【摘要】：研究背景及目的主動(dòng)脈夾層是心血管系統(tǒng)的高危疾病,其發(fā)病兇險(xiǎn),死亡率高,近年來發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),目前臨床上尚缺乏安全有效的藥物治療方法。主動(dòng)脈夾層的病理生理特點(diǎn)主要表現(xiàn)為細(xì)胞外基質(zhì)降解、炎癥細(xì)胞浸潤和血管平滑肌細(xì)胞凋亡,但具體的發(fā)病分子機(jī)制尚不明確。ADAMTS1(I型血小板結(jié)合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶1)可以通過降解多種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白參與細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu),同時(shí)也是一種炎癥相關(guān)蛋白。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),ADAMTS1與主動(dòng)脈夾層發(fā)病密切相關(guān),但ADAMTS1在主動(dòng)脈夾層發(fā)病過程中具體發(fā)揮怎樣的作用以及起作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)尚不清楚。因此,本研究將在小鼠動(dòng)物模型中明確ADAMTS1在主動(dòng)脈夾層中的作用并探索相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法構(gòu)建ADAMTS1flox/flox小鼠和ADAMTS1全身?xiàng)l件誘導(dǎo)敲除小鼠來探究ADAMTS1在主動(dòng)脈夾層發(fā)病過程中的作用。通過連續(xù)給予3周雄性ADAMTS1 flox/flox小鼠和ADAMTS1誘導(dǎo)敲除小鼠β-氨基丙腈(BAPN)(1.0 g/kg/d)28天建立小鼠主動(dòng)脈夾層模型。采用 Real time-PCR、Western Blot、組織病理學(xué)、ELISA、transwell以及流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)方法探究ADAMTS1在主動(dòng)脈夾層發(fā)病過程中的作用及分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們成功建立了 BAPN誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)脈夾層模型,發(fā)現(xiàn)在BAPN誘導(dǎo)早期的主動(dòng)脈組織中,ADAMTS1的mRNA水平和蛋白水平與對(duì)照組相比均明顯升高,免疫組化結(jié)果顯示AD AMTS 1主要表達(dá)于血管外膜中。在BAPN誘導(dǎo)的主動(dòng)脈夾層模型中,與ADAMTS1 flox/flox組小鼠相比,ADAMTS1誘導(dǎo)敲除組小鼠的主動(dòng)脈夾層發(fā)生率及破裂率均明顯降低,分別由81.8%和42.4%降至45.5%和18.2%,生存率也明顯降低。HE染色和彈力板染色顯示ADAMTSflox/flox組小鼠的主動(dòng)脈組織中彈力纖維斷裂明顯,假腔形成,中膜內(nèi)間隙明顯增寬,假腔中充滿了大量的紅細(xì)胞,而ADAMTS1誘導(dǎo)敲除組小鼠的主動(dòng)脈組織中彈力纖維排列整齊,相對(duì)較完整。在BAPN誘導(dǎo)早期,ADAMTS1flox/flox組小鼠的血管外膜中可見中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤明顯增加,主動(dòng)脈組織中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1的mRNA水平明顯升高,并且外周血中的中性粒細(xì)胞比例及IL-6和MCP-1水平明顯增多,這些現(xiàn)象均在ADAMTS1敲除后被明顯抑制。我們通過在體和離體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)敲除ADAMTS1能夠明顯抑制巨噬細(xì)胞的遷移能力。此外,我們還發(fā)現(xiàn)在所建立的小鼠主動(dòng)脈夾層模型中,基底膜蛋白nidogen-2的蛋白水平隨著ADAMTS1蛋白水平的增加而減少,而在ADAMTS1敲除后,該現(xiàn)象發(fā)生了明顯逆轉(zhuǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論我們成功建立了 BAPN誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)脈夾層模型和ADAMTS1全身?xiàng)l件誘導(dǎo)敲除小鼠,在此基礎(chǔ)上,我們發(fā)現(xiàn)敲除ADAMTS1可以抑制主動(dòng)脈夾層發(fā)生和發(fā)展,其作用機(jī)制可能與ADAMTS1調(diào)控炎癥反應(yīng)和降解nidogen-2相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)提示ADAMTS1可能成為主動(dòng)脈夾層的新治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R543.1
【圖文】：

進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在ＢＡＰＮ誘導(dǎo)主動(dòng)脈夾層發(fā)生早期，主動(dòng)脈組織中ＡＤＡＭＴＳ１逡逑的ｍＲＮＡ水平與對(duì)照組相比已有明顯升高，并且在ＢＡＰＮ飲水１４天時(shí)達(dá)到高峰，隨逡逑后ＡＤＡＭＴＳ１的ｍＲＮＡ７Ｋ平稍有降低，但仍明顯高于對(duì)照組（圖１Ａ）；邋ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ逡逑結(jié)果顯示ＡＤＡＭＴＳ１的蛋白水平隨著ＢＡＰＮ飲水時(shí)間的延長而逐漸X椉櫻ㄍ跡保攏誨義顯諂脹ㄒ樾∈籩校粒膩澹粒停裕渝澹鋇模恚遙危梁偷鞍妝澩鎪驕系停歡苑⑸酥鞫義下黽脅閾∈蟮鬧鞫鱟櫓忻庖咦榛舊⑾鄭詬瑁攏粒校我�，小驶e鞫義下鱟櫓械模粒模粒停裕櫻彼矯饗隕擼⑶抑饕澩鎘諮芡餑ぶ校ㄍ跡保茫澹模�。辶x險(xiǎn)廡┙峁崾荊粒模粒停裕櫻痹冢攏粒校斡盞嫉鬧鞫黽脅惴⒉」討鋅贍芊⒒恿酥匾麇義嫌謾ｅ義希危洛澹攏粒校五澹板澹洌幔澹峰澹洌幔簀澹保村澹洌幔簀澹玻卞澹洌幔簀澹玻稿澹洌幔簀義希危卞危粒模粒停裕櫻歟郟皺澹�？邋，卞辶x希保矗誨�、ｉ￣￣＇逦ｈ－逦逦逦１�(dān)靛澹

本文編號(hào)：2718573