【摘要】：【目的】探討跨膜6超家族成員2(transmembrane 6superfamily member 2,TM6SF2)蛋白在人血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中的表達(dá)情況,以及TM6SF2在VSMC脂質(zhì)蓄積的影響及分子機(jī)制�！痉椒ā�(1)免疫熒光方法檢測體外培養(yǎng)的人VSMCs中TM6SF2表達(dá)情況;分別采用0、10、25、50、75μg/ml的oxLDL處理VSMCs 24 h或50μg/ml oxLDL處理VSMCs 0h、12h、24h、48h,實(shí)時定量PCR和Western Blot檢測細(xì)胞TM6SF2 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。(2)分別以TM6SF2過表達(dá)慢病毒、TM6SF2 siRNA轉(zhuǎn)染VSMCs,再加oxLDL或Dil-oxLDL處理,油紅O染色檢測細(xì)胞中脂質(zhì),熒光顯微鏡觀察細(xì)胞對Dil-oxLDL的攝取情況,總膽固醇試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)總膽固醇的含量;實(shí)時定量PCR、Western blot檢測細(xì)胞上脂質(zhì)攝取受體Lox-1和CD36的表達(dá)。(3)取人尸檢冠狀動脈前降支動脈粥樣硬化(atherosclerosis,As)斑塊,采用免疫組織化學(xué)方法檢測TM6SF2在人As斑塊中的表達(dá)分布情況,免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)檢測TM6SF2與VSMCs在人As斑塊中的共定位情況。【結(jié)果】(1)免疫熒光檢測結(jié)果顯示,TM6SF2在體外培養(yǎng)的人VSMCs中有陽性表達(dá),主要分布在細(xì)胞胞漿中;實(shí)時定量PCR和Western Blot結(jié)果顯示oxLDL呈濃度和時間依賴性上調(diào)VSMCs中TM6SF2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。(2)油紅O染色結(jié)果顯示,與oxLDL單獨(dú)處理組相比,TM6SF2過表達(dá)組細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴明顯減少,而TM6SF2低表達(dá)組細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴明顯增多;熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,TM6SF2過表達(dá)組VSMCs攝取的Dil-oxLDL較oxLDL單獨(dú)處理組增加,TM6SF2低表達(dá)組則減少;總膽固醇分析結(jié)果也顯示,TM6SF2過表達(dá)組VSMCs中總膽固醇含量降低,而TM6SF2低表達(dá)組細(xì)胞中總膽固醇含量則增加;實(shí)時定量PCR和Western Blot結(jié)果則顯示,與oxLDL單獨(dú)處理組相比,TM6SF2過表達(dá)組VSMC中LOX-1和CD36 mRNA和蛋白質(zhì)水平降低,TM6SF2低表達(dá)組情況與之相反。(3)免疫組化結(jié)果顯示,TM6SF2在As斑塊存在陽性表達(dá),陽性染色區(qū)域在中膜和增生的內(nèi)膜中均有分布,以中膜居多;免疫熒光雙標(biāo)檢測結(jié)果顯示在人As斑塊中TM6SF2表達(dá)與VSMCs存在共定位�！窘Y(jié)論】在人VSMCs中存在TM6SF2表達(dá),TM6SF2可以減輕oxLDL誘導(dǎo)的VSMCs脂質(zhì)蓄積,其機(jī)制很可能與TM6SF2下調(diào)細(xì)胞Lox-1和CD36的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R54

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本文編號：2648836