【摘要】：背景/目的:炎癥反應(yīng)促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化,其特征在于各種炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和釋放。最近有研究表明新型抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-37(IL-37)參與多種炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的疾病。然而,我們對(duì)IL-37在動(dòng)脈粥樣硬化中的潛在調(diào)節(jié)機(jī)制仍知之甚少。本研究目的是為了進(jìn)一步明確IL-37在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用,并研究其可能的潛在機(jī)制。方法:本研究將通過(guò)以下研究進(jìn)行驗(yàn)證:1、檢測(cè)人動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中IL-37的表達(dá);2、研究IL-37過(guò)表達(dá)在小鼠動(dòng)脈粥樣硬化中的作用;3、評(píng)估IL-37在小鼠動(dòng)脈粥樣硬化中的信號(hào)傳導(dǎo)途徑并研究其涉及的潛在機(jī)制。我們通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)人動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中IL-37的表達(dá);通過(guò)免疫熒光共定位染色確定了斑塊中IL-37的細(xì)胞來(lái)源;通過(guò)小鼠轉(zhuǎn)基因過(guò)表達(dá)IL-37研究其在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用;通過(guò)油紅O染色來(lái)檢測(cè)動(dòng)脈粥樣斑塊的大小;通過(guò)Western blot來(lái)檢測(cè)IL-37tg-Apo E-/-小鼠IL-37,IL-18Rα和p-Smad3的蛋白質(zhì)表達(dá)水平;通過(guò)smad3基因缺失或IL-18Rα中和實(shí)驗(yàn)來(lái)研究IL-37在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的d UTP缺口末端標(biāo)記(TUNEL)染色分別測(cè)試體外和體內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)凋亡。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟和血管斑塊中的免疫細(xì)胞。通過(guò)ELISA檢測(cè)IL-37轉(zhuǎn)基因小鼠循環(huán)中IL-37和培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果:免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示:IL-37在人動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中高度表達(dá);細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子免疫熒光染色結(jié)果提示:浸潤(rùn)的CD4+T淋巴細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs),而不是巨噬細(xì)胞,是IL-37的主要細(xì)胞來(lái)源。IL-37轉(zhuǎn)基因的Apo E-/-小鼠表現(xiàn)出其動(dòng)脈粥樣硬化負(fù)荷較Apo E-/-小鼠顯著改善,表現(xiàn)在IL-37tg-Apo E-/-小鼠比Apo E-/-小鼠胸腹動(dòng)脈和主動(dòng)脈根部斑塊面積更小,斑塊中膠原蛋白含量增加,凋亡細(xì)胞減少等。隨后,機(jī)制研究提示:IL-37通過(guò)促進(jìn)T輔助細(xì)胞向抗炎表型分化,通過(guò)降低基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)對(duì)斑塊內(nèi)膠原蛋降解,以及通過(guò)抑制VSMCs凋亡來(lái)抑制炎癥,增加斑塊的穩(wěn)定性。結(jié)論:IL-37可能通過(guò)誘導(dǎo)Th2抗炎細(xì)胞分化,減少M(fèi)MP-2/13介導(dǎo)的膠原蛋白降解,以及抑制SMCs凋亡發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
【圖文】：

18圖 1.1 IL-37 在人動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中高度表達(dá)。A. 有代表性的 IL-37 免疫組化染色圖，，Control 表示無(wú)粥樣硬化斑塊的正常血管，AS 代表有動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的血管；B. IL-37 在人動(dòng)脈粥樣硬化斑塊（n = 7）和無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的正常血管（n = 8）中的表達(dá)的統(tǒng)計(jì)分析；C. IL-37 mRNA 在人動(dòng)脈粥樣硬化（n=3）斑塊和正常動(dòng)脈標(biāo)本（n = 6）中的表達(dá)水平；數(shù)據(jù)以平均值±SD 表示，**表示 p <0.01，***表示 p <0.001與對(duì)照組相比。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文2、CD4+T 細(xì)胞及人血管平滑肌細(xì)胞是斑塊中 IL-37 的主要來(lái)源為了確定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中哪些細(xì)胞是 IL-37 的主要來(lái)源，我們進(jìn)行了 IL-37 與CD4, α-SMA, CD68, CD31 共定位的免疫熒光染色。出乎意料的是，我們發(fā)現(xiàn) IL-37 在CD68+巨噬細(xì)胞中表達(dá)很低（圖 1.2C），甚至在 CD31+的內(nèi)皮細(xì)胞（ECs）中檢測(cè)不到（圖 1.2D）；但卻發(fā)現(xiàn)大量 IL-37 信號(hào)在 CD4+T 淋巴細(xì)胞（圖 1.2A）和 α-SMA+血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）中（圖 1.2B）。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5

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9 李素

本文編號(hào)：2710972