【摘要】：背景及目的:心肌缺血再灌注損傷在臨床工作中備受矚目,可導(dǎo)致多種并發(fā)癥,對(duì)于缺血性心肌病患者的臨床預(yù)后具有嚴(yán)重的不良影響。近年來(lái)心肌缺血后適應(yīng)是研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)的防治心肌缺血再灌注損傷的重要措施,其主要通過(guò)縮小心肌梗死面積、減少再灌注心律失常的發(fā)生幾率、減輕微血管損傷以及改善心功能等途徑發(fā)揮心臟保護(hù)作用。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal Kinase,JNK)是絲裂原活化蛋白激酶家族中的重要成員,JNK信號(hào)通路的活化可引發(fā)一系列病理生理過(guò)程,參與并加重心肌缺血再灌注損傷。既往研究發(fā)現(xiàn)缺血后適應(yīng)能夠抑制JNK信號(hào)通路的活化,從而減輕大鼠腎臟缺血再灌注損傷程度,發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。由此推論:(1)心肌缺血后適應(yīng)的心肌保護(hù)作用機(jī)制是否與調(diào)控JNK信號(hào)通路有關(guān)?(2)JNK在心肌缺血后適應(yīng)減輕心肌缺血再灌注損傷中發(fā)揮的作用為何?本研究通過(guò)構(gòu)建大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,以缺血后適應(yīng)為干預(yù)手段,觀察JNK的表達(dá)水平,初步探討JNK信號(hào)通路在缺血后適應(yīng)減輕心肌缺血再灌注損傷中的作用,豐富缺血后適應(yīng)的心肌保護(hù)作用機(jī)制,為臨床防治心肌缺血再灌注損傷、尋找新的心臟保護(hù)作用的藥物靶點(diǎn)提供理論支持及機(jī)制保障。方法:選用健康雄性8周齡無(wú)特定病原體(Specefic Pathogen Free,SPF)級(jí)SD大鼠60只(體重200~250 g),根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案按照完全隨機(jī)化的方法將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為6組:假手術(shù)(Sham)組、缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)組、缺血后適應(yīng)(Postconditioning,Post C)組、JNK抑制劑(Inhibition of JNK,I-JNK)組、JNK激活劑(Anisomycin,Ani)組和JNK激活劑Ani+缺血后適應(yīng)(Ani+Post C)組,每組各10只。通過(guò)結(jié)夾-松解左冠狀動(dòng)脈的方法構(gòu)建大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)分組給予不同處理。在實(shí)驗(yàn)處理結(jié)束后,通過(guò)頸動(dòng)脈抽血,利用肌酸激酶同工酶(Creatinine Kinase-muscle/brain,CK-MB)和肌鈣蛋白I(Troponin I,Tn I)試劑盒檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物水平;制作心臟組織切片,通過(guò)2,3,5-氯化三苯基四氮唑(Triphenyl Tetrazolium Chloride,TTC)染色的方法觀察并分析心肌梗死面積;提取左心室心肌組織蛋白成分,應(yīng)用Western blot方法測(cè)定磷酸化JNK(Phosphorylated JNK,P-JNK)的表達(dá)水平。最終采用SPSS 20.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件分析各部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果:1、心肌損傷標(biāo)記物水平比較:與Sham組相比,I/R組和Ani組的CK-MB和Tn I水平顯著升高(P0.05);與I/R組相比,Post C組和I-JNK組的CK-MB和Tn I水平顯著降低(P0.05);與Post C組相比,Ani+Post C組和Ani組的CK-MB和Tn I水平明顯升高(P0.05)。2、心肌梗死面積比較:與Sham組相比,I/R組和Ani組的心肌梗死面積明顯增大(P0.05);與I/R組相比,Post C組和I-JNK組的心肌梗死面積明顯縮小(P0.05);與Post C組相比,Ani+Post C組和Ani組的梗死面積明顯增大(P0.05)。3、JNK磷酸化水平比較:與Sham組相比,I/R組和Ani組的P-JNK水平顯著升高(P0.05);與I/R組相比,Post C組和I-JNK組的P-JNK水平顯著降低(P0.05),而Ani組的P-JNK的水平顯著升高(P0.05);與Post C組相比,Ani+Post C組和Ani組的P-JNK水平顯著升高(P0.05)。結(jié)論:1、心肌缺血再灌注具有顯著的心肌損害作用,心肌缺血再灌注損傷能夠激活JNK信號(hào)通路,促進(jìn)P-JNK的表達(dá)。2、心肌缺血后適應(yīng)降低心肌損傷標(biāo)記物水平、縮小心肌梗死面積,發(fā)揮顯著的心肌保護(hù)作用。3、心肌缺血后適應(yīng)降低P-JNK的表達(dá)水平,通過(guò)抑制JNK信號(hào)通路的活化而減輕心肌缺血再灌注損傷。4、JNK信號(hào)分子可能是心肌缺血后適應(yīng)減輕心肌缺血再灌注損傷、發(fā)揮心臟保護(hù)作用的靶點(diǎn)之一。
【圖文】：

第一章 研究對(duì)象與方法脈，將 PE-50 聚乙烯管插入頸靜脈和頸動(dòng)脈，手術(shù)穩(wěn)定 30 min 后，在胸部左側(cè)第 4肋間水平打開胸腔，，暴露心臟，鈍性分離并剪開心包膜，在左冠狀動(dòng)脈前降支下方穿過(guò) 6-0 無(wú)損傷縫合線，通過(guò)結(jié)夾-松解前降支的方法構(gòu)建動(dòng)物模型（見圖 1）。在再灌注 5 min 時(shí)，通過(guò)右頸靜脈根據(jù)分組注射不同藥物，根據(jù)分組不同給予不同處理，處理結(jié)束后通過(guò)右頸動(dòng)脈抽血 3~4 mL 用于后續(xù)指標(biāo)檢測(cè)。

圖 2 實(shí)驗(yàn)操作流程圖（注：黑色面積表示缺血，白色面積表示灌注）1.2.4 心肌損傷標(biāo)記物測(cè)定上述處理結(jié)束后，通過(guò)右頸動(dòng)脈取血 3~4 ml，將血標(biāo)本置于試管中，立即低溫（4 ℃）保存，通過(guò)離心機(jī)（3000 rpm，15 min）分離血清，留取血清標(biāo)本于液氮冷凍后置于-80 ℃冰箱保存。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)心肌損傷標(biāo)記物 CK-MB 和 TnI 水平，單位以 pg/ml 表示。1.2.5 心肌梗死面積測(cè)定經(jīng)右頸動(dòng)脈取血后立即摘取心臟，置于-20 ℃冰箱中約 20 min，待心臟冷凍固定后，按照垂直于左心室長(zhǎng)軸的方向從心尖部位開始連續(xù)切片，共切 5 張片，每張切片厚度約 2 mm。將新鮮組織切片置于裝有 1%濃度的 TTC 溶液中，37 ℃室溫避光孵育 15 min。TTC 染色后，梗死區(qū)心肌呈現(xiàn)為蒼白色，而存活心肌呈現(xiàn)為紅色。心肌梗死面積以梗死區(qū)與左室總體積的比值來(lái)表示。1.2.6 Western blot 法檢測(cè) JNK 的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R542.22

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本文編號(hào)：2606463