【摘要】：目的:觀察mi R-155在TNF-α誘導(dǎo)的HUVECs中的表達(dá)情況,明確mi R-155對(duì)TNF-α促HUVEC凋亡的調(diào)控作用,探討其靶點(diǎn)及作用機(jī)制。方法:(1)首先根據(jù)TNF-α處理濃度的不同分為以下六個(gè)濃度組,即0 ng/mL組、1 ng/mL組、10 ng/mL組、20 ng/mL組、40 ng/mL組和100 ng/mL組;再將各濃度組分別分成以下四個(gè)不同時(shí)間處理組,即0 h組、12 h組、24 h組和48 h組。采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率、Heochst33342染色法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況,由此確定TNF-α誘導(dǎo)HUVECs凋亡模型的最佳處理濃度和處理時(shí)間;(2)qPCR法檢測(cè)TNF-α誘導(dǎo)HUVECs凋亡模型中mi R-155的表達(dá)情況;(3)轉(zhuǎn)染miR-155 mimics使mi R-155過表達(dá),轉(zhuǎn)染anti-miR-155沉默mi R-155表達(dá),設(shè)立空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、TNF-α組、miR-155mimics組、anti-miR-155組,qPCR法檢測(cè)各組miR-155表達(dá)情況,MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率;Heochst33342和Annexin V-FITC/PI雙染法分別檢測(cè)各組HUVECs凋亡情況;(4)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)mi R-155靶基因(5)Western blot法檢測(cè)各組FADD、Caspase-3及Active-caspase-3蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)HUVECs的存活率隨著TNF-α處理時(shí)間的延長(zhǎng)和處理濃度的增加而降低,HUVECs的凋亡率隨TNF-α處理時(shí)間的延長(zhǎng)和處理濃度的增加而升高,并確定TNF-α誘導(dǎo)HUVECs凋亡模型的最佳處理?xiàng)l件為10 ng/ml TNF-α處理24 h。(2)qPCR結(jié)果表明,10 ng/ml TNF-α處理HUVECs 24 h后,miR-155的表達(dá)明顯升高(P0.01)。(3)qPCR結(jié)果表明,miR-155 mimics上調(diào)HUVECs中miR-155表達(dá)水平(P0.01),anti-mi R-155抑制HUVECs中mi R-155表達(dá)(P0.01);與TNF-α組相比,miR-155 mimics組HUVECs存活率明顯提高(P0.01)、凋亡率顯著降低(P0.01),anti-miR-155組HUVECs生存率明顯降低(P0.01)、凋亡率顯著增高(P0.01)。(4)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)出FADD、Caspase-3可能是mi R-155的靶基因。(5)Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與TNF-α組相比,miR-155 mimics組FADD、Caspase-3及Active-caspase-3蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01),anti-miR-155組表FADD、Caspase-3及Active-caspase-3蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01)。結(jié)論:mi R-155可能通過下調(diào)FADD、Caspase-3蛋白表達(dá)抑制TNF-α誘導(dǎo)的HUVECs凋亡。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R543.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2569647