【摘要】：背景:心室重構(gòu)是心血管死亡的危險因素,心臟纖維化參與心室重構(gòu)的病理過程。葛根素可抑制心臟纖維化,但其機制尚不明確。目的:本研究圍繞UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)底物與配體激活轉(zhuǎn)錄因子(ligand-activated transcription factors,LATFs)反饋環(huán),探討葛根素調(diào)控自身代謝酶與抑制心臟纖維化的可能共同通路,進(jìn)一步揭示葛根素抑制心臟纖維化的機制。方法:腹主動脈縮窄術(shù)建立壓力超負(fù)荷大鼠模型。超聲心動圖檢測大鼠心臟結(jié)構(gòu)及功能。右側(cè)頸動脈插管檢測大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)。HE染色法和masson染色法檢測大鼠心臟纖維化程度。免疫組化法和western blot法檢測大鼠心臟膠原Ⅰ、膠原Ⅲ及Nrf2的表達(dá)。采用Ang Ⅱ誘導(dǎo)乳鼠心臟成纖維細(xì)胞(NRCF)建立細(xì)胞纖維化模型,CCK-8法檢測NRCF的活性,western blot法檢測NRCF中Nrf2、UGT1A1、膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、P38 MAPK和p-P38 MAPK的表達(dá),免疫熒光法檢測NRCF中Nrf2的表達(dá),熒光顯微鏡照相及熒光酶標(biāo)儀檢測NRCF中活性氧的含量,ChIP法檢測葛根素對Nrf2與UGT1A1的作用。結(jié)果:①葛根素可抑制壓力超負(fù)荷大鼠心肌肥厚和心臟纖維化,表現(xiàn)為降低心臟重量、心室壁厚度、左室收縮末壓以及膠原的沉積(以膠原Ⅰ和膠原Ⅲ為主)的降低及心臟Nrf2的表達(dá)的上調(diào)。②葛根素可抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的NRCF增殖,促進(jìn)Nrf2表達(dá)并向核內(nèi)轉(zhuǎn)移,減少活性氧的產(chǎn)生,從而減少膠原I和膠原瓜的表達(dá)。使用Nrf2siRNA、Nrf2的激動劑和抑制劑均得出同樣的結(jié)果。③western blot法顯示葛根素呈時間依賴性地上調(diào)UGT1A1蛋白的表達(dá)。ChIP結(jié)果也提示葛根素可促進(jìn)Nrf2結(jié)合到UGT1A1的啟動子,上調(diào)自身代謝酶UGT1A1的表達(dá)。④葛根素明顯抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的P38MAPK的磷酸化。P38 MAPK的特異性抑制劑可抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的NRCF的增殖和ROS的產(chǎn)生,減少膠原Ⅰ和膠原Ⅲ的表達(dá),且其作用獨立于Nrf2。結(jié)論:葛根素抑制心臟纖維化作用可能與其激活Nrf2和抑制P38 MAPK的磷酸化有關(guān)。Nrf2是葛根素抑制心臟纖維化及上調(diào)自身代謝酶UGT1A1的共同轉(zhuǎn)錄因子。
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三、結(jié)果逡逑３．１葛根素對大鼠心室重構(gòu)的影響逡逑圖１為４％多聚甲醛處理２４小時的心臟標(biāo)本，肉眼觀察模型組心臟明顯大逡逑于假手術(shù)組，而葛根素治療６周后心臟明顯小于模型組。各組ＳＤ大鼠心臟重量逡逑Ａｆ本重（ｈｅａｒｔ邋ｗｅｉｇｈｔ／ｂｏｄｙ邋ｗｅｉｇｈｔ，ＨＷ／ＢＷ）及心臟重量／脛骨長度（ｈｅａｒｔ邋ｗｅｉｇｈｔ／ｔｉｂｉａｌ逡逑ｌｅｎｇｔｈ，邋ＨＷＡＴＬ）見表１及圖２。從表１及圖２中我們可看出，模型組ＨＷ／ＢＷ逡逑和ＨＷＡＴＬ均較假手術(shù)組明顯增加（Ｐ＜０．０５），而葛根素治療６周后ＨＷ／ＢＷ和逡逑ＨＷ／ＴＬ較模型組明顯降低（Ｐ＜０．０５ＸＳＤ大鼠心臟標(biāo)本Ｈ＆Ｅ染色的結(jié)果（圖３）逡逑顯示與假手術(shù)組比較，，模型組ＳＤ大鼠左室壁明顯增厚，而葛根素治療６周后逡逑ＳＤ大鼠的左室壁厚度有所降低。逡逑丨？

本文編號：2660572