【摘要】：背景彈性蛋白是彈性纖維的主要組成成分,賦于所在器官以良好的彈性。彈性纖維在許多疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,尤其是心肌梗死、高血壓及主動脈夾層等常見疾病均可造成彈性纖維變化。研究表明成纖維細胞、平滑肌細胞和內(nèi)皮細胞均能分泌原彈性蛋白,而心肌細胞是否也能夠合成和分泌彈性蛋白,尚未見文獻報道。目的探討彈性蛋白在大鼠心肌組織、心肌細胞、H9C2心肌細胞株、人臍靜脈內(nèi)皮細胞株上的表達及分泌情況,旨在為心臟基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床研究提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。方法(1)取6w成年和新生3d內(nèi)的SD大鼠心臟各5例,固定、脫水、包埋后連續(xù)冰凍切片,片厚6μm。(2)取新生3d SD大鼠心臟組織,經(jīng)0.05%胰酶和0.075%的Ⅱ型膠原酶消化,差速貼壁法獲取新生大鼠原代心肌細胞。(3)免疫組織化學(xué)、免疫熒光技術(shù)檢測彈性蛋白在心肌組織、新生大鼠原代心肌細胞、H9C2心肌細胞株、人臍靜脈內(nèi)皮細胞株的表達情況,以及與心肌肌鈣蛋白T的共表達情況。(4)Elisa法檢測細胞株上清液中彈性蛋白的含量。結(jié)果(1)新生和成年SD大鼠的心肌細胞和細胞間質(zhì)中均可見彈性蛋白陽性表達,但呈局域性分布。在心肌細胞橫切面和縱切面上可見彈性蛋白主要表達于細胞質(zhì)內(nèi),細胞核上也可觀察到少量表達。表達彈性蛋白的心肌細胞中肌鈣蛋白T(cTnT)表達陽性,證明其細胞是心肌細胞。(2)彈性蛋白在新生大鼠心肌細胞、H9C2心肌細胞株以及人臍靜脈內(nèi)皮細胞上均見到陽性表達。(3)Elisa法可以檢測到H9C2心肌細胞株上清液中彈性蛋白的存在,但含量較少,而人臍靜脈內(nèi)皮細胞株上清液中未檢測到彈性蛋白的分泌。結(jié)論大鼠心肌細胞、H9C2心肌細胞株、人臍靜脈內(nèi)皮細胞株和心內(nèi)膜內(nèi)皮細胞均表達彈性蛋白。心肌細胞分泌的彈性蛋白主要分布于心肌細胞內(nèi)部,對間質(zhì)的貢獻較少。
【圖文】：

圖 1 SD 大鼠心肌組織彈性蛋白的表達，免疫組織化學(xué)（A、B）和免疫熒光（C、D）顯色標(biāo)尺示 50μmA1：彈性蛋白在小血管周圍集中分布；A2：彈性蛋白在心內(nèi)膜（↑）側(cè)表達較多；B1、B2：彈性蛋白在心肌細胞內(nèi)（分別為橫切面和縱切面）呈強陽性表達C：新生 SD 大鼠心肌組織切片的免疫熒光顯色。C1:DAPI 染色（藍）；C2：心肌肌鈣蛋白 T（綠），C3：彈性蛋白（紅）;C4：C1、C2、C3 的疊加D：成年 SD 大鼠心肌組織切片的免疫熒光顯色。D1:DAPI 染色（藍）；D2：心肌肌鈣蛋白 T（綠），D3：彈性蛋白（紅）;D4：D1、D2、D3 的疊加E:心肌組織彈性蛋白免疫熒光顯色積分吸光度值；F:心肌組織彈性蛋白免疫組織化學(xué)顯色積分吸光度值Fig.1 The expression of elastin in rat myocardium. Immunohistochemistry(A、B) andImmunofluorescence (C、D) staining Bar=50μmA1:The concentrated distribution of elastin around the blood vessel;A2:The concentrated

細粒排列成發(fā)絲樣。彈性蛋白在原代心肌細胞上主要表達于細胞質(zhì)和細胞膜，，細胞核上也可觀察到少量表達（圖2A2）。彈性蛋白在 H9C2 心肌細胞株細胞和細胞團上呈強陽性表達，分布特點與原代心肌細胞類似（圖 2B1、B2）。免疫細胞熒光的結(jié)果更清晰地顯示心肌肌鈣蛋白和彈性蛋白在原代心肌細胞（圖 2C）和 H9C2 心肌細胞株（圖 2D）上呈現(xiàn)共表達，且共表達率近乎 100%。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R54

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 翟新博;武俊芳;郭志坤;汪艷麗;;正常大鼠心室肌彈性纖維和彈性蛋白的增齡變化[J];解剖學(xué)報;2013年01期

2 蔡新華;郭志坤;毛會麗;楊瑞;秦川;;大鼠心肌組織中網(wǎng)狀纖維組織學(xué)構(gòu)筑及增齡變化[J];解剖學(xué)報;2009年01期

3 張寶燕,鄒仲之;彈性蛋白的表達調(diào)控[J];解剖科學(xué)進展;2003年01期

本文編號：2639575