【摘要】：目的:對(duì)氧磷酶2(Paraoxonase 2,PON2)是對(duì)氧磷酶家族成員之一,在人類組織中廣泛表達(dá),具有抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗氧化應(yīng)激等作用。目前對(duì)PON2的作用機(jī)制已有大量的研究,但進(jìn)一步涉及到細(xì)胞內(nèi)通路的研究較少。本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)應(yīng)用Western blot技術(shù),觀察P0N2是否通過(guò)抑制c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路和氧化應(yīng)激通路對(duì)抗氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞損傷。方法:選取1-3日內(nèi)出生的SD乳鼠,雌雄不限,由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。麻醉乳鼠,取其心臟,進(jìn)行乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)。利用具有PON2 siRNA的重組腺病毒轉(zhuǎn)染乳鼠心肌細(xì)胞使其PON2蛋白低表達(dá)。用腺病毒空載體、ox-LDL,PON2蛋白和JNK抑制劑SP6000125進(jìn)行前期處理,最后乳鼠心肌細(xì)胞分組為:control組,ox-LDL組,ox-LDL+PON2蛋白組,ox-LDL+SP600125組,control AD組,ox-LDL+control AD組,PON2 siRNA組,ox-LDL+PON2 siRNA組。利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率,半胱天冬酶3/7(caspase3/7)活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化,Western blot技術(shù)檢測(cè)JNK的磷酸化水平,Nox2/gp91~(phox)和PON2蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:1.與control組相比,ox-LDL組細(xì)胞存活率明顯降低[(0.400±0.150)vs(0.654±0.153),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+PON2蛋白組與ox-LDL+SP600125組細(xì)胞存活率明顯升高[(0.560±0.200),(0.550±0.180)vs(0.400±0.150),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組細(xì)胞存活率明顯降低[(0.230±0.110)vs(0.371±0.151),P0.05]。與control組相比,ox-LDL組的caspase3/7活性明顯升高[(11962.33±643.41)vs(6620.5±342.01),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+SP600125組與ox-LDL+PON2蛋白組的caspase3/7活性明顯降低[(7521.80±499.80),(7462.00±402.75)vs(11962.33±643.41),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組的caspase3/7的活性明顯升高[(13562.5±574.42)vs(11816.33±640.21),P0.05]。表明PON2可減少ox-LDL誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,減輕心肌細(xì)胞損傷。2.與control組相比,ox-LDL組氧化應(yīng)激指標(biāo)Nox2/gp91~(phox)的蛋白表達(dá)明顯升高[(1.400±0.140)vs(0.540±0.230),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+PON2蛋白組Nox2/gp91~(phox)的蛋白表達(dá)明顯降低[(0.868±0.226)vs(1.400±0.140),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組的Nox2/gp91~(phox)的蛋白表達(dá)明顯升高[(1.740±0.140)vs(1.396±0.140),P0.05],表明PON2可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)。3.用攜帶有PON2干擾基因的腺病毒轉(zhuǎn)染乳鼠心肌細(xì)胞后,PON2的蛋白表達(dá)明顯降低,表明PON2的低表達(dá)模型建立成功。與control組相比,ox-LDL組的JNK的磷酸化水平明顯升高[(0.370±0.020)vs(0.150±0.020),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+PON2的JNK的磷酸化水平明顯降低[(0.204±0.096)vs(0.370±0.020),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組JNK的磷酸化水平明顯升高[(0.620±0.060)vs(0.3689±0.024),P0.05],表明PON2可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的JNK信號(hào)通路的激活。結(jié)論:1.PON2可減少ox-LDL誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,減輕心肌細(xì)胞損傷。2.PON2可通過(guò)抑制氧化應(yīng)激通路減輕ox-LDL對(duì)心肌細(xì)胞的損傷。3.PON2可通過(guò)抑制JNK信號(hào)通路減輕ox-LDL對(duì)心肌細(xì)胞的損傷。
【圖文】：

圖 1 在熒光顯微鏡下 PON2 siRNA 腺病毒的轉(zhuǎn)染率he transfection rate of PON2 siRNAadenovirus under fmicroscope

圖 2 心肌細(xì)胞中 PON2 表達(dá)的變 2 The changes of PON2 expression in c** P<0.05,vs controlAD group
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2711081