發(fā)布時間：2020-04-23 13:12

【摘要】：第一部分 EphrinB2調控Stat3和TGF-β/Smad3信號通路相互作用促進心臟纖維化研究目的:心臟纖維化是心室重塑導致心力衰竭的主要病理生理表現(xiàn),對其機制的研究有利于尋找干預靶點。EphrinB2,一種廣泛表達于哺乳動物組織細胞的膜蛋白,在發(fā)育與疾病的血管形成中起著關鍵作用。但有報道,EphrinB2能保護腎臟損傷后纖維化,在皮膚和肺損傷后則促進纖維化,提示EphrinB2存在著臟器特異性的纖維化作用,其在心臟纖維化中的作用尚不清楚。因此,本研究擬探討EphrinB 2在心臟病理性重塑中對心肌纖維化的作用與機制。方法和結果:EphrinB2在心力衰竭病人的心臟標本、小鼠心肌梗死后心臟及血管緊張素Ⅱ誘導的心肌肥厚心臟中表達均顯著升高,伴隨纖維化的加重,肌成纖維細胞的活化增多,膠原沉積增加。予小鼠心肌注射EphrinB2-shRNA慢病毒后,發(fā)現(xiàn)心臟EphrinB2敲低顯著減輕了心肌梗死后心臟纖維化,改善了心功能。同時,運用體外培養(yǎng)的新生小鼠原代心臟成纖維細胞,發(fā)現(xiàn)無論常氧或缺氧環(huán)境,EphrinB2促進了成纖維細胞向肌成纖維細胞的轉化。機制研究發(fā)現(xiàn),EphrinB2的促纖維化作用通過激活Stat3通路和TGF-β/Smad3通路引起。進一步發(fā)現(xiàn),EphrinB2活化Stat3并通過調控Stat3的DNA結合結構域、coil-coil結構域與Smad3的MH2結構域結合促進兩條通路協(xié)同參與EphrinB2介導的心臟纖維化。結論:我們的研究首次闡明了 EphrinB2在心肌損傷后的促心臟纖維化的作用,并通過調控Stat3與TGF-β/Smad3通路相互作用的機制,進一步闡明了心室重塑的機制,為心力衰竭治療提供了新的靶點。第二部分 IL-17A和Stat3在小鼠心臟缺血再灌注損傷后心肌細胞凋亡中的作用與機制研究目的:心肌細胞凋亡是心臟缺血再灌注損傷的主要病理生理機制。IL-17A,一種促炎細胞因子,可直接誘導心肌細胞凋亡,但其具體作用機制尚未闡明。方法和結果:應用體外培養(yǎng)的新生小鼠心肌細胞,構建IL-17A誘導凋亡模型。研究發(fā)現(xiàn):新生小鼠心肌細胞表達IL-17A的受體RA和RC,但不表達IL-17A;外源性IL-17A通過激活iNOS表達誘導心肌細胞凋亡;同時,IL-17A激活Stat3,抑制IL-17A誘導的心肌細胞凋亡。運用ChIP和熒光素酶報告基因實驗,我們證實,Stat3通過特異性結合iNOS基因抑制子,抑制iNOS基因轉錄活性,代償性地拮抗了 IL-17A的促凋亡作用。進一步構建和應用小鼠心臟缺血再灌注損傷模型,發(fā)現(xiàn)缺血再灌注損傷激活了 IL-17A/Stat3通路,而抑制Stat3活化增加了再灌注損傷后iNOS的表達,加重了心肌細胞凋亡。結論:缺血再灌注損傷后IL-17A激活,并通過誘導iNOS表達促進心肌細胞凋亡。同時,IL-17A通過活化Stat3抑制iNOS轉錄,抑制IL-17A介導的心肌細胞凋亡。
【圖文】：

與正常心臟相比，擴心病晚期心力衰竭的心肌排列極為紊亂，，伴有大量的間質組逡逑織浸潤。免疫組化結果提示，晚期衰竭心臟ＥｐｈｒｉｉｉＢ２表達升高，伴隨成纖維細胞向逡逑肌成纖維細胞激活的標志物ａ－ＳＭＡ表達上調（圖１）。Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ結果進一步證實，逡逑人心力衰竭的心臟ＥｐｈｒｉｎＢ２表徸顯著增多，Ｉ型肢原沉積增加，心肌纖維化加重（圖逡逑２）。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑Ｎｏｒｍａｌ邐ＤＣＭ邋ｐａｔｉｅｎｔ邐ｇ邋１０逡逑ｐ—－ｒｗｐ＂￣￣￣！邋ａ邋Ｔ逡逑灥邐、：，？Ｂ邋七邐？邋ｅ逡逑？邐ｌ＊邋．１＾－Ｊ邐ｃ逡逑ｔ／５邐Ｓ邐４邐■逡逑邐Ｊ邋—邋邐ｉ邋0Ｊ邐逡逑—：邐邋邋邋邋邋￡■邐Ｎｏｒｍａｌ邐ＤＣＭ逡逑ｃｎ邐邐邐逡逑１邋邐邐邋邐邋ｃ逡逑Ｓ邐——Ｉ邐＇、、邐？邐＿ｙｉ逡逑廣？邐－邐ｔ，邐１５１邐？逡逑邐邐邋ｌ邋？邋＼ｔ邋％邋■■邐＿邋ｌ邐ｇ逡逑／邋＾邋Ｆ－邋■＞！邐１１０＜邐——逡逑ａ邋卜”邐ｃ邐－１—逡逑ｋ，邐—￣Ｉ邋■邋Ｉ邋，逡逑＜邐，，邐邐１邐?

浙江大學博士學位論文邐正文第一部分結果逡逑Ａ．上：正常人（Ｎｏｒｍａｌ）心臟標本與擴張型心肌病人（ＤＣＭ）心臟標本ＨＥ染色逡逑代表圖；中、下：Ｎｏｒｍａｌ和ＤＣＭ心屚標本ＥｐｈｒｉｎＢ２和ａ－ＳＭＡ的免疫組化染色逡逑代表圖。Ｂ－Ｃ．免疫組化染色ＥｐｈｒｉｎＢ２和ｏｔ－ＳＭＡ的半定量統(tǒng)計圖。標尺為１００ｐｍ，逡逑＊代表邋Ｐ＜０．０５。逡逑
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R54

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1 張娟娟;;運動與心肌細胞凋亡[J];山西體育科技;2011年03期

2 陳飛;陳s

本文編號：2637762