【摘要】：目的整合素β樣1基因(Integrin beta-like 1,ITGBL1)定位于染色體13q33.1,從成骨細(xì)胞cDNA文庫(kù)中克隆所得。雖然ITGBL1是EGF樣蛋白家族的一員,但它既不包含跨膜結(jié)構(gòu)域也不包含RGD(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)結(jié)合結(jié)構(gòu)域,這提示了ITGBL1基因可能執(zhí)行著與整合素不同的功能。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明ITGBL1基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。然而ITGBL1基因在髓系腫瘤中的表達(dá)水平和甲基化態(tài)勢(shì)及其臨床意義目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究旨在探索ITGBL1基因在髓系腫瘤中的表達(dá)水平和啟動(dòng)子區(qū)Cp G島的甲基化狀態(tài),并且進(jìn)一步分別研究ITGBL1基因的表達(dá)和甲基化水平與臨床系數(shù)以及患者預(yù)后的相關(guān)性。方法1、收集36例正常對(duì)照、144例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者、60例慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者和20例骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞,運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ITGBL1基因的表達(dá)水平并且進(jìn)一步分析其臨床相關(guān)性。2、采用甲基化特異性PCR和亞硫酸氫鹽測(cè)序方法檢測(cè)29例正常對(duì)照、131例AML患者、60例CML患者和66例MDS患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞中ITGBL1基因的甲基化態(tài)勢(shì)并且進(jìn)一步分析其臨床相關(guān)性。3、運(yùn)用SPSS 20.0軟件對(duì)髓系腫瘤中ITGBL1基因表達(dá)和啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果與對(duì)照組相比,ITGBL1基因在髓系腫瘤中均呈現(xiàn)出不同程度的低表達(dá)和高甲基化態(tài)勢(shì)。1、ITGBL1在AML中的表達(dá)水平和甲基化態(tài)勢(shì)在AML患者中ITGBL1表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(P=0.004)。ITGBL1低表達(dá)組的原始細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯高于高表達(dá)組(P=0.005)。ITGBL1低表達(dá)組良好核型的頻率相對(duì)較低(P=0.028)。核型分析顯示ITGBL1低表達(dá)組患者染色體出現(xiàn)t(15;17)的比例較低(P=0.001),而具有正常染色體核型患者的比例較高(P=0.041)。AML患者中ITGBL1低表達(dá)組患者的完全緩解(CR)率和總體生存期(OS)顯著低于高表達(dá)組患者(P=0.027和P=0.016)。與對(duì)照組相比,AML患者的ITGBL1甲基化水平明顯升高(P0.001)。在所有AML病例和非急性早幼粒細(xì)胞白血病病例中,與ITGBL1低甲基化患者相比,ITGBL1高甲基化患者的OS和無(wú)病生存期(LFS)均明顯縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009和0.023;P=0.043和0.039)。Cox多因素分析證實(shí),ITGBL1甲基化在所有AML患者和非急性早幼粒細(xì)胞白血病患者中可作為影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P=0.030和P=0.020)。同時(shí),誘導(dǎo)治療后獲得CR的11例隨訪AML患者的ITGBL1甲基化水平顯著降低(P=0.001)。根據(jù)Spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)在AML患者中,ITGBL1表達(dá)水平與其甲基化態(tài)勢(shì)水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(R=-0.328,P=0.008)。2、ITGBL1在CML中的表達(dá)水平和甲基化態(tài)勢(shì)在CML患者中,ITGBL1基因表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著降低(P=0.031)。與ITGBL1高表達(dá)組患者相比,低表達(dá)組患者有較低的血小板水平(P=0.005)。而且ITGBL1低表達(dá)組患者有較高的BCR-ABL1水平(P=0.067)。根據(jù)RQ-MSP結(jié)果顯示與對(duì)照組相比ITGBL1基因在CML患者中的甲基化水平呈現(xiàn)高甲基化態(tài)勢(shì)(P=0.039)。臨床相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),ITGBL1高甲基化組患者較低甲基化組患者有較低的血小板水平(P=0.021)。根據(jù)Spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)在CML患者中ITGBL1基因的表達(dá)水平與其甲基化態(tài)勢(shì)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系(R=-0.35,P=0.04)。3、ITGBL1在MDS中的表達(dá)水平和甲基化態(tài)勢(shì)在MDS患者中ITGBL1基因的表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著降低(P=0.037)。同時(shí),與對(duì)照組相比,ITGBL1基因在MDS患者中的甲基化水平呈高甲基化態(tài)勢(shì)(P0.001)。生存分析發(fā)現(xiàn)在MDS患者中ITGBL1高甲基化組患者的OS顯著低于ITGBL1低甲基化組的患者(P=0.014)。Cox多因素回歸發(fā)現(xiàn)在MDS患者中ITGBL1高甲基化在影響患者預(yù)后方面接近于有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.084)。結(jié)論1、ITGBL1低表達(dá)、高甲基化在髓系腫瘤中是常見(jiàn)的一種分子事件;2、ITGBL1高甲基化在AML中可作為影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;3、在AML和CML患者中,ITGBL1甲基化與其表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。
【圖文】：

圖 1.1 TIED 與β整聯(lián)蛋白主要結(jié)構(gòu)特征的比較示意圖。EGF 樣重復(fù)序列根據(jù)它們的交替同源性進(jìn)行編號(hào)和著色。SP：信號(hào)肽；TM：跨膜結(jié)構(gòu)域；Cyto：細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。Fig 1.1 Comparison of Main Structural Features of TIED and β Integrin. EGF-like repeats arenumbered and colorized based on their alternate homology. SP: signal peptide; TM:transmembrane domain; Cyto: cytoplasmic domain.1.2 AML 與表觀遺傳學(xué)調(diào)控急性髓系白血�。ˋML）是一種造血干細(xì)胞（HSC）和祖細(xì)胞的惡性疾病，中位發(fā)病年齡約為 67 歲，每年發(fā)病率約為 3-8/100000[34-36]。其特征在于健康造血細(xì)胞的破壞和低產(chǎn)量，這些改變能夠抑制細(xì)胞的分化并誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖或聚集從而替代正常的造血細(xì)胞，引發(fā)正常細(xì)胞的減少[37, 38]。未成熟細(xì)胞的積累始于骨髓，但大多數(shù)情況下在血液中迅速積聚，有時(shí)會(huì)擴(kuò)散到身體的其他部位，如淋巴

的標(biāo)本分裝成每管 2 微升，置于-80℃冰箱中以備用。2、收集每個(gè)病人的具體臨床資料如：性別、年齡、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、染色體核型等，制成表格以用于分析3、使用 Premier Primer5 和 MethPrimer 軟件分別設(shè)計(jì) ITGBL1 基因的表達(dá)和甲基化引物，，根據(jù)引物序列合成引物，摸索確定 PCR 反應(yīng)體系的條件，分別進(jìn)行RQ-PCR和RQ-MSP擴(kuò)增檢測(cè)大批量樣本中ITGBL1基因的表達(dá)水平和甲基化態(tài)勢(shì)，獲得 Ct 值，計(jì)算相對(duì)量分析結(jié)果。4、設(shè)計(jì) BSP 引物，合成引物后，摸索確定 PCR 反應(yīng)體系條件，PCR 擴(kuò)增后將產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，將產(chǎn)物純化回收、克隆后測(cè)序，分析 CpG 島上甲基化密度。5、將計(jì)算獲得的相對(duì)量錄入臨床資料表中，運(yùn)用 SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)評(píng)價(jià) ITGBL1 基因在髓系腫瘤中的表達(dá)水平和甲基化態(tài)勢(shì)，并分別分析其臨床意義以及 ITGBL1 基因甲基化與其表達(dá)水平的相關(guān)關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R733

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1 連欣悅;ITGBL1在髓系腫瘤中的表達(dá)水平和甲基化態(tài)勢(shì)的臨床意義[D];江蘇大學(xué);2018年

2 李東梅;ITGBL1在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用及轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2677527