【摘要】：背景同型半胱氨酸((Homocysteine,Hcy))是心血管疾病的獨立危險因子之一。Hcy能夠誘導(dǎo)細(xì)胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的生成增多引起內(nèi)皮損傷從而導(dǎo)致動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)發(fā)生發(fā)展。內(nèi)皮細(xì)胞中ROS主要來源于Nox4(NADPH oxidases 4)。NLRP3在冠狀動脈粥樣硬化及主動脈硬化中高表達(dá)。NLRP3是AS中IL-1家族細(xì)胞因子產(chǎn)生的關(guān)鍵介質(zhì),特別是當(dāng)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的大量ROS,可導(dǎo)致caspase-1前體大量剪切成具有生物活性的caspase-1 P10片段,推動下游IL-1β和IL-18等炎癥因子的成熟及分泌,使內(nèi)皮細(xì)胞功能受損,引起細(xì)胞炎癥損傷及凋亡,正反饋加重血管損傷。本文主要探討Nox4在Hcy介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥及凋亡的作用,Hcy導(dǎo)致的AS提供可能的機(jī)制。目的探討Nox4調(diào)控NLRP3/caspase-1/IL-1β信號通路在Hcy誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡中的作用。方法1.體外培養(yǎng)HUVECs。用不同濃度Hcy處理HUVECs,篩選合適的誘導(dǎo)濃度;2.分組進(jìn)行細(xì)胞實驗,分為陰性對照組(NC)、Hcy處理組(NC+Hcy)、siNox4組(siNox4)、siNox4+Hcy組(siNox4+Hcy);3通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,DHE染色檢測超氧自由基,應(yīng)用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染siRNA干擾抑制Nox4;Western blot檢測各組細(xì)胞Nox4、NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白的表達(dá),TUNEL檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果1.Hcy刺激下HUVECs的Nox4表達(dá)增加,細(xì)胞內(nèi)超氧自由基增多,增強(qiáng)氧化應(yīng)激反應(yīng),同時引起蛋白復(fù)合物炎癥小體NLRP3、caspase-1、IL-1β表達(dá)增加,引起細(xì)胞凋亡。2.siRNA干擾抑制Nox4后,Hcy刺激下HUVECs的NLRP3、caspase-1、IL-1β表達(dá)明顯降低,細(xì)胞凋亡減少。結(jié)論Hcy刺激Nox4表達(dá)增加而激活NLRP3/caspase-1/IL-1β信號通路介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

圖 1：不同濃度的 Hcy 對 HUVECs 細(xì)胞凋亡的影響(Annexin V+／PI-、Annexin V+／PI+)框中細(xì)胞為凋亡細(xì)胞。A～F 分別為空白對照0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L、2.5mmol/L。N=3/組。y 可以引起內(nèi)皮細(xì)胞活性氧的增加，從而導(dǎo)致內(nèi)皮損傷通過 DCFH-DA 法測定活性氧（H2O2）的表達(dá)，如圖 2 所示，，在 Hcy（0.2mm

圖 2. Hcy 可以引起內(nèi)皮細(xì)胞活性氧的增加，從而導(dǎo)致內(nèi)皮損傷激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng).2mmol/L）刺激內(nèi)皮細(xì)胞 24h，檢測 Nox4、Nox2、NLRP3達(dá)水平，結(jié)果顯示：與 Control 組相比，Hcy 組 Nox4、No
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R543.5

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本文編號：2608723