【摘要】：第一部分丹參素和丹皮酚對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓的防治作用背景:低氧性肺動(dòng)脈高壓(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)是一種常見的呼吸系統(tǒng)疾病,主要表現(xiàn)肺血管阻力增加,肺血管結(jié)構(gòu)重建,肺動(dòng)脈壓力進(jìn)行性上升。到目前為止,臨床上還沒(méi)有能夠根治肺動(dòng)脈高壓的特效藥物。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth musle cell,PASMC)的增殖在HPH的病理生理過(guò)程中起到重要作用,而一些抗平滑肌細(xì)胞增殖的藥物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已證明對(duì)HPH具有良好的治療作用。由丹參和牡丹皮組成的傳統(tǒng)中藥驗(yàn)方為中藥標(biāo)準(zhǔn)制劑,其中丹參的主要有效成分之一丹參素具有保護(hù)血管內(nèi)皮功能,促進(jìn)血管舒張的功能;牡丹皮的主要有效成分丹皮酚則具有抗炎、抗氧化、抗高血壓等多方面的作用,但在HPH的防治中丹參素與丹皮酚聯(lián)合使用是否有效,尚未見研究報(bào)道。本課題將通過(guò)建立HPH動(dòng)物模型來(lái)初步研究丹參素、丹皮酚及丹參素與丹皮酚聯(lián)合使用對(duì)HPH的抑制作用及可能機(jī)制。目的:研究丹參素、丹皮酚及丹參素與丹皮酚聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓的防治作用。方法:成年SD大鼠隨機(jī)分為:常氧組、低氧組(疾病模型組)、不同劑量藥物預(yù)防組和不同劑量藥物治療組,通過(guò)檢測(cè)各組大鼠的右心室壓力(平均肺動(dòng)脈壓)、右心肥厚指數(shù)和平均左頸總動(dòng)脈壓,觀察并對(duì)比丹參素、丹皮酚及丹參素聯(lián)合丹皮酚對(duì)大鼠HPH的防治作用效果。結(jié)果:預(yù)防性給予160mg/kg、320 mg/kg丹參素均可以顯著降低低氧大鼠的右心室壓力和右心室肥厚指數(shù),有效預(yù)防大鼠HPH的發(fā)生,但兩組效果沒(méi)有明顯差異。在大鼠HPH形成后,治療性給予不同劑量的丹參素則未見明顯改善效果。不同劑量的丹皮酚在防治大鼠HPH中未見顯著性效果。丹參素與丹皮酚聯(lián)合應(yīng)用預(yù)防給藥也可明顯抑制大鼠HPH的發(fā)生,但在預(yù)防效果方面,單獨(dú)應(yīng)用丹參素和丹參素與丹皮酚聯(lián)合應(yīng)用給藥效果無(wú)顯著性差異。小結(jié):預(yù)防性給予丹參素可以顯著降低低氧大鼠的右心室壓力和右心室肥厚指數(shù),從而有效預(yù)防大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生。第二部分丹參素對(duì)HPH肺血管重構(gòu)的作用及機(jī)制背景:HPH是以肺動(dòng)脈持續(xù)收縮、結(jié)構(gòu)重建及肺動(dòng)脈壓力進(jìn)行性上升為特征的一種常見的呼吸系統(tǒng)疾病,由低氧或轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)引起的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)的過(guò)度增生,最終導(dǎo)致肺動(dòng)脈重構(gòu),是形成HPH的重要作用機(jī)制。丹參素(Dan Shen Su),是從中藥丹參中提取的一種水溶性酚酸類化合物,大量研究證明,丹參素具有擴(kuò)張冠脈、抗凝、抗心肌缺血缺氧、抗細(xì)胞過(guò)度增生、抗心肌重構(gòu)等多種心血管保護(hù)作用,但丹參素是否具有抑制HPH的肺動(dòng)脈重構(gòu)作用,到目前為止尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。本課題將通過(guò)建立低氧性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型來(lái)初步研究丹參素對(duì)HPH肺血管重構(gòu)的抑制作用及其可能作用機(jī)制。目的:探討丹參素對(duì)HPH肺血管重構(gòu)的作用及可能的作用機(jī)制。方法:成年SD大鼠隨機(jī)分為:(1)常氧組;(2)常氧+丹參素組;(3)低氧組;(4)低氧+丹參素組;按分組分別腹腔注射丹參素(每日160mg/kg),檢測(cè)各組大鼠肺動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)、肺動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué)及右心室肥厚指數(shù),應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組大鼠肺組織中的TGF-β、Smad3的mRNA表達(dá)水平。Western blot法檢測(cè)肺組織TGF-β、Smad3、p-Smad3蛋白水平。結(jié)果:丹參素明顯抑制了低氧組TGF-β的mRNA及TGF-β和p-Smad3蛋白在肺組織中的表達(dá)。小結(jié):丹參素可能通過(guò)抑制低氧激活的TGF-β-Smad3信號(hào)通路,抑制了低氧性肺動(dòng)脈高壓模型大鼠的肺動(dòng)脈結(jié)構(gòu)重建及肺動(dòng)脈壓力的升高。第三部分丹參素對(duì)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制背景:HPH是一種常見的呼吸系統(tǒng)疾病,由低氧或TGF-β引起的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)的過(guò)度增生,在HPH的病理生理過(guò)程中起著較為重要的作用。丹參素是否能夠抑制HPH肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增生,尚無(wú)相關(guān)報(bào)道,本課題將通過(guò)體外分離并培養(yǎng)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞、肺血管外膜成纖維細(xì)胞(pulmonary artery fibroblasts PAFs)及肺泡巨噬細(xì)胞系NR8383在細(xì)胞水平來(lái)初步研究丹參素對(duì)HPH肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用及其可能作用機(jī)制。目的:觀察丹參素對(duì)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響,探討在細(xì)胞水平,丹參素抑制大鼠HPH發(fā)生的可能機(jī)制。方法:分別培養(yǎng)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)、大鼠肺動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞(PAFs)及肺泡巨噬細(xì)胞NR8383,采用臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)檢測(cè)丹參素在細(xì)胞水平的安全劑量;采用MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察丹參素對(duì)PASMC增殖的影響;qRT-PCR法檢測(cè)NR8383和PAFs表達(dá)TGF-β的變化;ELISA法檢測(cè)NR8383和PAFs分泌TGF-β;Western blot檢測(cè)丹參素對(duì)TGF-β、Smad3表達(dá)的影響。結(jié)果:丹參素可以顯著抑制低氧誘導(dǎo)的PASMC增殖,明顯抑制低氧對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞NR8383和PAFs合成、分泌TGF-β的刺激作用。丹參素對(duì)低氧條件下及TGF-β預(yù)處理的PASMCs增殖有明顯抑制作用。丹參素可以抑制TGF-β對(duì)p-Smad3表達(dá)的上調(diào)作用。小結(jié):丹參素可以有效抑制低氧誘導(dǎo)的PASMCs增殖,減輕低氧條件下PAFs和肺泡巨噬細(xì)胞NR8383細(xì)胞對(duì)TGF-β的分泌。同時(shí),丹參素可以顯著抑制低氧條件下TGF-β在PASMCs中的蛋白表達(dá);抑制Smad3磷酸化。結(jié)論:預(yù)防性給予丹參素可以改善低氧大鼠右心室重構(gòu)及肺動(dòng)脈重構(gòu),從而預(yù)防大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生。其機(jī)制可能是丹參素通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β-Smad3通路,抑制低氧誘導(dǎo)的PASMCs增殖而實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

圖 1-1 預(yù)防性給予丹參素后不同處理組大鼠的右心室壓力（平均肺動(dòng)脈壓）、右心肥厚指數(shù)和平均左頸總動(dòng)脈壓的影響Fig.1-1 Preventive effects of danshensu on HPH in rats. 160mg/kg and320mg/kg Danshensu decreased the right ventricle systolic pressure (RVSP)and the right ventricle hypertrophy index [RV / ( LV + S)] in HPH rats, buthad no such effects on 80mg/kg Danshensu.* P < 0.05 vs normoxia group(N),#P < 0.05 vs hypoxia group (H). Data are expressed as mean ± S.D.

圖 1-2 治療性給不同劑量予丹參素后對(duì)大鼠的右心室壓力（平均肺動(dòng)脈壓）、右心肥厚指數(shù)和平均左頸總動(dòng)脈壓的影響Fig.1-2 Therapeutic effects of danshensu on HPH in rats.Danshensu had nosignificant difference between the treatment groups.* P<0.05 vs normoxiagroup (N). Data are expressed as mean ± S.D.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2631860