發(fā)布時間：2020-05-22 16:27

【摘要】：背景越來越多的研究證據(jù)表明,長鏈非編碼RNA(lncRNA)參與基因表達調控的幾乎所有方面,包括表觀遺傳學,轉錄和轉錄后,參與許多生理和病理條件下的生物學過程,如細胞生長和運動,分化和重編程以及應激反應。在轉錄和轉錄后水平上,基因表達的精細調節(jié)是哺乳動物細胞對內外刺激的反應所必需的。通過在轉錄因子啟動子復合物組成的交替實現(xiàn)轉錄調控,轉錄后調控是通過RNA剪接的選擇性剪接、mRNA的穩(wěn)定性和轉運改變來介導的。LncRNA基因的精細調節(jié),是最普遍的和功能不同的調節(jié)器。它們可以在相對低的表達水平上發(fā)揮作用,它們的調節(jié)可以由各種刺激過程中的刺激引起,包括血管損傷和重塑。血管內皮細胞(VEC)功能障礙在許多心血管疾病如動脈硬化,動脈炎,血栓和斑塊侵蝕的發(fā)病機制中是重要的。參與VEC功能調節(jié)的蛋白質編碼基因已經得到較好的研究。LncRNA在調節(jié)動脈粥樣硬化和其他心血管疾病中的作用引起了人們的關注,但是lncRNA在VEC功能中的確切作用還不清楚。Linc00152已在多種癌組織中表達上調,促進細胞增殖和凋亡轉移,并抑制細胞凋亡。然而,它在非癌癥生物學過程中的作用是未知的。最近的研究表明,linc00152可能在循環(huán)系統(tǒng)中表達,并且對生化應激反應,提示其功能可能不限于致癌作用。目的探討研究了基因間lncRNA-linc00152在靜脈內皮細胞(VEC)的凋亡和轉移中的作用。方法將人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)在配有10%胎牛血清(FBS),100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)。將細胞放在37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培育。將HUVEC在密度為每孔105個孔的12孔培養(yǎng)板中傳代培養(yǎng)。在細胞達到50%匯合時,將ox-LDL(溶于含有0.08μ MEDTA-Na2的PBS)以50 μ g/ml,100 μ g/ml,150 μ g/ml和200 μ g/ml的最終濃度加入到培養(yǎng)細胞中。作為對照,將含有0.08μM MEDTA-Na2的等體積PBS與細胞一起培育。通過載體轉染,定量逆轉錄PCR(qRT-PCR),蛋白質印跡,熒光素酶構建體和活性檢測方法檢測細胞中l(wèi)inc00152 mRNA的表達。統(tǒng)計采用SPSS統(tǒng)計軟件23.0進行統(tǒng)計。通過單因素方差分析和Dunnett's檢驗評估多重比較。如果P0.05,則組間差異被認為是統(tǒng)計學有差異。結果首先,研究發(fā)現(xiàn)氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)處理的人類臍靜脈血管內皮細胞中l(wèi)inc00152以劑量和時間依賴性的方式下調(其中oxLDL氧化低密度脂蛋白是血管內皮功能障礙起始和進展中典型的促炎因子)。其次,功能獲得和功能缺失實驗表明ox-LDL處理的HUVEC中l(wèi)inc00152明顯抑制細胞凋亡和促進轉移。然后我們通過結合miR-4767,發(fā)現(xiàn)linc00152正向調節(jié)Bc12L12和EGFR蛋白的表達。此外,阻斷mir-4767獲得的敲減linc00152造成Bc12L12和EGFR表達減少,從而改變細胞的凋亡和遷移。結論Linc00152有可作為改善血管內皮功能和治療一些心血管疾病的潛在靶點的作用。
【圖文】：

（ｓｉＬｉｎｃ００１５２）的特異性邋ｓｉＲＮＡ。用邋ｐｃＤＮＡ３．１－ｌｉｎｃ００１５２（濃度為邋０．５ｎｇ／ｍｌ，ｌｐｇ／ｍｌ逡逑或邋２ｐｇ／ｍｌ）或邋ｓｉＬｉｎｃ００１５２邋（２０ｎＭ，，４０ｎＭ邋或邋８０ｎＭ）轉染邋ＨＵＶＥＣ。通過實時逡逑定量ＰＣＲ證實ｌｉｎｃ００１５２過表達和ｌｉｎｃ００１５２敲減時發(fā)揮的作用（圖２Ａ和２Ｂ邋）。逡逑然后，用邋ｌｐｇ／ｍｌｐｃＤＮＡ３．１－ｌｉｎｃ００１５２邋或邋４０ｎＭｓｉＬｉｎｃ００１５２邋轉染邋ＨＵＶＥＣ。用逡逑１５０ｐｇ／ｍｌ邋ｏｘＬＤＬ處理或不加１５0ｎｇ／ｍｌ邋ｏｘＬＤＬ處理ＨＵＶＥＣｓ后，分別檢測細胞逡逑凋亡和遷移。在ｏｘ－ＬＤＬ處理的ＨＵＶＥＣ中，ｌｉｎｃ００１５２負調控細胞凋亡（Ｃ）并逡逑正向調節(jié)遷移。Ｌｉｎｃ００１５２過度表達導致沒有ｏｘ－ＬＤＬ處理的ＨＵＶＥＣｓ中細胞凋逡逑亡減少，同時在１２ｈ和２４ｈ明顯抑制細胞凋亡（圖２Ｃ）。Ｌｉｎｃ００１５２敲減時顯著逡逑增加了邋ｏｘ－ＬＤＬ處理的和ｏｘ－ＬＤＬ未處理的ＨＵＶＥＣｓ中的細胞凋亡（圖２Ｃ）。此逡逑外，ｌｉｎｃ００１５２過表達明顯增加了邋ＨＵＶＥＣｓ的遷移能力，并且ｌｉｎｃ００１５２敲減使逡逑ＨＵＶＥＣｓ遷移能力降低了（圖２Ｄ）。逡逑１７逡逑

（邋ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏ．ｕｎｉ－ｐｌｏｖｄｉｖ．ｂｇ／ｍｉｃｒｏｉｎｓｐｅｃｔｏｒ／邋）邋和邋ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ逡逑（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｂｉｓｅｒｖ．ｔｅｃｈｆａｋ．ｕｎｉ－ｂｉｅｌｅｆｅｌｄ．ｄｅ／ｍａｈｙｂｒｉｄ／）。結果顯不邋ｍｉＲ－４７６７邋具有結合逡逑位點（圖３Ａ），結合自由能非常低；（－３２．６千卡／摩爾，補充圖１）。逡逑Ｔａｒｇｅｔ：邋ＭＪ２４２０４．１逡逑ｌｅｎｇｔｈ：邋８２８逡逑ＩｉＲＳＡ：邋ＭＪ３９９２４．！逡逑ｌｅｎｇｔｈ：邋２３邐科逡逑ｍｆｅ：邋－３２．６邋ｋｃａｌ／ｍｏｌ邐ｆＪ｜逡逑ｐ－ｖａｌｕｅ：邋１．０邋酬邋Ｇｄｅ＋ＧＤ邐Ｐ１逡逑Ｐｏｓｉｔｉｏｎ：邋１１３逡逑ｔａｒｇｅｔ邋５’邋Ａ邐Ｕ邋ＣＣＧＵ邋Ｃ邋３’邐ｄＪ逡逑ＧＣＧＧＵＧＣＣ邋ＧＡＧＣ邐ＧＣＣＵＧＵ逡逑ＣＧＣＣＧ邋ＣＧＧ邋ＣＵＣＧ邐ＣＧＧＧＣＧ邐Ｃ＼邐．邋ｒ逡逑＿＂，Ｃ邋Ｃ邋ＵＣ邐Ｃ５－逡逑ｎｆｅ：邋－３２．６邋ｋｃａｌ／ｎｏｌ邐－邋＂Ｗ逡逑補充圖１：邋ｍｉＲ－
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R54

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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相關博士學位論文 前1條

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本文編號：2676275