【摘要】：目的:急性心肌缺血可誘發(fā)嚴(yán)重的室性心律失常,能夠?qū)е禄颊哳A(yù)后不良甚至出現(xiàn)心源性猝死。多種因素參與缺血性心律失常的病理過(guò)程,其中交感神經(jīng)以及心臟感覺(jué)神經(jīng)的過(guò)度激活對(duì)于缺血性心律失常的發(fā)生和發(fā)展有著重要影響。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)拮抗急性心肌缺血狀態(tài)下過(guò)度升高的內(nèi)源性孤啡肽可抑制缺血性心律失常的發(fā)生,但其機(jī)制尚不明確。本研究旨在探討內(nèi)源性孤啡肽與β1腎上腺素能受體(β1-AR)在缺血性心律失常過(guò)程的相互作用,進(jìn)一步揭示交感神經(jīng)與心臟感覺(jué)神經(jīng)在心肌缺血早期的關(guān)系。方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用體質(zhì)量為(260±20)g的SPF級(jí)健康雄性SD大鼠。通過(guò)結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(冠脈)制備大鼠急性心肌缺血模型。本實(shí)驗(yàn)分三個(gè)部分進(jìn)行:第一部分內(nèi)源性孤啡肽對(duì)大鼠急性心肌缺血早期室性心律失常和心功能的影響大鼠分為三組即假手術(shù)組(Sham組)、結(jié)扎冠脈組(CAO組)和孤啡肽受體拮抗劑(UFP-101)預(yù)處理組(U+CAO組)。Sham組僅開(kāi)胸穿線但不結(jié)扎冠脈;CAO組開(kāi)胸后結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支;U+CAO組在結(jié)扎冠脈前10 min經(jīng)尾靜脈按1 mL/kg注射特異性孤啡肽受體拮抗劑UFP-101(1×10~-99 mol/L),其余2組給予等容量生理鹽水。記錄分析結(jié)扎前10 min至結(jié)扎后1 h內(nèi)心電圖及LVSP、LVEDP、HR、+dp/dtmax、-dp/dtmax等指標(biāo)變化。第二部分內(nèi)源性孤啡肽對(duì)大鼠急性心肌缺血早期β1-AR表達(dá)的影響根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇結(jié)扎后15 min(心律失常高發(fā)期)和1 h(無(wú)心律失常發(fā)生)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)缺血區(qū)心肌β1-AR在細(xì)胞膜組分以及全細(xì)胞組分的表達(dá)并檢測(cè)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)β1-AR mRNA的變化情況。第三部分急性分離大鼠心肌細(xì)胞模擬在體急性心肌缺血對(duì)β1-AR表達(dá)及分布的影響大鼠麻醉后迅速取其心臟,急性分離左室心肌細(xì)胞。將分離的心肌細(xì)胞懸液分裝于裝有載玻片的6孔板中室溫靜置3 h待其爬片。根據(jù)處理方式分為四組即陰性對(duì)照組(NC組)、去甲腎上腺素(10~-55 mol/L)處理組(NE組)、孤啡肽(10~-66 mol/L)+去加腎上腺素(10~-55 mol/L)共同處理組(N/OFQ+NE組)以及孤啡肽(10~-66 mol/L)處理組(N/OFQ組)。除NC組外,其余各組分別加入相應(yīng)濃度的孤啡肽或去甲腎上腺素或二者的混合物,孵育15 min后加入4%的多聚甲醛固定脫水,而后進(jìn)行免疫熒光染色。結(jié)果:1.各組大鼠心肌缺血后室性心律失常的發(fā)生情況:Sham組大鼠心肌穿線后可出現(xiàn)單發(fā)室性早搏,無(wú)室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)發(fā)生。與Sham相比,CAO組和U+CAO組大鼠CAO后均出現(xiàn)缺血性心律失常,且心律失常發(fā)生集中于缺血后15 min內(nèi)并在15 min左右達(dá)到高峰,30 min后無(wú)心律失常出現(xiàn)。與CAO組比較,UFP-101預(yù)處理顯著降低了室早次數(shù)、室速+室顫的持續(xù)時(shí)間以及心律失常評(píng)分(均P0.05或P0.017),室速+室顫的發(fā)生次數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.內(nèi)源性孤啡肽對(duì)大鼠心功能各項(xiàng)指標(biāo)的影響:結(jié)扎后心功能各指標(biāo)有輕微的變化(其變化幅度均低于基線水平的15%)。與CAO組比較,預(yù)先給予孤啡肽受體拮抗劑導(dǎo)致結(jié)扎后0-15 min時(shí)間段LVSP顯著降低,而LVEDP則顯著升高(均P0.05);而在結(jié)扎后16-30 min、31-45 min以及46-60 min時(shí)間段兩組LVSP與LVEDP差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;兩組其余指標(biāo)(HR、+dp/dtmax和-dp/dtmax)在結(jié)扎前后整個(gè)階段均無(wú)統(tǒng)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.各組大鼠β1-AR蛋白及mRNA的表達(dá):結(jié)扎后60 min內(nèi),β1-AR及其mRNA呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)變化。結(jié)扎后15 min時(shí),與Sham組比較:CAO組全細(xì)胞β1-AR表達(dá)下調(diào),而細(xì)胞膜β1-AR上調(diào),β1-AR mRNA表達(dá)下調(diào)(均P0.05),U+CAO組全細(xì)胞β1-AR、β1-AR mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而細(xì)胞膜β1-AR下調(diào)(P0.05);與CAO組比較:U+CAO組全細(xì)胞β1-AR表達(dá)上調(diào),而細(xì)胞膜β1-AR下調(diào),β1-AR mRNA表達(dá)上調(diào)(均P0.05)。結(jié)扎后1 h時(shí),與Sham組比較,CAO組和U+CAO組全細(xì)胞β1-AR表達(dá)上調(diào),而細(xì)胞膜β1-AR下調(diào),β1-AR mRNA表達(dá)上調(diào)(均P0.05)。4.免疫熒光顯示急性分離大鼠心肌細(xì)胞β1-AR的熒光強(qiáng)度及分布情況:急性分離的大鼠心肌細(xì)胞成桿狀,β1-AR被標(biāo)記為紅色熒光,細(xì)胞核被DAPI標(biāo)記為藍(lán)色熒光。與NC組相比:N/OFQ+NE處理組β1-AR平均光密度降低(P0.05),但其細(xì)胞膜熒光強(qiáng)度顯著強(qiáng)于胞漿;NE以及N/OFQ單獨(dú)處理組未發(fā)現(xiàn)光密度的明顯變化以及細(xì)胞膜熒光強(qiáng)度的改變。結(jié)果提示N/OFQ+NE共同處理可導(dǎo)致心肌細(xì)胞β1-AR表達(dá)下降并引起β1-AR出現(xiàn)顯著外化,而N/OFQ以及NE單獨(dú)處理對(duì)于心肌細(xì)胞β1-AR無(wú)明顯影響。結(jié)論:急性心肌缺血早期心肌細(xì)胞β1-AR顯著外化能夠引起缺血性心律失常,而內(nèi)源性孤啡肽是誘導(dǎo)此過(guò)程β1腎上腺素能受體外化的原因之一,即內(nèi)源性孤啡肽可通過(guò)調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞β1腎上腺素能受體外化介導(dǎo)缺血性心律失常發(fā)生。
【圖文】：

圖 1-1 室性心律失常的類型。A：正常心電圖；B：?jiǎn)伟l(fā)室早；C：室早二聯(lián)律；D：室早三聯(lián)律；E：ST 抬高；F：室性心動(dòng)過(guò)速；G：心室顫動(dòng)1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用 SPSS13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用 LSD-t 檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。非正態(tài)分布計(jì)量資料以 M（P25,P75）表示，采用 Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)，組內(nèi)兩兩比較采用 Mann-Whitney U 檢驗(yàn)，并對(duì)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α'按 Bonferroni 法進(jìn)行校正。2 結(jié) 果2.1 CAO 后心電圖及血流動(dòng)力學(xué)變化情況CAO 前后不同時(shí)間點(diǎn)心電圖和左心室壓力的變化。A-E 分別表示 CAO 前及 CAO

2.2 各組大鼠 CAO 后心律失常發(fā)生情況2.2.1 CAO 后 1 h 內(nèi)大鼠 VA 的時(shí)間分布CAO 后大鼠發(fā)生電生理紊亂，出現(xiàn)缺血性心律失常，且心律失常發(fā)生僅出現(xiàn)在CAO后30 min內(nèi)且集中于缺血后15 min內(nèi)并在15 min左右達(dá)到高峰，CAO后30 min至 1 h 無(wú)心律失常出現(xiàn)。如表 1-1，圖 1-3 所示。表 1-1 CAO 組大鼠缺血 1 h 內(nèi)心律失常的時(shí)間分布時(shí)間VEB VT+VF VT+VF ［M（P25,P75）］（次， x s） （頻數(shù)，只） 發(fā)生次數(shù)（次） 持續(xù)時(shí)間（s）1~15 min 97.0±20.8 7 3.5（0，4.0） 10.7（0，14.8）16~30 min 5.5±1.5 1 0（0，0） 0（0，，0）31~60 min 0 0 0（0，0） 0（0，0）
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R541.7

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本文編號(hào)：2645532