【摘要】：研究背景:急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)是一種常見(jiàn)的缺血性心臟病急癥,具有高病死率及致殘率。經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(PCI)可及時(shí)恢復(fù)ACS患者冠狀動(dòng)脈血流灌注,改善心肌缺血,是目前治療ACS最常用方式之一,但ACS患者PCI治療后發(fā)生主要不良心血管事件(MACE)的風(fēng)險(xiǎn)仍然較高。然而,目前尚缺乏用于PCI治療效果監(jiān)測(cè)及術(shù)后MACE預(yù)測(cè)的非侵入性血清學(xué)指標(biāo)。miRNA是長(zhǎng)度為19-23個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,主要在轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)靶基因表達(dá)。最新研究發(fā)現(xiàn),循環(huán)miRNA可作為ACS患者診療過(guò)程中良好指標(biāo)。前期研究表明,ACS患者血清miR-186-5p水平顯著升高,且血清miR-186-5p可作為心血管疾病危險(xiǎn)分層的分子標(biāo)志物,提示其作為ACS診斷及預(yù)后監(jiān)測(cè)循環(huán)標(biāo)志物的潛能。然而,血清miR-186-5p在ACS患者PCI治療前后水平動(dòng)態(tài)變化、分布形式、預(yù)后價(jià)值及miR-186-5p參與心肌缺血缺氧的機(jī)制尚待進(jìn)一步探究。目的:(1)檢測(cè)ACS患者PCI治療前后血清miR-186-5p水平動(dòng)態(tài)變化,分析miR-186-5p在血清中分布形式以及在ACS患者PCI治療中的臨床價(jià)值;(2)探尋miR-186-5p在心肌細(xì)胞缺血缺氧過(guò)程中的作用機(jī)制。方法:(1)選取92例ACS患者及96例健康者作為研究對(duì)象,收集ACS患者入院即刻、PCI術(shù)后7天內(nèi)以及健康對(duì)照禁食12小時(shí)以上的血清樣本,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)檢測(cè)血清樣本中miR-186-5p水平;采用Life公司外泌體(exosome)提取試劑盒分離exosome及去外泌體上清(exosome-depleted),分別檢測(cè)并比較二者中miR-186-5p水平差異;隨訪ACS患者PCI術(shù)后1年內(nèi)MACE發(fā)生情況;通過(guò)ROC曲線、Logistic回歸、Spearman相關(guān)性及Cox回歸分析等多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析血清miR-186-5p與ACS患者PCI治療監(jiān)測(cè)及預(yù)后價(jià)值。(2)通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-186-5p靶基因;采取左側(cè)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)構(gòu)建SD大鼠心肌梗死(AMI)模型,檢測(cè)大鼠血清miR-186-5p水平及心肌組織miR-186-5p及相關(guān)蛋白水平變化;采用Anaeropack厭氧袋結(jié)合無(wú)糖無(wú)血清培養(yǎng)基構(gòu)建心肌細(xì)胞(H9C2)糖氧剝奪(OGD)模型,檢測(cè)并分析細(xì)胞中miR-186-5p及靶相關(guān)蛋白水平變化,采用熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-186-5p與預(yù)測(cè)基因的靶向關(guān)系,運(yùn)用蛋白免疫印跡、流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)探索與驗(yàn)證miR-186-5p在心肌細(xì)胞急性缺糖缺氧中的潛在的作用機(jī)制。結(jié)果:(1)ACS患者(STEMI組,NSTEMI組,UA組)血清miR-186-5p水平較對(duì)照組顯著升高(p均0.05),患者組之間水平無(wú)明顯差異;ACS患者PCI術(shù)后血清miR-186-5p水平較術(shù)前顯著降低(p均0.05),術(shù)后2天恢復(fù)至對(duì)照組水平(p0.05);對(duì)照組、ACS患者PCI治療前后血清樣本exosome中miR-186-5p水平均顯著低于exosome-depleted中水平(p均0.05),ACS患者PCI治療前后exosome-depleted樣本中miR-186-5p水平變化與總血清miR-186-5p水平變化一致,且二者中miR-186-5p水平均呈正相關(guān)(r=0.238,p0.05),ACS患者、對(duì)照組血清e(cuò)xosome中miR-186-5p水平無(wú)明顯差異(p均0.05);相關(guān)性分析提示ACS患者血清miR-186-5p水平與HDL-C水平及LVEF呈負(fù)相關(guān)(p均0.05),與LDL-C水平、Genisi評(píng)分及GRACE評(píng)分呈正相關(guān)(p均0.05);ROC曲線分析血清及exosome-depleted中miR-186-5p診斷ACS的曲線下面積分別為為0.70(95%CI:0.62~0.78)和0.81(95%CI:0.70~0.91),多因素Logistic分析表明血清及exosome-depleted中miR-186-5p可作為預(yù)測(cè)ACS發(fā)生獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=1.08,95%CI:1.03~1.14;OR=1.12,95%CI:1.03~1.23);隨訪結(jié)果表明ACS患者PCI術(shù)后1年MACE發(fā)生率為33.7%,發(fā)生MACE的患者術(shù)前血清miR-186-5p水平顯著高于未發(fā)生MACE組患者(p0.05);多因素Cox回歸分析提示血清miR-186-5p可作為ACS患者PCI術(shù)后1年發(fā)生MACE良好預(yù)測(cè)因子(HR=1.44,95%CI:1.02~2.06)。(2)生物信息學(xué)軟件分析提示細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)可能為miR-186-5p靶蛋白;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,與假手術(shù)組比較,AMI大鼠血清miR-186-5p水平升高(p均0.05),缺血心肌組織中miR-186-5p水平降低(p均0.05),而ERK1/2、cleaved caspase-3水平升高(p均0.05);細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組比較,OGD組H9C2細(xì)胞中miR-186-5p水平升高(p均0.05),細(xì)胞外培養(yǎng)基中miR-186-5p水平降低(p均0.05),OGD組細(xì)胞ERK1/2、cleaved caspase-3水平升高(p均0.05),過(guò)表達(dá)或抑制miR-186-5p表達(dá)后,ERK1/2與之呈負(fù)向水平變化;熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證明miR-186-5p可與ERK1/2 mRNA的3’-UTR靶向結(jié)合;凋亡實(shí)驗(yàn)顯示,OGD處理8小時(shí)后H9C2細(xì)胞凋亡率顯著增加,OGD處理組及無(wú)處理組過(guò)表達(dá)miR-186-5p后細(xì)胞凋亡率均顯著降低(p均0.05);細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,OGD處理8h后H9C2細(xì)胞增殖能力下降,OGD處理組及無(wú)處理組過(guò)表達(dá)miR-186-5p后細(xì)胞增殖能力均增加(p均0.05)。結(jié)論:ACS患者血清miR-186-5p水平升高,PCI治療后水平下降,血清中miR-186-5p主要以非外泌體形式存在,可能來(lái)源于心肌細(xì)胞被動(dòng)釋放,且血清miR-186-5p水平與ACS患者術(shù)后1年內(nèi)MACE發(fā)生具有良好相關(guān)性,心肌細(xì)胞中miR-186-5p可通過(guò)靶向ERK1/2調(diào)控缺糖缺氧所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及增殖過(guò)程。本研究為miR-186-5p應(yīng)用于ACS患者PCI治療效果監(jiān)測(cè)、預(yù)后評(píng)估及治療等提供了新思路。
【圖文】：

miR-186-5p 作為急性冠脈綜合征標(biāo)志物的臨床價(jià)值及其作用機(jī)制研究將 pri-miRNA 在分子基部切割雙鏈形成大小約 70 nt 并能形成莖稱 pre-miRNA，，pre-miRNA5 末端具有磷酸基及多聚腺苷酸酸突出體；然后通過(guò) Ran-GTP 依賴性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 Exportin-5 端的二核苷酸突出將其由胞核運(yùn)輸至胞質(zhì)；隨后，胞質(zhì)中另一種 pre-miRNA 剪切形成不完全配對(duì)的 RNA 雙鏈體（miRNA為成熟 miRNA 與其互補(bǔ)序列所組成的二聚體。miRNA：miR選擇性整合到 RNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RNA-induced silencing一條未被整合的單鏈 miRNA*可迅速降解，而通常來(lái)源于較低NA 更易被整合入 RISC。具體過(guò)程如圖 1.1 所示。

miR-186-5p 作為急性冠脈綜合征標(biāo)志物的臨床價(jià)值及其作用機(jī)制研究iRNA 及其他多種活性物質(zhì)的 MV 可隨體液循環(huán)達(dá)到靶細(xì)胞，隨后通過(guò)內(nèi)吞結(jié)合等方式進(jìn)入靶細(xì)胞，調(diào)控靶細(xì)胞的生物學(xué)活動(dòng)。（3）與 RNA 結(jié)合蛋白合物后被分泌，已知的循環(huán) miRNA 結(jié)合蛋白有高密度脂蛋白（HDL）、ArgonO2）、核磷蛋白 nucleophosmin 1 (NPM1)等，后兩種分泌方式為主動(dòng)的、耗鏈 RNA 在細(xì)胞外環(huán)境中易于被廣泛存在的 RNA 酶降解，但 miRNA 可穩(wěn)定循環(huán)并被檢測(cè)，可能存在的保護(hù)機(jī)制主要有[39,40]：（1）miRNA 被包裹于 MV
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R541.4

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本文編號(hào)：2611839