【摘要】：[背景]炎癥浸潤和基質降解是腹主動脈瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)兩大重要的病理機制。巨噬細胞和主動脈平滑肌細胞是參與AAA形成最重要的細胞,可以通過分泌基質金屬蛋白(matrix metalloproteinases,MMPs)和炎性因子,誘導AAA的發(fā)生發(fā)展。吸煙是引起AAA重要并可控的因素。由alpha7煙堿乙酰膽堿能受體(alpha7 nicotine acetylcholine receptor,α7-nAChR)和傳出迷走神經(jīng)、神經(jīng)遞質乙酰膽堿組成的膽堿能抗炎通路可抑制炎癥反應,治療炎癥性疾病。[目的]本研究目的是明確α7-nAChR(采用選擇性激動劑PNU-282987)是否影響尼古丁誘導巨噬細胞(RAW264.7細胞)和主動脈平滑肌細胞(MOVAS細胞)MMPs和炎性因子的分泌及研究其潛在可能的分子機制。[方法和結果]首先,給予RAW264.7和MOVAS細胞10 ng/ml的尼古丁刺激0,10,20,30,60和120 min。其次,給予0,1,10,100ng/ml尼古丁刺激RAW264.7和MOVAS細胞30 min。結果顯示,尼古丁誘導RAW264.7細胞ERK1/2和c-Jun的磷酸化蛋白的表達。MEK1/2高度選擇性抑制劑U0126抑制尼古丁誘導ERK1/2磷酸化蛋白的高表達,進而下調了尼古丁誘導c-Jun的磷酸化及MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES蛋白和mRNA的高表達。同樣的,尼古丁可以顯著提高了MOVAS細胞的c-Jun磷酸化蛋白的表達水平,促進了MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES蛋白和mRNA的表達。予PNU-282987預處理RAW264.7和MOVAS細胞后,發(fā)現(xiàn)尼古丁誘導的RAW264.7細胞ERK1/2和c-Jun磷酸化及MOVAS細胞c-Jun磷酸化明顯受到抑制。進而,尼古丁誘導的MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES蛋白和mRNA的高表達顯著下調。[結論] α7-nAChR在巨噬細胞中通過調節(jié)ERK1/2/AP-1(c-Jun)信號通路抑制尼古丁誘導MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES表達的上調,在主動脈平滑肌細胞中通過調節(jié)AP-1(c-Jun)信號傳導抑制尼古丁誘導MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES表達的上調。α7-nAChR激動劑有望成為AAA新的治療方案。
【圖文】：

圖 1. 尼古丁誘導 RAW264.7 細胞磷酸化 ERK1/2 和 c-Jun 蛋白的高表達。A）10 ng/ml 尼古丁刺激 RAW264.7 細胞 0，10，20，30，60 和 120 min。（E）0，0 和 100ng/ml 尼古丁刺激 RAW264.7 細胞 30 min。收集細胞裂解產(chǎn)物，用 Western b測定 p-ERK1/2，ERK1/2，p-c-Jun，c-Jun，p-p65 和 p65 的蛋白水平。p-ERK1/2（B 和），p-c-Jun（C 和 G）和 p-p65（D 和 H）的條帶灰度值（均數(shù)±標準差）使用圖像 J 進行測定，所有測量值均來自三個獨立的不同的實驗結果，GAPDH 作為實驗內(nèi)參。

2 U0126 抑制尼古丁誘導 RAW264.7 細胞 ERK1/2 和 c-Jun 的激活以及 MMP-9，MMP-，MCP-1 和 RANTES 蛋白和 mRNA 表達的上調。（A）先予 10μm 和 20μm U0126 預處理 RAW264.7 細胞 30 min，再予 10ng/ml 尼古丁刺激 30 min。用 Western blot 測定 p-ERK1/2，ERK1/2，p-c-Jun 和 c-Jun 蛋白水平。（D）先予 10μm 和 20μm U0126 預處理AW264.7 細胞 30 min，再予 10ng/ml 尼古丁刺激 3 h。采用 Western blot 測定 MMP-9，MMP-2，MCP-1 和 RANTES 蛋白水平。Western blot 蛋白條帶（B，C 和 E-H）灰度值（均數(shù)±標準差）使用圖像 J 軟件進行測定。MMP-9 (I) ，，MMP-2 (J) ，MCP-1 (K)和
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R543.16

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本文編號：2627783