AGGF1蛋白對血管損傷治療機(jī)制的研究

發(fā)布時(shí)間：2020-06-14 20:46

【摘要】：血管損傷是動脈粥樣硬化等血管疾病治療后出現(xiàn)的嚴(yán)重問題,研究血管損傷的修復(fù)策略對于該類型血管疾病的治療的作用不言而喻。血管生成因子AGGF1作為一種強(qiáng)有力的血管生成因子,在治療血管損傷上有著重大意義。AGGF1是在對KTS疾病研究中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)致病基因,研究表明其與血管內(nèi)皮生長因子效果類似。VSMC細(xì)胞和EC細(xì)胞中都有較高水平的AGGF1表達(dá),并表現(xiàn)出強(qiáng)有力的促血管生成的作用。在對AGGF1敲除小鼠進(jìn)行研究中,發(fā)現(xiàn)其對血管生成和血管發(fā)育至關(guān)重要,證明是血管完整性的重要調(diào)節(jié)因子。通過對斑馬魚實(shí)驗(yàn)研究,證明了AGGF1可以通過激活A(yù)KT通路調(diào)節(jié)血管的生成。在前期的研究中,發(fā)現(xiàn)AGGF1有著刺激EC細(xì)胞分裂、粘附和遷移的作用,并找到了該作用的功能域。在最近的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在新內(nèi)膜形成過程中,頸動脈中VSMC細(xì)胞在血管損傷后的增殖增加;AGGF1蛋白通過抑制小鼠體內(nèi)的VSMC的增殖和促進(jìn)表型轉(zhuǎn)換至收縮表型來阻斷血管損傷后的新內(nèi)膜形成。其收縮表型的特征在于收縮蛋白的高表達(dá),典型的肌動蛋白有α-SMA,SM22和MYH11。因此,為了更好的闡述AGGF1結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,本論文主要研究AGGF1蛋白促血管生成作用的最小功能域,并通過動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其治療效果。為更進(jìn)一步尋找具有血管損傷治療的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域,我們純化了一系列N端和C端截短的AGGF1蛋白。已知AGGF1在血管損傷后的新內(nèi)膜形成中起重要作用,能夠有效的促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞EC和血管平滑肌細(xì)胞VSMC粘附、分裂與增殖。AKT在調(diào)控細(xì)胞的生長、增殖、代謝、轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)合成等功能上有重要作用。因此在血管損傷后,可根據(jù)磷酸化AKT的水平來判斷血管生成效果。通過合適的條件純化蛋白,并將各截短蛋白刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞,用WB檢測磷酸化AKT的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)表明,在604位氨基酸到614位氨基酸之間的區(qū)域能有效的提高AKT磷酸化的水平,證明AGGF1蛋白促血管生成作用的區(qū)域位于604-614位氨基酸區(qū)域。為了更進(jìn)一步驗(yàn)證這個(gè)結(jié)果,我們進(jìn)行了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。α-SMA、SM22和MYH11均參與細(xì)胞運(yùn)動和細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性的維持,可通過三者的水平判斷血管生成與治療的效果。對C57BL/6J小鼠進(jìn)行了頸動脈結(jié)扎手術(shù),通過QPCR的技術(shù)檢測α-SMA、SM22和MYH11的表達(dá),驗(yàn)證AGGF1以及截短蛋白在動物體內(nèi)對血管損傷治療的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)與細(xì)胞檢測AKT磷酸化結(jié)果一致,AGGF1蛋白促血管生成作用的區(qū)域位于604-614位氨基酸區(qū)域。本論文研究了AGGF1蛋白促進(jìn)血管生成作用的最小功能域,并第一次利用動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該結(jié)果,對未來利用AGGF1片段制造血管生成的肽類藥物提供了思路。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R54
【圖文】：

蛋白結(jié)構(gòu)