【摘要】：目的:糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病的并發(fā)癥之一,mi RNAs的改變與DCM的發(fā)生發(fā)展密切相關,通過研究高濃度葡萄糖干預的H9C2心肌細胞的增殖活性、凋亡及細胞內mi R-26a/b表達的變化,進一步過表達/沉默mi R-26a后探索高濃度葡萄糖干預的心肌細胞增殖活性、凋亡改變,從而揭示mi R-26與DCM的發(fā)生發(fā)展之間的關系。方法:采用CCK-8法檢測不同濃度葡萄糖(5.5 mmol/l,15 mmol/l,25 mmol/l,35mmol/l)干預H9C2心肌細胞不同時間后細胞增殖活性的變化;采用流式細胞儀技術檢測不同濃度葡萄糖干預H9C2心肌細胞凋亡率的變化;采用RT-PCR法檢測不同濃度葡萄糖干預的H9C2心肌細胞內mi R-26a/b的水平、高濃度葡萄糖(25mmol/l)干預H9C2心肌細胞不同時間后mi R-26a/b表達水平的變化及C57BL/6J小鼠和ob/ob小鼠心臟、脂肪、肝等組織中mi R-26b水平;采用CCK-8法檢測mi R-26a過表達及沉默后高濃度葡萄糖(25 mmol/l)干預下的H9C2心肌細胞增殖活性的改變;采用流式細胞儀技術檢測mi R-26a過表達及沉默后高濃度葡萄糖(25mmol/l)干預下的H9C2心肌細胞凋亡率的變化。結果:1.CCK-8法檢測不同濃度葡萄糖干預的H9C2心肌細胞增殖活性結果表明:與5.5mmol/l葡萄糖組比較,15 mmol/l、25 mmol/l及35 mmol/l 3組細胞增殖活性均顯著增高(p0.05);2.流式細胞儀技術檢測細胞凋亡結果表明:與5.5 mmol/l葡萄糖組相比,15mmol/l、25 mmol/l及35 mmol/l組的心肌細胞凋亡率均顯著下降(p0.05);3.RT-PCR法檢測不同濃度葡萄糖干預的H9C2心肌細胞內mi R-26a/b水平結果表明:高濃度葡萄糖可下調H9C2心肌細胞內mi R-26a/b的表達,并隨著干預時間的延長,下調更加顯著(p0.05);4.在C57BL/6J小鼠心臟組織中mi R-26b表達水平最高,與C57BL/6J小鼠相比,ob/ob小鼠心臟及白色脂肪組織中mi R-26b水平明顯降低(p0.05);5.mi R-26a過表達可抑制高濃度葡萄糖干預的心肌細胞的增殖活性(p0.05),沉默mi R-26a可增強H9C2心肌細胞增殖活性(p0.05);mi R-26a過表達及沉默均對H9C2心肌細胞凋亡狀態(tài)無明顯影響(p0.05)。結論:1.高濃度葡萄糖可促進心肌細胞增殖,降低細胞凋亡,引起mi R-26a/b表達水平下調;2.miR-26a可影響心肌細胞增殖,并不影響細胞凋亡;3.miR-26可能通過調節(jié)心肌細胞增殖過程參與DCM的發(fā)生發(fā)展。
【圖文】：

1 不同濃度葡萄糖組干預不同時間 H9C2 心肌細胞增殖活性的比較The proliferative activity of H9C2 cardiomyocytes after treated with diconcentrations of glucose for different hours葡萄糖對心肌細胞凋亡的影響濃度葡萄糖干預 H9C2 心肌細胞后,為了驗證不同濃度葡萄胞凋亡狀態(tài)的影響，現(xiàn)采用流式細胞儀技術檢測細胞凋亡狀與 5.5 mmol/l 葡萄糖組相比，15 mmol/l、25 mmol/l 及 35細胞凋亡率均顯著下降（p<0.001）。

與 5.5 mmol/L 葡萄糖組相比，，**** p ＜0.0001, *** p ＜0.001濃度葡萄糖干預對 H9C2 心肌細胞凋亡的影響（A：不同濃度葡萄糖干預對 H9C亡率的比較；B：空染陰性對照細胞凋亡流式圖；C-F：5.5 mmol/l 葡萄糖組, 15 mm葡萄糖組, 25 mmol/l 葡萄糖組, 35 mmol/l 葡萄糖組細胞凋亡流式圖） The apoptosis ratio of H9C2 cardiomyocytes after treated with different concentrationA：Apoptosis ratio of H9C2 cardiomyocytes after treated with different concentrationB：Negative control cell without staining; C-F: 5.5mmol/l Glu group, 15mmol/l Glu gr25mmol/l Glu group, 35mmol/l Glu group）同濃度葡萄糖對心肌細胞中 miR-26a 表達的影響用不同濃度葡萄糖干預 H9C2 心肌細胞 48 h后,為了驗證不同濃度葡萄糖iR-26a 表達水平的變化，現(xiàn)采用 RT-PCR 法檢測各組細胞內 miR-26a 水圖 3 所見：與 5.5 mmol/l 葡萄糖組相比，25 mmol/l 及 35 mmol/l 葡萄糖 miR-26a 表達水平下調，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），而 15 mmol/l 葡胞內 miR-26a 有下調趨勢，差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2;R542.2

【參考文獻】

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本文編號：2675162