發(fā)布時間：2019-12-05 01:10

【摘要】：心力衰竭作為一類嚴重的臨床病征,其表現(xiàn)為心泵功能衰退的同時,還常常伴隨肝、腎、肺等其他靶器官的損傷。心力衰竭時心臟射血分數(shù)降低,腎臟血流量減少,腎小球的濾過率隨之降低,致使腎臟血流二次分布,最終使腎功能遭到嚴重損害。腎功能損傷可反作用于心臟,使其衰竭癥狀進一步加重,影響治療效果,導(dǎo)致病死率升高�？梢�,二者相互作用,彼此影響,構(gòu)成惡性循環(huán),進一步加速心衰的進展。雷米普利(Ramipril,RAM)作為一種高效的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(Angiotensin-Converting Enzyme Inhibitors,ACEI),是治療心力衰竭的一線用藥,但對于其在腎臟保護方面的具體機制仍眾說紛紜,該研究通過檢測心衰大鼠腎臟組織細胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3及細胞色素C(CytochromeC,Cyt-C)的表達水平,探討雷米普利可能對心力衰竭大鼠腎臟組織細胞凋亡所產(chǎn)生的影響。目的:應(yīng)用腎上腹主動脈縮窄法建造心衰大鼠相關(guān)模型。雷米普利干預(yù)成功后的模型,采用蘇木素-伊紅(HE)染色方法查看大鼠的腎臟形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu),TUNEL技術(shù)分析腎臟組織凋亡情況,免疫組織染色法(SP)和蛋白免疫印跡法測定Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cytochrome C蛋白于大鼠腎臟組織內(nèi)的表達趨勢,RT-PCR法對Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cytochrome C的mRNA在大鼠腎臟組織內(nèi)的表達水平進行測定,通過觀察雷米普利對心衰大鼠腎臟細胞凋亡及相關(guān)凋亡因子的影響,探討該藥對心衰大鼠腎臟組織的可能保護機制。方法:1取雄性的清潔Wistar大鼠40只,任意選取其中10只大鼠納入假手術(shù)組,其他大鼠均行腹主動脈縮窄操作術(shù)。以左心室舒張末壓(LVEDP)≥15mmHg為模型構(gòu)建成功的標準。同時對假手術(shù)組大鼠只游離腹主動脈并不結(jié)扎。取造模成功的20只大鼠隨機分至模型對照組及雷米普利組。2每組大鼠均抵達觀察終點時,相應(yīng)大鼠的lvedp使用多導(dǎo)電生理記測儀監(jiān)測并精細完整的記錄數(shù)據(jù)。取出大鼠腎臟,進行稱量。3he染色法觀察每組實驗標本的腎臟細胞形態(tài)學(xué)變化。4tunel技術(shù)描述腎臟的組織凋亡概況,統(tǒng)計組織凋亡率(ai)。5sp和westernblot技術(shù)分析大鼠腎臟標本內(nèi)bcl-2、bax、caspase-3及cyt-c蛋白的表達情況。6rt-pcr技術(shù)測定相關(guān)大鼠腎臟組織細胞中bcl-2、bax、caspase-3及cyt-c的mrna表達水平。結(jié)果:1lvedp結(jié)果假手術(shù)組、模型對照組以及雷米普利組大鼠的lvedp分別為:(5.52±0.95)mmhg、(19.48±1.68)mmhg和(12.16±1.46)mmhg。模型對照組及雷米普利組大鼠的lvedp與假手術(shù)組相比較均有所上升(p0.01);同模型對照組比較,雷米普利組大鼠的lvedp明顯下降(p0.01)。2he染色觀察實驗對象腎臟組織的病理形態(tài)學(xué)改變假手術(shù)組大鼠腎臟細胞外象正常,分布規(guī)整、緊致,結(jié)構(gòu)明朗;模型對照組腎小管結(jié)構(gòu)較混亂,上皮細胞分布散亂、模糊,管腔擴大;雷米普利組腎小管結(jié)構(gòu)亦出現(xiàn)少許混亂,上皮細胞分布稀疏、模糊,但未見管腔擴張。3每組大鼠的腎臟細胞凋亡指數(shù)(ai)結(jié)果顯示假手術(shù)組、模型對照組、雷米普利組大鼠的ai結(jié)果分別是(2.51±0.97)%、(40.79±1.31)%和(19.89±1.24)%。模型對照組及雷米普利組大鼠與假手術(shù)組大鼠的ai比較均有所增高(p0.01),與模型對照組比較,雷米普利組ai明顯降低(p0.01)。4免疫組織化學(xué)染色法分析每實驗組對象腎臟組織中bcl-2及bax蛋白的表達情況bcl-2蛋白在每組大鼠腎臟細胞中的表達趨勢為:假手術(shù)組明顯表達:鏡下顯示胞內(nèi)含有較多暗棕黃色物質(zhì),模型對照組少量表達,雷米普利組則可見中等程度表達,表達量明顯少于假手術(shù)組,同時高于模型對照組。bax蛋白表達結(jié)果則顯示:假手術(shù)組大鼠腎臟細胞內(nèi)無明顯暗棕色物質(zhì);模型對照組大鼠相關(guān)細胞內(nèi)則有明顯暗棕色物質(zhì)表達,雷米普利組可見中等量暗棕色物質(zhì)表達。5蛋白免疫印跡法測定每組大鼠腎臟組織中Caspase-3及Cyt-C蛋白的表達情況與假手術(shù)組比較,后兩組Caspase-3及Cyt-C蛋白的顯現(xiàn)水平均顯著增高(P0.01),與模型對照組相比,雷米普利組Caspase-3及Cyt-C蛋白的顯現(xiàn)則顯著降低(P0.01)。6 RT-PCR法估測每組實驗大鼠中Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA在腎臟組織內(nèi)的表達水平同假手術(shù)組相比,模型對照組大鼠中Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA表達均有不同程度提升(P0.01),Bcl-2的mRNA表達則有所下降(P0.01);雷米普利組大鼠中Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA表達較模型對照組顯著降低(P0.01),Bcl-2的mRNA表達則顯著增高。結(jié)論:1心力衰竭大鼠腎臟的損傷同細胞凋亡的發(fā)生聯(lián)系密切。2雷米普利能夠有效抑制心力衰竭大鼠腎組織細胞凋亡,其機制可能與調(diào)控Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cyt-C的表達,進而阻斷線粒體途徑有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R541.6

【參考文獻】

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