3 mRNA;2.miR-223-3p在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表達(dá):選擇氯吡格雷敏感患者與氯吡格雷抵抗患者各47例,提取白細(xì)胞總RNA,使用Agilent 2100 Bioanalyzer進(jìn)行總RNA質(zhì)檢質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):總量≥0.14 μ g;RNA完整性計(jì)數(shù)≥6.0;28S/18S≥0.7。合格的標(biāo)本使用Taqman熒光定量PCR檢測外周血白細(xì)胞中的microRNA 223;3.miR-150、miR-542-3p在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表達(dá):選擇氯吡格雷敏感患者與氯吡格雷抵抗患者各5例,用mmiRNA芯片篩選有差異表達(dá)的microRNA。根據(jù)芯片篩選結(jié)果和文獻(xiàn)選擇2個(gè)有差異表達(dá)的microRNA(miR-150、miR-542-3p)進(jìn)行 qRT-PCR 驗(yàn)證;4.lncRNAs在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表達(dá):選擇氯吡格雷敏感患者與氯吡格雷抵抗患者各5例,用lncRNA芯片篩選有差異表達(dá)的lncRNA。根據(jù)芯片篩選結(jié)果選擇3個(gè)有差異表達(dá)的lncRNA(NONHSAT083775.2、NONHSAT107804.2、NONHSAT133455.2)進(jìn)行 qRT-PCR 驗(yàn)證。結(jié)果:1、SYBRGreen熒光定量PCR檢測了氯吡格雷敏感組(n=32)和氯吡格雷抵抗組(n=36)的白細(xì)胞ABCC3 mRNA水平,結(jié)果顯示ABCC3 mRNA表達(dá)水平在兩組間無顯著差異(P=0.76)。2、TaqMan qRT-PC檢測了氯吡格雷敏感組(n=24)和氯吡格雷抵抗組(n=36)的白細(xì)胞miR-223-3p水平,結(jié)果顯示miR-223-3p表達(dá)水平在兩組間無顯著差異(P=0.94)。3、miRNA芯片篩選顯示:氯吡格雷抵抗組白細(xì)胞中有21個(gè)microRNA上調(diào),31個(gè) microRNA 下調(diào)(P0.05)。qRT-PCR 驗(yàn)證顯示:血漿中的 miR-150 和 miR-542-3p的表達(dá)水平在兩組間均無顯著差異(P=0.082、0.341)。4、lncRNA芯片篩查顯示:氯吡格雷抵抗組白細(xì)胞中有11個(gè)lncRNA上調(diào),8個(gè)lncRNA下調(diào)(P0.05)。qRT-PCR驗(yàn)證顯示:與氯吡格雷敏感者比,氯吡格雷抵抗患者的外周血白細(xì)胞中有2個(gè)lncRNA(NONHSAT083775.2和NONHSAT107804.2)上調(diào),1 個(gè) lncRNA(NONHSAT133455.2)下調(diào),與芯片分析結(jié)果一致。結(jié)論:1、冠心病患者外周血白細(xì)胞中的ABCC3 mRNA、mmiR-223-3p和外周血血漿中的miR-150、miR-542-3p的表達(dá)水平均與氯吡格雷抵抗無顯著關(guān)聯(lián);2、冠心病患者外周血白細(xì)胞中的3個(gè)lncRNA(NONHSAT083775.2、NONHSAT107804.2和NONHSAT133455.2)的差異性表達(dá)與氯吡格雷抵抗相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R541.4
【圖文】：

ＧＰ邋Ｉｌｂ／ＩＩＩａ分子的參與。在誘聚劑的激活下，ＧＰ邋Ｉｌｂ／ＩＩＩａ分子上的纖維蛋白原逡逑受體暴露，在Ｃａ２＋的作用下ＧＰ邋Ｉｌｂ／ＩＩＩａ分子和纖維蛋白原結(jié)合，從而連接相鄰逡逑的血小板，使血小板聚集成團(tuán)（圖２）。逡逑＼ｋ邋ｆ逡逑４．邋４逡逑一，邐’廠邋＊邐％邐－逡逑＾邋Ｉ邐，★逡逑４邋／逡逑＼邋＾邋Ｉｎａｃｔｉｖｅ／ａｃｔｉｖｅ邋ａｉｌｂｐ３邋＾邋ＧＰＣＲ邋＃邋Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ邐Ｔｈｒｏｍｂｉｎ逡逑Ｉｎｓｉｄｅ－ｏｕｔ邋ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ邐Ｃａ２＊邋Ｃａｌｃｉｕｍ邋ｍｏｂｉｌｉｓａｔｉｏｎ邐ＡＤＰ／ＴｘＡ２逡逑圖２血小板聚集示意圖逡逑１３逡逑

對血小板聚集率結(jié)果進(jìn)行排序后將患者分成４等份（Ｑｌ，Ｑ２，Ｑ３，邋Ｑ４），逡逑Ｑ１認(rèn)為是氯吡格雷敏感（彡１Ｑ），Ｑ４認(rèn)為是氯吡格雷抵抗（＞１０0）。一名患逡逑者血小板聚集率的結(jié)果如圖１：逡逑Ｔｅｓｔ邋ＩＤ邋：邋２０１４０８０６－１－２逡逑ＴＲＡＣＥ邋１邋Ｄａｔｅ：邋２０１４－８－６邋Ｔｉｍｅ：邋１０：０２：１１邐Ｔｒａｃｅ邋１邋Ｔｒａｃｅ邋２邋Ｔｒａｃｅ邋３邋Ｔｒａｃｅ邋４逡逑Ｎａｍｅ：邋．邐———邐邐邋邐逡逑ＩＤ邋：邐Ｌａｂ邋：邐邐邐邐邐邐逡逑Ｂｌｏｏｄ邋Ｄｒａｗ邋Ｔｉｍｅ邋：逡逑ＲＡＣＥ邐邐１邐？邐邋0邐ｉ00逡逑Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ邐ＩＭＰ逡逑Ｒｅａｇｅｎｔ逡逑１０邐９０逡逑Ｓｔｉｒｒｅｒ邐１２００逡逑Ｇａｉｎ邐２０／５邐邋２0邐８０逡逑Ａｍｐｌｉｔｕｄｅ邋１４邋ｏｈｍ逡逑Ｓｌｏｐｅ邐７邐３0邐７０逡逑Ｌａｇ邋Ｔｉｍｅ邐０：０５逡逑Ａｒｅａ邋Ｕｎｄｅｒ邐５２．６邐扣逡逑ｃｏｒｎｍｅｎｌｓ邐ｇ５0－ｆ，邐５０逡逑Ｕ逡逑０）逡逑⑴邋６０邐邋４０逡逑７０邐—３０逡逑８０邐邐２

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 呂樹錚;許鋒;;血小板功能監(jiān)測之我見[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年04期

2 陳希偉;吳同果;韋建瑞;趙強(qiáng);李彪;薛芳;;復(fù)方丹參滴丸對氯吡格雷抵抗患者血小板聚集功能影響的研究[J];廣州醫(yī)藥;2012年02期

本文編號：2722479