【摘要】：目的:對氧磷酶2(Paraoxonase 2,PON2)是對氧磷酶家族成員之一,在人類組織中廣泛表達,具有抗動脈粥樣硬化及抗氧化應激等作用。目前對PON2的作用機制已有大量的研究,但進一步涉及到細胞內通路的研究較少。本實驗主要通過應用Western blot技術,觀察P0N2是否通過抑制c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路和氧化應激通路對抗氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)誘導的乳鼠心肌細胞損傷。方法:選取1-3日內出生的SD乳鼠,雌雄不限,由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。麻醉乳鼠,取其心臟,進行乳鼠心肌細胞培養(yǎng)。利用具有PON2 siRNA的重組腺病毒轉染乳鼠心肌細胞使其PON2蛋白低表達。用腺病毒空載體、ox-LDL,PON2蛋白和JNK抑制劑SP6000125進行前期處理,最后乳鼠心肌細胞分組為:control組,ox-LDL組,ox-LDL+PON2蛋白組,ox-LDL+SP600125組,control AD組,ox-LDL+control AD組,PON2 siRNA組,ox-LDL+PON2 siRNA組。利用MTT法檢測細胞存活率,半胱天冬酶3/7(caspase3/7)活性檢測試劑盒檢測細胞凋亡變化,Western blot技術檢測JNK的磷酸化水平,Nox2/gp91~(phox)和PON2蛋白表達的變化。結果:1.與control組相比,ox-LDL組細胞存活率明顯降低[(0.400±0.150)vs(0.654±0.153),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+PON2蛋白組與ox-LDL+SP600125組細胞存活率明顯升高[(0.560±0.200),(0.550±0.180)vs(0.400±0.150),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組細胞存活率明顯降低[(0.230±0.110)vs(0.371±0.151),P0.05]。與control組相比,ox-LDL組的caspase3/7活性明顯升高[(11962.33±643.41)vs(6620.5±342.01),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+SP600125組與ox-LDL+PON2蛋白組的caspase3/7活性明顯降低[(7521.80±499.80),(7462.00±402.75)vs(11962.33±643.41),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組的caspase3/7的活性明顯升高[(13562.5±574.42)vs(11816.33±640.21),P0.05]。表明PON2可減少ox-LDL誘導的心肌細胞凋亡,減輕心肌細胞損傷。2.與control組相比,ox-LDL組氧化應激指標Nox2/gp91~(phox)的蛋白表達明顯升高[(1.400±0.140)vs(0.540±0.230),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+PON2蛋白組Nox2/gp91~(phox)的蛋白表達明顯降低[(0.868±0.226)vs(1.400±0.140),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組的Nox2/gp91~(phox)的蛋白表達明顯升高[(1.740±0.140)vs(1.396±0.140),P0.05],表明PON2可抑制ox-LDL誘導的氧化應激反應。3.用攜帶有PON2干擾基因的腺病毒轉染乳鼠心肌細胞后,PON2的蛋白表達明顯降低,表明PON2的低表達模型建立成功。與control組相比,ox-LDL組的JNK的磷酸化水平明顯升高[(0.370±0.020)vs(0.150±0.020),P0.05];與ox-LDL組相比,ox-LDL+PON2的JNK的磷酸化水平明顯降低[(0.204±0.096)vs(0.370±0.020),P0.05];與ox-LDL+control AD組,ox-LDL+PON2 siRNA組JNK的磷酸化水平明顯升高[(0.620±0.060)vs(0.3689±0.024),P0.05],表明PON2可抑制ox-LDL誘導的JNK信號通路的激活。結論:1.PON2可減少ox-LDL誘導的心肌細胞凋亡,減輕心肌細胞損傷。2.PON2可通過抑制氧化應激通路減輕ox-LDL對心肌細胞的損傷。3.PON2可通過抑制JNK信號通路減輕ox-LDL對心肌細胞的損傷。
【圖文】：

圖 1 在熒光顯微鏡下 PON2 siRNA 腺病毒的轉染率he transfection rate of PON2 siRNAadenovirus under fmicroscope

圖 2 心肌細胞中 PON2 表達的變 2 The changes of PON2 expression in c** P<0.05,vs controlAD group
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R54

【參考文獻】

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本文編號：2711081