【摘要】：目的:(1)心血管疾病在新疆地區(qū)不同民族存在發(fā)病率不一致;為識(shí)別膽固醇關(guān)鍵基因變異和疾病的關(guān)聯(lián)研究,為防治疾病發(fā)生及臨床高危人群制定最佳治療方案提供幫助。(2)探討NPC1L1基因多態(tài)性與人群中膽固醇吸收效率差異的分子機(jī)制研究。(3)探討組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(MLL5)基因多態(tài)性與新疆漢族冠心病的相關(guān)性研究。方法:(1)采用病例對(duì)照研究方法,收集349例LDL-C極低、極高的健康流調(diào)患者;兩組民族、性別、年齡均匹配;利用人類全基因組外顯子測序方法,分析32個(gè)膽固醇相關(guān)基因,分析659個(gè)外顯子片段,分析其基因突變與相關(guān)血脂的關(guān)系。(2)采用流行病健康人群血脂LDL-C極高,極低維、漢、哈人群各200例,采用外顯子測序,分析NPC1L1基因的單核甘酸多態(tài)性,在采用細(xì)胞及動(dòng)物試驗(yàn)分析NPC1L1多態(tài)性與膽固醇吸收效率的分子機(jī)制研究;(3)采用病例-對(duì)照研究,選擇經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診的冠心病患者565例,并使性別、民族、年齡與之相匹配的健康人群對(duì)照組694例,采用PCR的方法,對(duì)MLL5基因進(jìn)行分型,分析MLL5標(biāo)簽SNPs和冠心病的關(guān)系。結(jié)果:(1)篩查膽固醇基因表達(dá)差異32條,本研究第一次利用人類膽固醇關(guān)鍵基因外顯子測序?qū)π陆S吾爾族、哈薩克族、漢族進(jìn)行差異性篩選,初步對(duì)新疆維吾爾族、哈薩克族、漢族三個(gè)民族間血脂關(guān)鍵基因進(jìn)行篩查。維吾爾族相較于其他兩個(gè)民族獨(dú)有的膽固醇相關(guān)基因差異有6條。哈薩克族相較于其他兩個(gè)民族獨(dú)有的1條差異基因,相較于其他兩個(gè)民族獨(dú)有的1條差異基因。說明民族間基因差異表達(dá),對(duì)于防治心血管疾病提供了一定基礎(chǔ)。(2)在新疆地區(qū)篩選的600例血脂異常的健康流調(diào)患者中進(jìn)行NPC1L1基因外顯子測序發(fā)現(xiàn)基因編碼區(qū)的三個(gè)非同義突變和64個(gè)同義突變,R174H,V177I非同義突變和33個(gè)同義突變分布在血清低密度脂蛋白極低組,V1284L非同義突變和31個(gè)同義突變被發(fā)現(xiàn)于血清低密度脂蛋白極高組;(3)我們進(jìn)一步在細(xì)胞和動(dòng)物水平上驗(yàn)證這三個(gè)突變體在膽固醇循環(huán)中的作用,穩(wěn)定性,糖苷酶試驗(yàn),在小鼠上過表達(dá)這三個(gè)突變體的腺相關(guān)病毒,發(fā)現(xiàn)和野生型NPC1L1蛋白相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(4)在新疆地區(qū)漢族人群中,冠心病病例組及其對(duì)應(yīng)的健康照組組的2個(gè)SNP均符合Hardy-Hardy-Weinberg平衡,提示樣本人群能夠代表一般人群;(5)在新疆漢族人群中MLL5基因rs12671368和rs2192932的顯性模型和隱形模型中,冠心病組和對(duì)照組有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在調(diào)整了年齡、性別、高血壓、糖尿病、吸煙、甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和其他風(fēng)險(xiǎn)因素的影響,rs12671368的顯性模型和隱形模型在總的人群中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并且隱形模型在女性中也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;rs2192932的顯性模型和隱性模型在總的人群中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而顯性模型在女性中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;結(jié)論:(1)基因外顯子測序結(jié)果表明血脂相關(guān)基因在民族間有差異表達(dá)變化,特別是維吾爾族和哈薩克族;LDLR,NPC1L1,SREBP基因掌管著膽固醇代謝的主要基因的突變體較一般基因多;(2)從極高極低低密度脂蛋白組發(fā)現(xiàn)的NPC1L1基因的三個(gè)非同義突變R174H,V177I和V1284L可能對(duì)于NPC1L1蛋白的功能沒有明顯的影響;(3)MLL5基因rs12671368的GG基因型和rs2192932的AA基因型,以及兩個(gè)單核苷酸的單體型GA*單體型可能是漢族人群患有冠心病的保護(hù)性遺傳標(biāo)記物。
【圖文】：

只有 A+目的片段+B 形式的）的產(chǎn)物被去除。光梅標(biāo)法將 DNA 文庫中的 DNA 片54 測序的反應(yīng)稱為 PTP（Pico Titer 的直徑為 29μm，而測序直徑為 20μm序試劑加入 PTP 中，使之可上機(jī)測序堿基在泵的控制下依次加入反應(yīng)板，就會(huì)發(fā)一次熒光信號(hào)，通過記錄信發(fā)現(xiàn)和生物酶貢獻(xiàn)比千人組基因庫，以及大型的人類學(xué)當(dāng)測序發(fā)現(xiàn) 8 次出現(xiàn) A 堿基，，而 測序次數(shù) 20，其中成功 8 次�？赡茉� 20 次的測序中，那么其累計(jì)頻率為

第一部分 研究內(nèi)容與方法術(shù)有限公司專業(yè)人員完成。在實(shí)驗(yàn)實(shí)施前認(rèn)真閱讀基因測輸指南。樣本收集者經(jīng)過專業(yè)老師培訓(xùn)，嚴(yán)格掌握病例組外周新鮮血需在 2 天內(nèi)完成 DNA 提取，在提取總 DNA 作，避免污染及 DNA 降解。提取的 DNA 質(zhì)檢合格，符合-80℃冷凍保存，待樣本收集完成后統(tǒng)一運(yùn)送。樣本在運(yùn)輸人負(fù)責(zé)運(yùn)送，避免樣本丟失及損毀。理與分析挑選以及數(shù)據(jù)質(zhì)量匯總ping 以及數(shù)據(jù)量統(tǒng)計(jì)（如圖 1-2）質(zhì)量校正（如圖 1-3-1、1-3-2 數(shù)據(jù)質(zhì)控）s/INDEL Calling點(diǎn)驗(yàn)證 位點(diǎn)注釋
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54

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本文編號(hào)：2663719