【摘要】：背景與目的:缺血預(yù)適應(yīng)是一種有效的內(nèi)源性保護機制,可以保護心肌細胞免受缺血再灌注損傷,但其具體機制尚不明確。研究表明心肌缺血預(yù)適應(yīng)可能通過影響心肌細胞容量調(diào)節(jié)的能力來達到心肌保護作用,也與心肌縫隙連接蛋白43(Cx43)表達有關(guān),尚未見同時評價在缺血預(yù)適應(yīng)過程中心肌細胞容量調(diào)節(jié)及Cx43表達變化的報道。本研究旨在探討在缺血預(yù)適應(yīng)過程中心肌細胞容量調(diào)節(jié)及Cx43表達的變化及其意義。方法:體外培養(yǎng)大鼠心肌細胞系H9C2,分別給予模擬缺血再灌注處理(I/R組,缺氧8h,復(fù)氧6h)、模擬缺血預(yù)適應(yīng)處理(IPC組,預(yù)進行3個缺氧5min/復(fù)氧5min循環(huán),再進行缺血再灌注處理)和縫隙連接蛋白阻滯劑18α-甘草次酸預(yù)處理(AGA組,18α-甘草次酸預(yù)處理48h,再進行缺血預(yù)適應(yīng)處理),通過光鏡觀察各組細胞形態(tài)、CCK-8(Cell counting kit-8)檢測各組心肌細胞存活率、hoechst33342染色測定心肌細胞凋亡率、IPP軟件計算細胞容積從而測定細胞調(diào)節(jié)性容量減少(RVD)能力、Western Blot和細胞免疫熒光染色檢測Cx43蛋白表達。結(jié)果:(1)正常的H9C2心肌細胞形態(tài)多樣,呈紡錘體形或多角形,大小均一。I/R組H9C2心肌細胞大小不一、圓形皺縮細胞明顯增多。IPC組圓形皺縮細胞較I/R組有所減少。而AGA組圓形皺縮細胞有所增加,與I/R組無明顯差異。(2)與I/R組比較,IPC組心肌細胞存活率增加(46.23±5.285%v.s.68.90±7.546%,p0.01)、心肌細胞凋亡比例減少(16.46±5.170%v.s.9.105±2.516%,p0.05)、心肌細胞RVD能力增加(36.08±6.413%v.s.47.42±4.547%,p0.01)、心肌細胞Cx43蛋白表達增加(細胞免疫熒光染色:212.1±17.66 v.s.325.6±20.94,p0.05;Western blot:0.093±0.022 v.s.0.282±0.049,p0.01);與IPC組比較,AGA組心肌細胞存活率明顯下降(50.57±7.622%,p0.01)、心肌細胞凋亡比例增加(15.61±4.805%,p0.05)、RVD能力明顯下降(39.57±4.199%,p0.05)、心肌細胞Cx43蛋白表達減少(細胞免疫熒光染色:210.4±19.42,p0.05;Western blot:0.095±0.021,p0.01)。結(jié)論:在模擬缺血預(yù)適應(yīng)過程中,心肌細胞容量調(diào)節(jié)能力及縫隙連接蛋白43表達均增加,縫隙連接蛋白阻滯劑逆轉(zhuǎn)上述作用,提示心肌細胞容量調(diào)節(jié)及縫隙連接蛋白43可能參與缺血預(yù)適應(yīng),但縫隙連接蛋白43是否與心肌細胞容量調(diào)節(jié)相關(guān),目前尚不明確。
【圖文】：

結(jié)果下觀察各組細胞形態(tài)圖 1 所示，正常的 H9C2 心肌細胞形態(tài)多樣，呈紡錘體形或多角形與對照組比較，缺血再灌注組 H9C2 心肌細胞輪廓不清、大小不一胞明顯增多，提示缺血再灌注對心肌細胞造成損傷。與缺血再灌注組適應(yīng)組圓形皺縮細胞有所減少，提示缺血預(yù)適應(yīng)組心肌細胞損傷缺血預(yù)適應(yīng)組比較，縫隙連接蛋白阻滯劑 18α-甘草次酸組圓形皺縮，與缺血再灌注組無明顯差異，提示在模擬缺血預(yù)適應(yīng)過程中，縫阻滯后，即縫隙連接蛋白表達減少時，缺血預(yù)適應(yīng)可能失去了對心作用。

差異有統(tǒng)計學意義（p<0.01）；與缺血預(yù)適應(yīng)組比較，縫隙連接蛋白阻滯劑 18α-甘草次酸組心肌細胞存活率明顯下降，有統(tǒng)計學差異（p<0.01）。圖2 各組細胞存活率注： Con:對照組，I/R：模擬缺血再灌注組，IPC：模擬缺血預(yù)適應(yīng)組，AGA：18α-甘草次酸預(yù)處理組。各組細胞存活率統(tǒng)計圖數(shù)值以 Χ ± S表示,n=3。**：與Con組比較，，p<0.01;&&:與I/R組比較，p<0.01；##：與IPC組比較，p<0.01。3 各組細胞凋亡比例通過 Hoechst33342 染細胞核觀察各組細胞凋亡情況。凋亡細胞核形態(tài)表現(xiàn)為染色加深、高亮即為核濃縮或者核周有小碎片。如圖 3A 所示，對照組心肌細胞核染色均一、形態(tài)比較完整
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R541

【參考文獻】

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本文編號：2611185