【摘要】：目的:肺動脈高壓發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,涉及多種細(xì)胞多個途徑,而肺巨噬細(xì)胞在肺動脈高壓的發(fā)病機(jī)制中所起作用尚不明確。本研究主要探究雌激素對低氧性肺動脈高壓的保護(hù)作用,以及在此過程中巨噬細(xì)胞表型的變化。方法:將36只雌性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法平均分為6組(各組n=6):假手術(shù)+常氧組、假手術(shù)+低氧組、去勢+常氧組、去勢+低氧組、去勢+常氧+17β雌二醇(E2)組、去勢+低氧+E2組。去勢組即手術(shù)切除卵巢;而非去勢組(假手術(shù)組)則打開腹腔找到卵巢不予處理,直接還納縫合。低氧組置于低氧箱內(nèi)飼養(yǎng),常氧組則給予正�？諝�。去勢+常氧+E2組與去勢+低氧+E2組給予皮下注射E2[20ug/(kg·d)],其余組皮下注射生理鹽水(0.1ml/d)。飼養(yǎng)8周建立低氧性肺動脈高壓模型。通過右心導(dǎo)管檢測每組動物的平均肺動脈壓(mPAP)并稱量左右心室、室間隔以計算右心室肥厚指數(shù)(RVHI)。M1型與M2型巨噬細(xì)胞的測定:免疫熒光檢測M1與M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物iNOS、CD206表達(dá)水平,利用RT-PCR及Western blot法檢測各組iNOS、CD206 mRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.成功建立了HPAH大鼠模型與假手術(shù)+常氧組相比,假手術(shù)+低氧組與去勢+低氧組隨著低氧時間延長出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、毛色晦暗、呼吸加快、進(jìn)食水量逐漸減少,最終大部分呈靜臥狀態(tài),無死亡標(biāo)本。而去勢+低氧+E2組增長速度也減慢,活動度較假手術(shù)+低氧組與去勢+低氧組相比略好,與假手術(shù)組比較,去勢+常氧組、去勢+常氧+E2組變化不明顯。2.各組樣本的mPAP和RVHI與假手術(shù)+常氧組、去勢+常氧組、去勢+常氧+E2相比,假手術(shù)+低氧組與去勢+低氧組的mPAP和RVHI均升高(P均㩳0.05),且符合肺動脈高壓的壓力水平,去勢+低氧+E2組大鼠mPAP和RVHI也相對升高(P均㩳0.05),但低于去勢+低氧組與假手術(shù)+低氧組,提示雌激素可改善低氧性肺動脈高壓。3.各組肺組織的形態(tài)學(xué)改變:與假手術(shù)+常氧組、去勢+常氧組、去勢+常氧+E2相比,假手術(shù)+低氧組與去勢+低氧組肺動脈壁增厚,動脈管腔明顯狹窄,炎癥細(xì)胞浸潤嚴(yán)重,符合肺動脈高壓形態(tài)學(xué)改變,而去勢+低氧+E2組相比去勢+低氧組與假手術(shù)+低氧組,肺動脈管腔出現(xiàn)不同程度的逆轉(zhuǎn),炎癥細(xì)胞浸潤相對減少。4.免疫熒光染色鑒別M1型巨噬細(xì)胞及M2型巨噬細(xì)胞在各組樣本肺組織中的表達(dá):去勢+低氧組M1型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物iNOS蛋白相對表達(dá)量明顯高于假手術(shù)+常氧組(P㩳0.05)。假手術(shù)+低氧組iNOS蛋白表達(dá)低于去勢+低氧組(P㩳0.05),去勢+低氧+E2組iNOS蛋白表達(dá)亦低于去勢+低氧組(P㩳0.05)。去勢+低氧組M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物CD206蛋白相對表達(dá)量高于假手術(shù)+常氧組(P㩳0.05)。去勢+低氧+E2組CD206蛋白相對表達(dá)量則高于于去勢+低氧組(P㩳0.05)。5.RT-PCR及Western blot檢測各組樣本肺組織中iNOS及CD206mRNA、蛋白的表達(dá)水平與常氧組相比,低氧組肺組織iNOS mRNA及蛋白水平均明顯升高,給予E2干預(yù)后iNOS mRNA及蛋白水平較低氧+去勢組下降(P均0.05),但仍高于常氧組(P均0.05);而低氧組肺組織的CD206 mRNA及蛋白水平表達(dá)較常氧組也升高,給予E2干預(yù)后CD206 mRNA及蛋白水平較低氧+去勢組升高(P均0.05)。結(jié)論:長期慢性低氧可誘導(dǎo)HPAH的發(fā)生,在此過程M1型巨噬細(xì)胞、M2型巨噬細(xì)胞表達(dá)均增加,雌激素可能通過降低M1型巨噬細(xì)胞的表達(dá)、促進(jìn)M2型細(xì)胞的極化從而改善肺動脈高壓。
【圖文】：

圖 1 各組大鼠肺動脈形態(tài)學(xué)改變（蘇木精 伊紅染色 ×100）g.1 Morphological changes of pulmonary arteries in rats of each gro(hematoxylin eosin staining x 100)1) :sham operation normoxic group, 2) :sham operation hypoxia gariectomy normoxic group, 4):ovariectomy hypoxia group,ectomy normoxic+E2 group, 6):ovariectomy hypoxia+E2. 免疫熒光染色鑒別 MI 型巨噬細(xì)胞及 M2 型巨噬細(xì)胞在各組樣的表達(dá)。（每張照片陽性的累積光密度值（IOD）以及組織的（AREA）并求出平均光密度值（average optical, AO 值OD/AREA，AO 值越大表明陽性表達(dá)水平越高）（見 Fig.2、F4）勢+低氧組 M1 型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物 iNOS 蛋白相對表達(dá)量

圖 2 各組大鼠免疫熒光染色評價 M1 型巨噬細(xì)胞浸潤（免疫熒光染色 ×200）ig.2 Evaluation of M1 macrophage infiltration by immunofluorescestaining in rats of each group (immunofluorescence staining x 200
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2639107