【摘要】：心血管疾病是威脅人類健康和生命的一個全球性疾病。動脈粥樣硬化(atherosclerosis)作為心血管疾病的主要病理基礎之一,是一種在動脈部位發(fā)生的經(jīng)脂質(zhì)累積、炎癥反應、細胞壞死和纖維化等階段的復雜病理過程。其中,脂質(zhì)代謝的異常對于動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展起著關鍵的作用。因此,促進體內(nèi)的膽固醇的轉(zhuǎn)運代謝、降低脂質(zhì)水平等對動脈粥樣硬化的防治具有十分重要的意義。膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)能夠?qū)⒏呙芏戎鞍?HDL)上的膽固醇酯轉(zhuǎn)運到apoB載脂蛋白,如低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)上,并將這些載脂蛋白上的甘油三酯交換到HDL上。交換到LDL等載脂蛋白上的膽固醇能夠進一步通過肝臟上的LDL受體(LDLR)被轉(zhuǎn)運回肝臟代謝。此外,CETP還能夠直接通過影響肝臟對膽固醇非受體依賴的選擇性吸收而促進膽固醇向肝臟的轉(zhuǎn)運。因此CETP對于促進膽固醇的轉(zhuǎn)運和代謝具有非常重要的作用。CETP主要在肝臟中表達的并分泌到血漿中,從而通過與HDL和LDL等載脂蛋白相互作用完成膽固醇轉(zhuǎn)運功能。由于CETP啟動子上存在著受體激活轉(zhuǎn)錄因子-肝X受體(LXR)的反應元件(LXRE),因此,CETP的表達能夠在轉(zhuǎn)錄水平被LXR所調(diào)控。DNA拓撲異構(gòu)酶ⅡA和ⅡB(Topo Ⅱ)廣泛表達,對于改變DNA復制過程中的拓撲結(jié)構(gòu)、基因轉(zhuǎn)錄和有絲分裂中的姐妹染色單體分離等具有關鍵作用。由于DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ?qū)τ诩毎纳娣浅Ｖ匾?而且在癌細胞中往往存在高表達的DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ活性,因此,Topo Ⅱ也被視為癌癥治療的有效分子靶點,并以此開發(fā)出如Etoposide(VP-16)和Teniposide(VM-26)等DNA拓撲異構(gòu)酶抑制劑,作為多種癌癥治療的藥物。盡管Etoposide和Teniposide在癌癥生物學和免疫學中的功能已經(jīng)非常明確,但在其他疾病領域中的作用卻尚不明確。有報道指出Etoposide能夠有效抑制高膽固醇喂食的兔子中動脈粥樣硬化斑塊的形成,但具體作用機制卻不清楚。我們認為DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ抑制劑很可能是通過影響膽固醇的轉(zhuǎn)運代謝,從而起到抗動脈粥樣硬化作用的。因此,在本研究中,我們著重探討了抑制DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ是否能通過調(diào)節(jié)肝臟中的CETP表達而影響體內(nèi)膽固醇的代謝及其調(diào)控CETP的可能作用機制。我們發(fā)現(xiàn)在人源肝細胞系HepG2細胞中通過Etoposide和Teniposide抑制拓撲異構(gòu)酶Ⅱ或者用siRNA抑制拓撲異構(gòu)酶Ⅱ的表達均能夠明顯誘導CETP的蛋白表達和分泌。與此同時,抑制拓撲異構(gòu)酶Ⅱ還能夠誘導CETP mRNA的表達,并增加CETP啟動子的活性。這說明Etoposide和Teniposide能夠在轉(zhuǎn)錄水平上誘導CETP表達。當我們用siRNA抑制LXR表達時發(fā)現(xiàn),在LXR被抑制時Etoposide和Teniposide無法發(fā)揮對CETP的誘導作用,說明拓撲異構(gòu)酶Ⅱ抑制劑對CETP的誘導作用是依賴于LXR的存在。我們進一步對這種誘導作用的機制進行研究并發(fā)現(xiàn),Etoposide和Teniposide能夠誘導LXRα的總蛋白表達,并促進LXRα和LXRβ的核轉(zhuǎn)移。此外,我們還發(fā)現(xiàn)Etoposide和Teniposide還能夠下調(diào)LXR轉(zhuǎn)錄抑制因子RIP140的表達。因此,Etoposide和Teniposide是通過激活LXR通路來促進CETP表達激活的。在體內(nèi)實驗中,我們用Teniposide皮下注射CETP轉(zhuǎn)基因小鼠,發(fā)現(xiàn)Teniposide能夠在一定程度上改善小鼠的血脂水平,并誘導小鼠肝臟CETP的表達。在體內(nèi)膽固醇外流實驗中我們還發(fā)現(xiàn)Teniposide能夠顯著促進CETP轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的膽固醇外流。綜上所述,我們的研究證實了DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ抑制劑Etoposide和Teniposide能夠誘導膽固醇代謝的重要載脂蛋白CETP表達,體內(nèi)CETP的表達能夠進一步促進膽固醇的逆轉(zhuǎn)運,從而降低體內(nèi)外周組織膽固醇水平,降低動脈粥樣硬化的風險。我們的工作揭示了拓撲異構(gòu)酶Ⅱ抑制劑在脂代謝調(diào)控方面的新功能,也為該類藥物在動脈粥樣硬化防治領域的研究應用提供了新的理論依據(jù)。
[Abstract]:Cardiovascular disease is a global disease that threatens human health and life. Atherosclerosis, one of the main pathological bases of cardiovascular disease, is a complex and pathological process in the stages of lipid accumulation, inflammatory reaction, cell necrosis and fibrosis in the arterial part. Among them, the abnormal lipid metabolism plays a key role in the occurrence and development of atherosclerosis. Therefore, it is of great significance to promote the transport and metabolism of cholesterol in the body and to reduce the lipid level and so on. The cholesteryl ester transport protein (CETP) can transport the cholesteryl ester on high-density lipoprotein (HDL) to apoB apolipoprotein, such as low-density lipoprotein (LDL) and very low-density lipoprotein (VLDL), and exchange the triglycerides on these apolipoprotein to HDL. Cholesterol exchanged on the apolipoprotein, such as LDL, can be further transferred back to the liver by the LDL receptor (LDLR) on the liver. In addition, CETP can promote the transport of cholesterol to the liver directly by selectively absorbing the liver's non-receptor-dependent dependence on cholesterol. CETP plays a very important role in promoting the transport and metabolism of cholesterol. CETP is mainly expressed in the liver and secreted into the plasma, thereby completing the cholesterol transport function by interacting with an apolipoprotein such as HDL and LDL. As a result of the presence of a receptor-activated transcription factor-hepatic X receptor (LXRE) on the CETP promoter, the expression of CETP can be regulated at the transcription level by LXR. DNA topoisomerase 鈪，

本文編號：2491737