【摘要】：目的:研究ox-LDL對內(nèi)皮細胞脂噬的影響,為保護內(nèi)皮細胞、AS性心血管疾病的預防與治療提供理論依據(jù)。方法:ox-LDL孵育內(nèi)皮細胞6 h、12 h、24 h、48 h。MTT法檢測內(nèi)皮細胞活性。油紅O染色的方法分析內(nèi)皮細胞的脂質(zhì)水平。Western blot法分析LC3-II/LC3-I,p62,LAMP1蛋白的表達。透射電鏡觀察內(nèi)皮細胞脂噬泡的形成,免疫熒光共定位實驗觀察LC3與Bodipy共定位及LAMP1與Bodipy共定位情況。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示,和Control組比較,25μg/m L的ox-LDL作用6h、12 h、24 h、48 h,細胞活性未受影響;50μg/m L的ox-LDL作用48h能抑制細胞活性;100μg/m L的ox-LDL作用12 h、24 h、48 h能顯著抑制細胞活性,100μg/m L的ox-LDL對細胞活性影響最大。2.油紅O染色結(jié)果顯示,與Control組比較,ox-LDL作用ECs 6 h,脂滴明顯減少;ox-LDL作用ECs 24 h和48 h,脂滴蓄積明顯增加。3.透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn),與Control組相比,ox-LDL作用6 h,細胞質(zhì)內(nèi)脂噬泡(自噬泡內(nèi)包裹著脂滴)增多,ox-LDL作用24 h和48 h脂噬泡減少;并且ox-LDL作用48 h細胞內(nèi)出現(xiàn)大量的空泡。4.Western blot結(jié)果顯示,與Control組比較,ox-LDL處理內(nèi)皮細胞6 h,LC3-II/LC3-I及LAMP1蛋白表達增高,p62蛋白表達降低;ox-LDL處理內(nèi)皮細胞24 h,LAMP1蛋白表達降低,p62蛋白表達升高,并且ox-LDL處理內(nèi)皮細胞48 h,LC3-II/LC3-I,LAMP1蛋白表達降低,p62蛋白表達升高。5.免疫熒光共定位結(jié)果顯示,與Control組比較,ox-LDL處理內(nèi)皮細胞6h,Bodipy與LC3、Bodipy與LAMP1均發(fā)生大量共定位現(xiàn)象,ox-LDL處理內(nèi)皮細胞24 h和48 h,Bodipy與LC3、Bodipy與LAMP1均發(fā)生少量共定位現(xiàn)象。結(jié)論:ox-LDL作用內(nèi)皮細胞6 h,通過增強脂噬改善脂質(zhì)沉積;而ox-LDL作用內(nèi)皮細胞24 h和48 h則引起脂質(zhì)蓄積,可能與脂噬減弱有關(guān)。ox-LDL作用6 h誘導的內(nèi)皮脂噬增強可能與自噬/溶酶體通路對ox-LDL的降解作用增強有關(guān),ox-LDL作用24 h和48 h脂噬減弱與自噬/溶酶體通路對ox-LDL的降解作用減弱有關(guān)。
【圖文】：

第 3 章 實驗結(jié)果.1 ox-LDL 抑制內(nèi)皮細胞的活性以不同濃度的 ox-LDL 處理 ECs 不同時間 (6 h、12 h、24 h、48 h)，，MT顯示，和 Control 組比較，濃度為 25 μg/mL 的 ox-LDL 作用 6 h、12 h、24 h 細胞活性未受影響；濃度為 50 μg/mL 的 ox-LDL 作用 48 小時能抑制細胞 (P < 0.05)； 濃度為 100 μg/mL 的 ox-LDL 作用 12 h、24 h、48 h 能顯著抑胞活性 (P < 0.05)，100 μg/mL 的 ox-LDL 對細胞活性影響最大 (見圖 3.1)。選擇 100 μg/mL 的 ox-LDL 作用內(nèi)皮細胞 6 h、12 h、24 h、48 h 進行后續(xù)實

與 Control 組比較，ox-LDL 處理內(nèi)皮細胞 6 小時，自噬標記蛋白LC3-II/LC3-I 增高 (P < 0.05)； ox-LDL 處理內(nèi)皮細胞 12 小時和 24 小時，LC3-II/LC3-I 無明顯變化；而 ox-LDL 處理內(nèi)皮細胞 48 小時，LC3-II/LC3-I 降低(P < 0.05)，自噬減弱；提示 ox-LDL 處理 6 小時 ECs 自噬增強，隨著 ox-LDL 作用時間延長，ox-LDL 對 ECs 的損傷超過細胞的自我修復能力時，48 小時自噬減弱（見圖 3.2）。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R54

【參考文獻】

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1 龍石銀;黃良珠;喬新惠;張彩平;高細強;佟麗;田英;;二苯乙烯苷對過氧化氫誘導內(nèi)皮細胞凋亡的影響[J];中國動脈硬化雜志;2011年03期

2 朱冰坡,范利;動脈粥樣硬化的抗氧化治療研究進展[J];中國老年學雜志;2005年04期

本文編號：2674068