【摘要】：研究背景淋巴管畸形(Lymphatic Malformation,LM)是一種先天性的淋巴系統(tǒng)發(fā)育畸形疾病,常導(dǎo)致外貌畸形和功能障礙,甚至危及生命。LM雖為良性病變,但由于病灶常侵入周?chē)M織或器官,邊界不清,故治療較為困難。2012年,新英格蘭雜志報(bào)道,口服西地那非對(duì)一例淋巴管畸形患兒的治療有效,隨后,西地那非成為淋巴管畸形治療中的研究熱點(diǎn),該藥物的應(yīng)用為L(zhǎng)M的治療提供了新的選擇,但相關(guān)的作用機(jī)制未見(jiàn)報(bào)道。在病理結(jié)構(gòu)上,淋巴管畸形內(nèi)皮細(xì)胞(Lymphatic Malformation Endotheljal ccells,LMECs)是 LM 病灶的主要組成細(xì)胞,有研究表明,淋巴管畸形中的LMECs存在異常增殖,常伴有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3(Vascular endothel ial growth factor receptor-3,VEGFR-3)的表達(dá)增加,在LM的發(fā)展中具有重要的作用。研究目的通過(guò)觀(guān)察西地那非對(duì)體外培養(yǎng)的人淋巴管畸形內(nèi)皮細(xì)胞HLMECs增殖的影響,檢測(cè)VEGF-C和VEGFR-3表達(dá)量的改變,在細(xì)胞水平探究西地那非治療淋巴管畸形的潛能及可能機(jī)制,為西地那非用于LM的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法選取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院口腔頜面外科行舌淋巴管畸形切除,并得到手術(shù)后病理證實(shí)的組織標(biāo)本,采用組織塊培養(yǎng)法對(duì)人淋巴管畸形內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng);免疫細(xì)胞化學(xué)染色CD-31及淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體-1(LYVE-1)進(jìn)行細(xì)胞鑒定;以不同濃度的西地那非(1、2、5、10 μmol/L)作用于HLMECs后,用倒置顯微鏡觀(guān)察HLMECs形態(tài)的變化,MTT比色法和EdU染色法檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖的影響,Western Blot檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGFC)及其受體VEGFR-3表達(dá)的變化。使用SPSS 21.0軟件包,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和單因素方差分析加LSD法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。研究結(jié)果組織塊培養(yǎng)72 h后開(kāi)始有細(xì)胞爬出,細(xì)胞呈多角形,單層貼壁生長(zhǎng),如鵝卵石狀,生長(zhǎng)速度較緩慢。細(xì)胞傳代后,細(xì)胞變?yōu)殚L(zhǎng)梭形,形態(tài)不規(guī)則,增殖速度加快;免疫細(xì)胞化學(xué)染色法顯示淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體LYVE-1和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD31均呈陽(yáng)性表達(dá),證實(shí)所獲細(xì)胞為該淋巴管畸形內(nèi)皮細(xì)胞;西地那非作用后,隨著藥物濃度的上升,細(xì)胞密度逐漸下降,細(xì)胞增殖速度減慢,2 μmol/L細(xì)胞組即出現(xiàn)肉眼可觀(guān)測(cè)的密度下降,在10μmol/L時(shí),細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)顆粒狀改變,胞膜變得不完整,細(xì)胞貼壁能力差,且細(xì)胞膨大,形態(tài)不規(guī)則;EdU染色顯示了細(xì)胞增值率隨著西地那非濃度的升高逐漸降低,濃度2 μmol/L組開(kāi)始出現(xiàn)細(xì)胞增殖率下降(P0.05),MTT結(jié)果與以上吻合,且顯示相同濃度藥物處理時(shí),刺激時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞增殖抑制率增加(P0.05),說(shuō)明西地那非對(duì)淋巴管畸形內(nèi)皮細(xì)胞的增殖抑制作用兼具濃度依賴(lài)性及時(shí)間依賴(lài)性;Western Blot顯示VEGF-C自西地那非5 μmol/L劑量組出現(xiàn)表達(dá)降低(P0.05),而VEGFR-3則在1 μmol/L出現(xiàn)下調(diào)(P0.05),各實(shí)驗(yàn)組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論西地那非對(duì)體外培養(yǎng)的HLMECs有增殖抑制作用,使HLMECs中VEGF-C和VEGFR-3的表達(dá)降低,這可能是其治療LM的作用機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R551.2

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8 苑t，

本文編號(hào)：2569809