【摘要】：研究背景淋巴管畸形(Lymphatic Malformation,LM)是一種先天性的淋巴系統(tǒng)發(fā)育畸形疾病,常導致外貌畸形和功能障礙,甚至危及生命。LM雖為良性病變,但由于病灶常侵入周圍組織或器官,邊界不清,故治療較為困難。2012年,新英格蘭雜志報道,口服西地那非對一例淋巴管畸形患兒的治療有效,隨后,西地那非成為淋巴管畸形治療中的研究熱點,該藥物的應用為LM的治療提供了新的選擇,但相關的作用機制未見報道。在病理結構上,淋巴管畸形內皮細胞(Lymphatic Malformation Endotheljal ccells,LMECs)是 LM 病灶的主要組成細胞,有研究表明,淋巴管畸形中的LMECs存在異常增殖,常伴有血管內皮生長因子C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)和血管內皮生長因子受體3(Vascular endothel ial growth factor receptor-3,VEGFR-3)的表達增加,在LM的發(fā)展中具有重要的作用。研究目的通過觀察西地那非對體外培養(yǎng)的人淋巴管畸形內皮細胞HLMECs增殖的影響,檢測VEGF-C和VEGFR-3表達量的改變,在細胞水平探究西地那非治療淋巴管畸形的潛能及可能機制,為西地那非用于LM的臨床治療提供實驗依據(jù)。研究方法選取山東大學齊魯醫(yī)院口腔頜面外科行舌淋巴管畸形切除,并得到手術后病理證實的組織標本,采用組織塊培養(yǎng)法對人淋巴管畸形內皮細胞進行體外培養(yǎng);免疫細胞化學染色CD-31及淋巴管內皮透明質酸受體-1(LYVE-1)進行細胞鑒定;以不同濃度的西地那非(1、2、5、10 μmol/L)作用于HLMECs后,用倒置顯微鏡觀察HLMECs形態(tài)的變化,MTT比色法和EdU染色法檢測對細胞增殖的影響,Western Blot檢測血管內皮生長因子C(VEGFC)及其受體VEGFR-3表達的變化。使用SPSS 21.0軟件包,采用獨立樣本t檢驗和單因素方差分析加LSD法進行統(tǒng)計學分析。研究結果組織塊培養(yǎng)72 h后開始有細胞爬出,細胞呈多角形,單層貼壁生長,如鵝卵石狀,生長速度較緩慢。細胞傳代后,細胞變?yōu)殚L梭形,形態(tài)不規(guī)則,增殖速度加快;免疫細胞化學染色法顯示淋巴管內皮透明質酸受體LYVE-1和內皮細胞標記物CD31均呈陽性表達,證實所獲細胞為該淋巴管畸形內皮細胞;西地那非作用后,隨著藥物濃度的上升,細胞密度逐漸下降,細胞增殖速度減慢,2 μmol/L細胞組即出現(xiàn)肉眼可觀測的密度下降,在10μmol/L時,細胞質出現(xiàn)顆粒狀改變,胞膜變得不完整,細胞貼壁能力差,且細胞膨大,形態(tài)不規(guī)則;EdU染色顯示了細胞增值率隨著西地那非濃度的升高逐漸降低,濃度2 μmol/L組開始出現(xiàn)細胞增殖率下降(P0.05),MTT結果與以上吻合,且顯示相同濃度藥物處理時,刺激時間延長,細胞增殖抑制率增加(P0.05),說明西地那非對淋巴管畸形內皮細胞的增殖抑制作用兼具濃度依賴性及時間依賴性;Western Blot顯示VEGF-C自西地那非5 μmol/L劑量組出現(xiàn)表達降低(P0.05),而VEGFR-3則在1 μmol/L出現(xiàn)下調(P0.05),各實驗組均有統(tǒng)計學差異。結論西地那非對體外培養(yǎng)的HLMECs有增殖抑制作用,使HLMECs中VEGF-C和VEGFR-3的表達降低,這可能是其治療LM的作用機制之一。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R551.2

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉欣,石應康,祝彼得;培養(yǎng)內皮細胞的分化[J];生物醫(yī)學工程學雜志;1999年02期

2 衛(wèi)朝霞,劉永波;一種新的內皮細胞分離方法[J];河南職工醫(yī)學院學報;2003年03期

3 任德成;胡娟娟;張均田;杜冠華;;血管內皮細胞損傷機制研究[J];醫(yī)學研究通訊;2003年10期

4 潘虹;王庭槐;;內皮細胞caveolae,caveolin-1的生理功能[J];醫(yī)學綜述;2006年22期

5 殷觀梅;;血管內皮細胞生長抑制因子研究進展[J];河北醫(yī)藥;2008年12期

6 劉寶宜,陳鐵鎮(zhèn),張寶庚,宋繼業(yè);動脈粥樣硬化形成過程中內皮細胞病變的研究(摘要)——主動脈內皮細胞平掙,掃描電鏡及透射電鏡的觀察[J];中國醫(yī)科大學學報;1981年S1期

7 劉寶宜,陳鐵鎮(zhèn),張寶庚,宋繼業(yè);動脈粥樣硬化形成過程中內皮細胞的形態(tài)學變化的研究(主動脈內皮細胞平鋪技術,掃描電鏡及透射電鏡的方法)[J];中國醫(yī)科大學學報;1982年03期

8 張連元;;動脈粥樣硬化發(fā)病機理中平滑肌和內皮細胞的機能[J];煤礦醫(yī)學;1983年04期

9 劉懷瓊;李德馨;;內皮細胞的功能與休克的關系[J];國外醫(yī)學.麻醉學與復蘇分冊;1985年04期

10 何澤涌;;關于內皮細胞研究的某些進展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年03期

相關會議論文 前10條

1 應大君;陳衛(wèi)軍;周丁華;;內皮細胞機械感受功能的實驗研究[A];面向21世紀的科技進步與社會經濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

2 鄧紅;李懿萍;來茂德;;高糖環(huán)境細胞間相互作用對內皮細胞產生活性氧和血管內皮細胞生長因子的影響[A];中華醫(yī)學會病理學分會2005年學術年會論文匯編[C];2005年

3 林萍章;PualJ.Pearson;RaymondCartier;KazuhiroHashimoto;HartzellV.Schaff;;內膜再生過程中,內皮細胞之反應[A];海峽兩岸電子顯微學討論會論文專集[C];1991年

4 趙彭濤;李志超;董明清;賈斌;張莉莉;;LPS對培養(yǎng)的BPAECsⅠ型Na~+/H~+交換器活性的影響[A];第六次全國缺氧和呼吸病理生理學術會議論文摘要匯編[C];2003年

5 熊建瓊;朱佩芳;王正國;蔣建新;;髓樣分化蛋白-2在內毒素與內皮細胞結合中的作用[A];第十一次全國急診醫(yī)學學術會議暨中華醫(yī)學會急診醫(yī)學分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

6 王心華;甄永蘇;;烯二炔類抗生素力達霉素抑制內皮細胞生長和誘導內皮細胞凋亡[A];2000全國腫瘤學術大會論文集[C];2000年

7 李彥榮;應晨江;易海維;衣衛(wèi)杰;孟依;劉烈剛;孫秀發(fā);;綠茶多酚對牛內皮細胞窖蛋白-1表達的影響[A];湖北省、武漢市營養(yǎng)學會第十一屆學術會議論文匯編[C];2007年

8 蔡紹皙;張莉;韓亞剛;蔣稼歡;;流動腔底面內皮細胞圖型化研究與圖像處理[A];第十次中國生物物理學術大會論文摘要集[C];2006年

9 汪毅;陳允欽;;高密度脂蛋白與內皮功能[A];第六次全國中西醫(yī)結合心血管會學術會議論文匯編[C];2002年

10 馬向紅;黃體鋼;楊萬松;周麗娟;;四氫生物喋呤對內皮細胞產生一氧化氮和超氧陰離子的影響[A];中華醫(yī)學會心血管病分會第八次全國心血管病學術會議匯編[C];2004年

相關重要報紙文章 前6條

1 ;中藥抗血栓機理及對內皮細胞的生物醫(yī)學研究取得佳績[N];科技日報;2000年

2 趙軍;耳毒性藥物對耳蝸螺旋動脈平滑肌和內皮細胞電生理特性的影響項目[N];科技日報;2007年

3 華朋;熱愛老年事業(yè) 投身老年醫(yī)藥[N];中國老年報;2000年

4 高國起;提升ACE2活性可消退動脈硬化斑塊[N];中國醫(yī)藥報;2010年

5 佳愉;中藥善調理 降壓重保腎[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

6 劉道安;保護動脈內膜 減少冠心病發(fā)生[N];中國醫(yī)藥報;2005年

相關博士學位論文 前10條

1 白云城;LPS調控靜脈內皮細胞膜形態(tài)及通透性引發(fā)血栓形成的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

2 宋恩;內皮細胞源性KLF15調控TM激活蛋白C抗凝血途徑及MCP-1介導炎性反應影響DVT形成的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

3 宋凱;口腔癌—內皮細胞融合的分子調控機制及潛在作用[D];武漢大學;2014年

4 薛珊珊;用代謝組學方法研究DNA甲基化對花生四烯酸代謝的影響及血管內皮激活的機制[D];天津醫(yī)科大學;2015年

5 李強;Rho GTPases及其信號通路在1-磷酸鞘胺醇介導的內皮細胞功能變化中的作用[D];南方醫(yī)科大學;2013年

6 陳學軍;SUR2B/Kir6.1通道開放劑介導內皮細胞保護效應分子途徑的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2016年

7 王蘇陽;埃他卡林對體循環(huán)、腦循環(huán)、肺循環(huán)微動脈內皮細胞SUR2B/Kir6.1通道的激活作用及能量代謝物質的調節(jié)作用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2016年

8 苑t，

本文編號：2569809