發(fā)布時(shí)間：2020-06-10 06:07

【摘要】：慢性心衰是大多數(shù)心血管疾病的合并癥,死亡率居高不下,其主要死亡原因是心力衰竭和惡性心律失常。而晚鈉電流異常增加導(dǎo)致的惡性心律失常是慢性心衰患者死亡的重要分子機(jī)制。大量研究表明microRNA在心臟相關(guān)疾病中起重要作用,可負(fù)調(diào)控晚鈉電流相關(guān)基因的表達(dá),從而引起晚鈉電流異常增強(qiáng),對患者造成嚴(yán)重后果,本文旨在研究microRNA與慢性心衰晚鈉電流的相關(guān)性。目的:應(yīng)用qRT-PCR以及Western blot技術(shù),研究慢性心衰犬犬心肌及慢性心衰病人血漿中均異常升高的miR-29a對晚鈉電流相關(guān)基因SCN5A表達(dá)的影響,并探索其在慢性心衰惡性心律失常中的作用機(jī)制。方法:1.將健康犬通過右心室非同步起搏模式,起搏頻率(260±10)次/min持續(xù)起搏四周構(gòu)建慢性心衰犬模型(Chronic heart failure,CHF模型)。2.采用基因芯片篩選出慢性心衰犬與健康犬左心室心肌組織中表達(dá)有差異的miRNA,并通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證基因芯片的表達(dá)差異結(jié)果,篩選出表達(dá)有明顯差異的miRNA,再通過qRT-PCR進(jìn)一步驗(yàn)證篩選出的miRNA在慢性心衰病人與健康人的血漿中是否有明顯差異,通過上述結(jié)果篩選出一個(gè)表達(dá)差異比較明顯的研究目標(biāo)miR-29a。3.通過靶基因預(yù)測軟件(Targetscan,miRanda,miRbase)預(yù)測miR-29a的靶基因?yàn)镾CN5A,其編碼蛋白為Nav1.5,通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)一步證明miR-29a與SCN5A之間存在結(jié)合位點(diǎn),即SCN5A是miR-29a的靶基因。4.將miR-29a mimics轉(zhuǎn)染犬心肌細(xì)胞(DCYC)及人心肌細(xì)胞(HCM)。通過Western blot(WB)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-29a的過表達(dá)是否能下調(diào)靶蛋白Nav1.5的表達(dá),并引起晚鈉電流(Late Sodium Current,INaL)異常增強(qiáng)。結(jié)果:通過基因芯片與qRT-PCR技術(shù)篩選出一個(gè)miRNA,即在慢性心衰犬左心室與慢性心衰病人血漿中均異常升高的miR-29a;將miR-29a作為研究對象,對其進(jìn)行靶基因預(yù)測發(fā)現(xiàn)其靶基因?yàn)镾CN5A,雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)顯示miR-29a的靶基因確實(shí)是SCN5A;將miR-29a mimics轉(zhuǎn)染進(jìn)犬及人心肌細(xì)胞,并通過WB實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-29a的過表達(dá)可以抑制SCN5A編碼蛋白Nav1.5的表達(dá)。結(jié)論:miR-29a可以抑制靶基因SCN5A的表達(dá),使Nav1.5蛋白表達(dá)量下降,從而導(dǎo)致晚鈉電流的異常增強(qiáng),進(jìn)而可能導(dǎo)致惡性心律失常的發(fā)生。
【圖文】：

圖 1.1 晚鈉電流示意圖Fig1.1 Schematic diagram of the INaL內(nèi)向復(fù)極儲備電流 INa、ICaL和外向復(fù)極儲備電流并保持動態(tài)平衡，，而 INaL參與了心室復(fù)極全會對病人產(chǎn)生嚴(yán)重后果。

圖 1.2 慢性心衰晚鈉電流增強(qiáng)示意圖he schematic diagram of INaLenhancement in chronic heart fai（B）中的 INaL較正常心�。ˋ）明顯增加，其復(fù)極時(shí) INaL導(dǎo)致了早后除極和遲后除極極易引發(fā)惡性心律
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R541.6;R541.7

【參考文獻(xiàn)】

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3 張曼;王禮琳;張進(jìn);;心臟晚鈉電流——慢性心力衰竭惡性心律失常防治的新靶點(diǎn)[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2015年04期

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本文編號：2705889