【摘要】：背景冠狀動(dòng)脈粥樣硬化(coronary atherosclerosis)特指發(fā)生在冠狀動(dòng)脈上的動(dòng)脈粥樣硬化,主要特征為斑塊形成以及斑塊侵蝕、破裂、血栓形成導(dǎo)致心肌缺血、心肌梗塞等嚴(yán)重的心血管事件。目前認(rèn)為血管冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮損傷是其始動(dòng)環(huán)節(jié)。高血壓、吸煙、血脂異常、糖尿病和肥胖等,與血管內(nèi)皮損傷等慢性心血管危險(xiǎn)因素或與之相關(guān)的有害循環(huán)刺激物持續(xù)作用,可破壞血管內(nèi)皮系統(tǒng)及影響內(nèi)皮完整性,引起血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)失調(diào)和功能紊亂,出現(xiàn)血管收縮、氧化應(yīng)激、血栓形成、炎癥反應(yīng)等,激活下游信號(hào)通路,與動(dòng)脈粥樣硬化血管重塑有關(guān)的一系列分子、細(xì)胞、血管壁結(jié)構(gòu)改變,久之出現(xiàn)斑塊形成甚至其后遺癥,如心肌缺血、心肌梗死。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,OxLDL)可引起多種血管內(nèi)皮損傷,導(dǎo)致其功能性破壞,參與動(dòng)脈粥樣硬化的起始和進(jìn)展,在動(dòng)脈粥樣硬化早期階段發(fā)揮核心作用。冠狀動(dòng)脈作為向心臟直接供血的血管,其內(nèi)皮細(xì)胞與其他動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的特性有所不同,而冠狀動(dòng)脈是動(dòng)脈粥樣硬化高發(fā)的區(qū)域且后果嚴(yán)重。目前,關(guān)于OxLDL對(duì)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷機(jī)制尚不清楚,因此深入探討OxLDL對(duì)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞功能的損傷及其具體機(jī)制具有重要意義。目的1.明確OxLDL對(duì)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞造成的功能損傷及基因表達(dá)差異;2.探討p21蛋白在OxLDL引起的冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮損傷中的作用及其機(jī)制。方法1.利用血管張力檢測(cè)OxLDL對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈內(nèi)皮舒張功能的影響;2.利用CCK-8與劃痕實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HCAECs細(xì)胞的增殖能力與遷移能力;3.利用TUNEL法檢測(cè)HCAECs的凋亡水平;4.HDL試劑盒檢測(cè)HCAECs上清液中LDH水平;5.利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄本水平測(cè)序并分析OxLDL處理HCAECs 24h后組間的差異基因,6.利用String和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)顯著差異基因進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的分析并進(jìn)行信號(hào)通路調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建;7.利用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot,WB)法檢測(cè)對(duì)差異基因的相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果1.血管張力實(shí)驗(yàn)提示OxLDL可減弱大鼠冠狀動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性血管舒張功能;2.細(xì)胞劃痕、CCK-8和細(xì)胞上清液HDL檢測(cè)實(shí)驗(yàn)提示OxLDL處理HCAECs后,細(xì)胞遷移和增殖能力均受到顯著抑制、細(xì)胞上清液HDL水平增多;3.TUNEL和Western blot實(shí)驗(yàn)提示OxLDL處理HCAECs后,細(xì)胞凋亡率顯著增加,凋亡相關(guān)蛋白變化與凋亡水平一致;4.轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-Seq)發(fā)現(xiàn)OxLDL處理HCAECs 24 h后,979條基因出現(xiàn)差異表達(dá),其中130條基因?yàn)橐阎?70條基因表達(dá)上調(diào),60條基因表達(dá)下調(diào);通過(guò)String和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)分析得出CDKN1A(靶蛋白p21)和整合素相關(guān)基因與細(xì)胞的周期調(diào)控和遷移等功能有關(guān)并可能發(fā)揮重要作用;5.經(jīng)過(guò)OxLDL處理后,p21蛋白表達(dá)水平在24 h時(shí)顯著升高,但72 h時(shí)下降;p21-siRNA預(yù)處理后在24 h時(shí)可顯著增強(qiáng)OxLDL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,但72 h時(shí)則無(wú)顯著差異;p21-siRNA預(yù)處理可抑制HCAECs的細(xì)胞增殖。結(jié)論1.OxLDL可對(duì)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷;2.早期OxLDL引起的HCAECs中p21蛋白表達(dá)的上調(diào)可能為細(xì)胞抗凋亡的應(yīng)激保護(hù)機(jī)制;而處理的后期p21蛋白表達(dá)下調(diào),可能是OxLDL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生的關(guān)鍵因素之一;3.早期OxLDL引起的HCAECs中p21蛋白表達(dá)上調(diào)并不是抑制細(xì)胞增殖的主要因素,而整合素通路的調(diào)節(jié)可能在其中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
【圖文】：

圖 1 OxLDL 100 mg/L 對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的大鼠腸系膜動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張作用的影響(Mean±SD, n=6)。ACh：乙酰膽堿，CA：冠狀動(dòng)脈，，MA：腸系膜動(dòng)脈。**p<0.01 vs. PPS+PPS 或 OxLDL+ PPS;##p<0.01 vs. PPS+ACh.Figure 1 Effects of 100 mg/L OxLDL on acetylcholine-induced endothelium-dependent

圖 2 OxLDL 對(duì) HCAECs 遷移的影響（Mean±SD）。A B。細(xì)胞遷移（細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),n=3）。PBS：磷酸鹽緩沖鹽水溶液；OxLDL：氧化型低密度脂蛋白 100 μg/mL。*p <0.05vs. PBS。Figure 2 Impact of OxLDL on HCAECs migration. A~B. Cell migration (Cell scratch test,
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R541.4

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本文編號(hào)：2605505