【摘要】：研究目的:構(gòu)建大鼠H9c2心肌肥厚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?探索心肌肥厚細(xì)胞中鋅離子水平及鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7的表達(dá)變化,驗(yàn)證鋅穩(wěn)態(tài)對心肌細(xì)胞的影響。研究方法:第一部分建立心肌肥厚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?本課題選擇大鼠胚胎心臟組織中的H9c2心肌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對象,在相同培養(yǎng)條件下隨機(jī)分為對照組及實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組利用血管緊張素II(Ang Ⅱ 0.2uM)誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞24小時培養(yǎng)成心肌肥厚細(xì)胞,通過倒置顯微鏡比較兩組心肌細(xì)胞形態(tài)差異、利用實(shí)時定量PCR(Q-PCR)方法檢測兩組細(xì)胞心肌肥大因子ANP、BNP、β-MHC的mRNA水平表達(dá)情況、利用Western Blot(WB)方法檢測BNP的蛋白水平表達(dá)情況。第二部分檢測H9c2心肌細(xì)胞中鋅離子水平及鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7的表達(dá)情況:心肌肥厚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒊晒?應(yīng)用電感耦合等離子原子發(fā)射光譜法(ICPOES)檢測對照組(Control)及實(shí)驗(yàn)組(Ang Ⅱ)H9c2心肌細(xì)胞中鋅離子濃度,應(yīng)用Q-PCR及Western Blot方法分別檢測兩組心肌細(xì)胞中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)情況。第三部分驗(yàn)證不同濃度鋅離子對心肌細(xì)胞中Zip7表達(dá)及鋅穩(wěn)態(tài)的影響:在構(gòu)建心肌肥厚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统晒Φ幕A(chǔ)上,通過外源鋅離子干預(yù)重新進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn):對照組(Control)、對照組加鋅離子螯合劑10uM(Control+TPEN)、實(shí)驗(yàn)組(Ang Ⅱ)、實(shí)驗(yàn)組加鋅離子螯合劑10uM(Ang Ⅱ+TPEN)、實(shí)驗(yàn)組加氯化鋅1uM及鋅離子載體(Ang Ⅱ+Zn1)、實(shí)驗(yàn)組加氯化鋅5uM及鋅離子載體(Ang Ⅱ+Zn5)、實(shí)驗(yàn)組加氯化鋅10uM及鋅離子載體(Ang Ⅱ+Zn10);利用Q-PCR及Western Blot方法分別檢測各組H9c2心肌細(xì)胞中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7、BNP的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)情況。研究結(jié)果:1.通過倒置顯微鏡比較兩組心肌細(xì)胞形態(tài)差異,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞胞體直徑變長,細(xì)胞表面積變大,細(xì)胞間無空隙。Q-PCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞ANP、BNP、β-MHC的mRNA水平表達(dá)均高于對照組(P0.05),Western Blot結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞BNP的蛋白水平表達(dá)高于對照組(P0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.ICPOES結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞中鋅離子濃度明顯高于對照組(P0.05)。Q-PCR及Western Blot結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)均高于對照組(P0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.給予不同濃度鋅離子干預(yù)H9c2細(xì)胞后Q-PCR及Western Blot結(jié)果顯示:(1)Control+TPEN組H9c2心肌細(xì)胞中Zip7的mRNA及蛋白表達(dá)水平均高于Control組(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;(2)Ang Ⅱ+TPEN組H9c2心肌細(xì)胞中Zip7的mRNA及蛋白表達(dá)水平均高于Ang Ⅱ組(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;(3)給予氯化鋅干預(yù)后H9c2心肌肥厚細(xì)胞中Zip7的mRNA及蛋白表達(dá)水平均低于Ang Ⅱ組(P0.05),隨著氯化鋅濃度的增加,心肌細(xì)胞中Zip7的表達(dá)水平呈梯度下降趨勢,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;(4)Control+TPEN組H9c2心肌細(xì)胞中BNP的mRNA及蛋白表達(dá)水平均高于Control組(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;(5)Ang Ⅱ+TPEN組H9c2心肌細(xì)胞中Zip7的mRNA及蛋白表達(dá)水平與Ang Ⅱ組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義;(6)給予1uM氯化鋅干預(yù)后,H9c2心肌肥厚細(xì)胞中BNP的表達(dá)水平與Ang Ⅱ組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義,隨著氯化鋅濃度的增加,心肌細(xì)胞中BNP的表達(dá)水平低于Ang Ⅱ組(P0.05),呈梯度下降趨勢,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)論:1.本研究在細(xì)胞水平成功利用Ang Ⅱ誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞構(gòu)建心肌肥厚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?.心肌肥厚細(xì)胞中鋅離子濃度與鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7表達(dá)水平均明顯升高。3.心肌細(xì)胞中鋅離子水平與鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。給予鋅離子干預(yù)后心肌肥厚細(xì)胞中BNP的表達(dá)水平有所下降,初步證實(shí)維持鋅穩(wěn)態(tài)對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用,但具體的保護(hù)作用機(jī)制有待深入研究。
【圖文】：

構(gòu)建心肌肥厚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ头纸M示意圖

圖 9.給予不同濃度氯化鋅以及鋅離子螯合劑分組示意圖如圖 9 所示，在心肌肥厚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统晒Φ幕A(chǔ)上，給予不同濃度氯化鋅及鋅離子螯合劑進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn)：對照組（Control）、對照組加鋅離子螯合劑10uM（Control+TPEN）處理 2h、實(shí)驗(yàn)組（Ang II）、實(shí)驗(yàn)組加鋅離子螯合劑（AngII +TPEN）處理 2h、實(shí)驗(yàn)組加氯化鋅 1uM 及鋅離子載體 4uM（Ang II +Zn1）處理 30min、實(shí)驗(yàn)組加氯化鋅 5uM 及鋅離子載體 4uM（Ang II+Zn5）處理 30min、實(shí)驗(yàn)組加氯化鋅 10uM 及鋅離子載體 4uM（Ang II +Zn10）處理 30min。4.2 Q-PCR 法檢測各組心肌細(xì)胞 Zip7 及 BNP 的 mRNA 水平表達(dá)按照前文實(shí)驗(yàn)步驟利用 Q-PCR 方法檢測各組 H9c2 心肌細(xì)胞中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip7 及 BNP 的 mRNA 水平表達(dá)情況（參照 2.4.1.2）。4.3 WB 法檢測各組心肌細(xì)胞 Zip7 及 BNP 的蛋白水平表達(dá)按照前文實(shí)驗(yàn)步驟利用 WB 方法檢測各組 H9c2 心肌細(xì)胞中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體 Zip7
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R541.6

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本文編號：2630635