發(fā)布時(shí)間：2020-04-29 15:52

【摘要】：背景和目的:基因突變、細(xì)胞因子、成纖維細(xì)胞均參與了MPNs的演進(jìn)。骨髓纖維化(MF)是MPNs各亞型的共同疾病特征,與骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(BMMSC)、腫瘤成纖維細(xì)胞(CAF)和細(xì)胞因子有關(guān)。但目前有關(guān)影響骨髓纖維化的機(jī)制尚未闡明。本研究通過結(jié)合基因突變、T淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子探討MPNs的異質(zhì)性,并采用蘆可替尼(RUX)處理MPNs細(xì)胞,分析CAF、LOXL-2與MF演進(jìn)的可能關(guān)系,為MPNs患者的治療提供有力的理論依據(jù)。方法:1.采用高通量測(cè)序檢測(cè)125例MPNs患者中127個(gè)相關(guān)基因的突變情況。2.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)123例MPNs患者中T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)水平,采用高通量蛋白芯片檢測(cè)與MPNs相關(guān)的33個(gè)細(xì)胞因子的表達(dá)情況,并采用ELISA進(jìn)一步驗(yàn)證與MF發(fā)生相關(guān)的細(xì)胞因子的含量。3.采用qPCR檢測(cè)正常人和MPNs在RUX治療前后血清中LOXL-2 mRNA的表達(dá)水平,采用Western-blot檢測(cè)正常人和MPNs在RUX治療前后骨髓中有核細(xì)胞CAF標(biāo)志物(α-SMA、FAP)和血清中LOXL-2蛋白的表達(dá)水平,并分析BMMSC中a-SMA和FAP的表達(dá)水平。4.分別觀察正常人和MPNs患者在RUX治療前后BMMSC培養(yǎng)后細(xì)胞的形態(tài),并評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫表型及成骨、成脂能力的變化,檢測(cè)各組細(xì)胞中a-SMA和FAP mRNA和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1.JAK2、CALR、TET2、ASXL1 和DNMT3A是MPNs患者最常見的5個(gè)基因突變;按基因功能分類,MPNs易檢測(cè)到信號(hào)通路和表觀調(diào)節(jié)基因突變;附加突變的異質(zhì)性明顯。2.MPNs患者的CD3+和CD4+T細(xì)胞在ET、PV和PMF中均減少(P0.05),PMF較ET和PV更低(P0.05);JAK2突變者的CD3+和CD4+T細(xì)胞、JAK2和CALR突變者的CD8+CD28-細(xì)胞均低于對(duì)照組(P0.05);有和無附加突變MPNs的CD3+、CD4+和CD8+CD28-細(xì)胞均較對(duì)照組減少,但后者更低(P0.05)。3.MPNs患者的IL-8、VEGF等12種細(xì)胞因子水平均較正常組高(P0.05),IL-15較正常組低(P0.05);MF明顯組的IL-8和VEGF較不明顯組更高(P0.05),ELISA復(fù)核IL-8和VEGF與蛋白芯片結(jié)果一致。4.MPNs患者骨髓中a-SMA、FAP及LOXL-2的mRNA和蛋白的表達(dá)水平均顯著增加(P0.05),RUX治療后a-SMA、FAP及LOXL-2的mRNA和蛋白的表達(dá)水平均顯著降低(P0.05)。5.RUX治療前后MPNs的BMMSC免疫表型和a-SMA、FAP mRNA水平較正常人無明顯差異(P0.05);與正常人相比,MPNs的BMMSC中a-SMA和FAP的蛋白水平均顯著增加(P0.05),經(jīng)RUX治療后,a-SMA和FAP的蛋白水平均下降(P0.05)。結(jié)論:1.MPNs驅(qū)動(dòng)基因突變類型有限,而附加突變按功能分類的異質(zhì)性較明顯,在判斷預(yù)后和疾病演進(jìn)中具有重要價(jià)值,表觀調(diào)節(jié)基因突變是MPNs各亞型中最常見的附加突變類型。2.本研究發(fā)現(xiàn)的少見基因突變與疾病的可能關(guān)系包括:SH2B3和GNAS與發(fā)病;CUX1和IKZF1與進(jìn)展為白血病;CEBPA、STAG2、NF1和PTEN與疾病發(fā)展:KMT2C、PTPN11、ZRSR2和IL7R的作用未明,其中ZRSR2和IL7R在MPNs患者中鮮有報(bào)道,可為進(jìn)一步研究提供線索。3.動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)MPNs患者的淋巴細(xì)胞亞群、IL-8和VEGF的變化,在了解疾病進(jìn)展、MF的程度和判定預(yù)后方面具有臨床應(yīng)用價(jià)值。4.在乏氧環(huán)境下RUX可能通過降低LOXL-2的表達(dá),減少刺激MSC轉(zhuǎn)化為CAF,改善MPNs患者的MF進(jìn)程。
【圖文】：

圖１邋ＥＴ、ＰＶ和ＰＭＦ的生存期逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ邋ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ邋ａｍｏｎｇ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ｗｉｔｈ邋ＭＰＮｓ逡逑

Ｆｉｇｕｒｅ邋２邋Ｔｈｅ邋ｍｏｄｅｌ邋ｏｆ邋ＪＡＫ／ＳＴＡＴ邋ｐａｔｈｗａｙ逡逑目前的理論認(rèn)為：ＪＡＫ２和ＭＰＬ突變直接激活ＪＡＫ－ＳＴＡＴ通路并使骨髓增逡逑殖細(xì)胞因子持續(xù)活化或超敏（見圖２），而ＬＮＫ和ＣＢＬ喪失功能的突變被認(rèn)為逡逑可以消除了邋ＪＡＫ－ＳＴＡＴ的負(fù)調(diào)控。ＣＡＬＲ突變誘導(dǎo)的骨髓增殖的確切機(jī)制尚不清逡逑楚，但小鼠模型己經(jīng)提示了其主要對(duì)血小板的生成產(chǎn)生影響。最近的文獻(xiàn)表明逡逑了邋ＪＡＫ－ＳＴＡＴ激活在ＭＰＮｓ中的中心作用，，但部分概念仍未被厘清，例如，ＭＰＮｓ逡逑患者中同時(shí)存在炎癥狀態(tài)下的異常細(xì)胞因子表達(dá)，而這卻又是癌癥患者中普遍逡逑常見的非特異性現(xiàn)象。此外，迄今為止，使用ＪＡＫ抑制劑的“靶向治療”未能誘逡逑導(dǎo)ＭＰＮｓ中疾病克隆的選擇性抑制Ｍ。逡逑單一的基因突變難以解釋ＭＰＮｓ患者臨床表型及疾病演進(jìn)的多樣性和異質(zhì)逡逑６逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R551.3

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本文編號(hào)：2644742