【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)及其并發(fā)癥是導(dǎo)致人類死亡的“頭號(hào)殺手”,也是心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素之一。大量研究表明,動(dòng)脈粥樣硬化是一種復(fù)雜的多因素慢性炎性血管疾病,其中血管平滑肌細(xì)胞(Vascular Smooth Muscle Cell;VSMC)的異常增殖是其關(guān)鍵因素。因此,靶向治療平滑肌細(xì)胞的異常增殖已經(jīng)成為治療動(dòng)脈粥樣硬化的熱點(diǎn)。小核糖核酸(microRNA;miRNA)是長度約為22個(gè)核苷酸的小的非編碼核糖核酸。miRNA是一種高效且特異的基因調(diào)節(jié)因子,可調(diào)節(jié)靶蛋白并參與基本的生物過程(包括細(xì)胞分化,增殖,凋亡和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑),在基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)中起重要作用。小窩蛋白-1(Caveolin-1;Cav-1)能夠在抑制腫瘤的生長,調(diào)節(jié)肺泡的呼吸作用,介導(dǎo)胞吞作用與信號(hào)等方面起重要作用。但是Cav-1在SD大鼠VSMC中的作用還尚未見相關(guān)報(bào)道。為了探究Cav-1蛋白在大鼠VSMC中的作用,本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)并鑒定SD大鼠平滑肌原代細(xì)胞,應(yīng)用SiRNA干擾Cav-1的表達(dá)確定Cav-1對(duì)細(xì)胞增殖起負(fù)調(diào)控作用。通過TargetScan預(yù)測(cè),Cav-1與miR-204-5p之間有相互作用。研究報(bào)道中指出,microRNA-204-5p(miR-204-5p)是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的重要因子,在人類乳腺腫瘤,小鼠乳腺腫瘤以及淋巴瘤中都具有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖的作用,在內(nèi)皮細(xì)胞中,也體現(xiàn)了凋亡相關(guān)的作用。然而,miR-204-5p是否會(huì)在VSMC中起作用,以及如何通過特定的靶基因來調(diào)節(jié)VSMC的功能,這些問題還有待于進(jìn)一步的研究。為了進(jìn)一步探究miR-204-5p與Cav-1的相關(guān)性及在VSMC中的作用,轉(zhuǎn)染miR-204-5p模擬物與抑制劑,檢測(cè)相關(guān)基因與蛋白的表達(dá)水平,檢測(cè)細(xì)胞活性,周期,凋亡以及關(guān)鍵通路蛋白的表達(dá)。建立SD大鼠AS模型并測(cè)定基因與蛋白水平。上述實(shí)驗(yàn)證明,miR-204-5p靶向大鼠VSMC中的Cav-1,且降低Cav-1蛋白的表達(dá)、影響VSMC增殖活性、促進(jìn)增殖信號(hào)通路蛋白PPI3K/PI3K的表達(dá)。初步解析了miR-204-5p及其靶基因Cav-1調(diào)控VSMC功能的作用機(jī)制,為miR-204-5p靶向Cav-1調(diào)控大鼠VSMC的相關(guān)功能提供了理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

可以看見斑塊內(nèi)膜的表面破潰，有裂開，組織脫落和糜爛損細(xì)胞中釋放，形成血栓和腫塊。此時(shí)，患者會(huì)產(chǎn)生不穩(wěn)定型和猝死等癥狀[11, 12]。動(dòng)脈粥樣硬化的治療方式是心血管疾病領(lǐng)域重大的課題之一療法、藥物療法、飲食療法、納米療法、抗炎性療法、以及療法等都是減輕或治療不同病因動(dòng)脈粥樣硬化病征的良好方化和移植后動(dòng)脈硬化的特征都是血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)的的積累。平滑肌細(xì)胞異常增殖，是動(dòng)脈粥樣硬化已知的一種針對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖的治療方法是有探索意義的。

ha 切割成為前體 miRNA (pre-miRNA)。在最初的剪切后，pre-miRN蛋白 exportin-5 的作用下由核內(nèi)轉(zhuǎn)到胞質(zhì)中，然后由另一種 RNar 進(jìn)一步切割產(chǎn)生成熟的 miRNA。這些成熟的 miRNA 與其他蛋白質(zhì) RISC (RNA-induced silencing complex) 復(fù)合體，，從而引起靶 mRN或者翻譯抑制[70]。miRNA 與靶 mRNA 的互補(bǔ)程度可能決定了 mRNA化被阻斷的機(jī)制。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)完全互補(bǔ)或接近完全互補(bǔ)可以誘導(dǎo) RISA 的降解，部分互補(bǔ)可以通過阻斷核糖體對(duì) mRNA 的信號(hào)通路來A 的翻譯。由于每個(gè) miRNA 都有數(shù)百或數(shù)千個(gè) mRNA 靶點(diǎn)，因此它編碼基因組的一大部分。miRNA-coding 基因的調(diào)控是有重要作用的，可以參與任何類型的病理生理過程和途徑，如 b 細(xì)胞生存(miR-1-16-1)， b 細(xì)胞譜系的命運(yùn)(mir-181)，大腦模式(mir-430)，胰腺細(xì)胞胰(mir-375)，脂肪細(xì)胞發(fā)展(mir-145)細(xì)胞增殖控制(mir-125-b 和 let-7)，存(let-7 家族)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R543.5

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本文編號(hào)：2633529