【摘要】：心血管疾病是威脅人類(lèi)健康和生命的一個(gè)全球性疾病。動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis)作為心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)之一,是一種在動(dòng)脈部位發(fā)生的經(jīng)脂質(zhì)累積、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞壞死和纖維化等階段的復(fù)雜病理過(guò)程。其中,脂質(zhì)代謝的異常對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展起著關(guān)鍵的作用。因此,促進(jìn)體內(nèi)的膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)代謝、降低脂質(zhì)水平等對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治具有十分重要的意義。膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)能夠?qū)⒏呙芏戎鞍?HDL)上的膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)到apoB載脂蛋白,如低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)上,并將這些載脂蛋白上的甘油三酯交換到HDL上。交換到LDL等載脂蛋白上的膽固醇能夠進(jìn)一步通過(guò)肝臟上的LDL受體(LDLR)被轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟代謝。此外,CETP還能夠直接通過(guò)影響肝臟對(duì)膽固醇非受體依賴(lài)的選擇性吸收而促進(jìn)膽固醇向肝臟的轉(zhuǎn)運(yùn)。因此CETP對(duì)于促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝具有非常重要的作用。CETP主要在肝臟中表達(dá)的并分泌到血漿中,從而通過(guò)與HDL和LDL等載脂蛋白相互作用完成膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)功能。由于CETP啟動(dòng)子上存在著受體激活轉(zhuǎn)錄因子-肝X受體(LXR)的反應(yīng)元件(LXRE),因此,CETP的表達(dá)能夠在轉(zhuǎn)錄水平被LXR所調(diào)控。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶ⅡA和ⅡB(Topo Ⅱ)廣泛表達(dá),對(duì)于改變DNA復(fù)制過(guò)程中的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、基因轉(zhuǎn)錄和有絲分裂中的姐妹染色單體分離等具有關(guān)鍵作用。由于DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ?qū)τ诩?xì)胞的生存非常重要,而且在癌細(xì)胞中往往存在高表達(dá)的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ活性,因此,Topo Ⅱ也被視為癌癥治療的有效分子靶點(diǎn),并以此開(kāi)發(fā)出如Etoposide(VP-16)和Teniposide(VM-26)等DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑,作為多種癌癥治療的藥物。盡管Etoposide和Teniposide在癌癥生物學(xué)和免疫學(xué)中的功能已經(jīng)非常明確,但在其他疾病領(lǐng)域中的作用卻尚不明確。有報(bào)道指出Etoposide能夠有效抑制高膽固醇喂食的兔子中動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成,但具體作用機(jī)制卻不清楚。我們認(rèn)為DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑很可能是通過(guò)影響膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)代謝,從而起到抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的。因此,在本研究中,我們著重探討了抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ是否能通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟中的CETP表達(dá)而影響體內(nèi)膽固醇的代謝及其調(diào)控CETP的可能作用機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)在人源肝細(xì)胞系HepG2細(xì)胞中通過(guò)Etoposide和Teniposide抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ或者用siRNA抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的表達(dá)均能夠明顯誘導(dǎo)CETP的蛋白表達(dá)和分泌。與此同時(shí),抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ還能夠誘導(dǎo)CETP mRNA的表達(dá),并增加CETP啟動(dòng)子的活性。這說(shuō)明Etoposide和Teniposide能夠在轉(zhuǎn)錄水平上誘導(dǎo)CETP表達(dá)。當(dāng)我們用siRNA抑制LXR表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn),在LXR被抑制時(shí)Etoposide和Teniposide無(wú)法發(fā)揮對(duì)CETP的誘導(dǎo)作用,說(shuō)明拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑對(duì)CETP的誘導(dǎo)作用是依賴(lài)于LXR的存在。我們進(jìn)一步對(duì)這種誘導(dǎo)作用的機(jī)制進(jìn)行研究并發(fā)現(xiàn),Etoposide和Teniposide能夠誘導(dǎo)LXRα的總蛋白表達(dá),并促進(jìn)LXRα和LXRβ的核轉(zhuǎn)移。此外,我們還發(fā)現(xiàn)Etoposide和Teniposide還能夠下調(diào)LXR轉(zhuǎn)錄抑制因子RIP140的表達(dá)。因此,Etoposide和Teniposide是通過(guò)激活LXR通路來(lái)促進(jìn)CETP表達(dá)激活的。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們用Teniposide皮下注射CETP轉(zhuǎn)基因小鼠,發(fā)現(xiàn)Teniposide能夠在一定程度上改善小鼠的血脂水平,并誘導(dǎo)小鼠肝臟CETP的表達(dá)。在體內(nèi)膽固醇外流實(shí)驗(yàn)中我們還發(fā)現(xiàn)Teniposide能夠顯著促進(jìn)CETP轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的膽固醇外流。綜上所述,我們的研究證實(shí)了DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑Etoposide和Teniposide能夠誘導(dǎo)膽固醇代謝的重要載脂蛋白CETP表達(dá),體內(nèi)CETP的表達(dá)能夠進(jìn)一步促進(jìn)膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn),從而降低體內(nèi)外周組織膽固醇水平,降低動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)。我們的工作揭示了拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑在脂代謝調(diào)控方面的新功能,也為該類(lèi)藥物在動(dòng)脈粥樣硬化防治領(lǐng)域的研究應(yīng)用提供了新的理論依據(jù)。
[Abstract]:Cardiovascular disease is a global disease that threatens human health and life. Atherosclerosis, one of the main pathological bases of cardiovascular disease, is a complex and pathological process in the stages of lipid accumulation, inflammatory reaction, cell necrosis and fibrosis in the arterial part. Among them, the abnormal lipid metabolism plays a key role in the occurrence and development of atherosclerosis. Therefore, it is of great significance to promote the transport and metabolism of cholesterol in the body and to reduce the lipid level and so on. The cholesteryl ester transport protein (CETP) can transport the cholesteryl ester on high-density lipoprotein (HDL) to apoB apolipoprotein, such as low-density lipoprotein (LDL) and very low-density lipoprotein (VLDL), and exchange the triglycerides on these apolipoprotein to HDL. Cholesterol exchanged on the apolipoprotein, such as LDL, can be further transferred back to the liver by the LDL receptor (LDLR) on the liver. In addition, CETP can promote the transport of cholesterol to the liver directly by selectively absorbing the liver's non-receptor-dependent dependence on cholesterol. CETP plays a very important role in promoting the transport and metabolism of cholesterol. CETP is mainly expressed in the liver and secreted into the plasma, thereby completing the cholesterol transport function by interacting with an apolipoprotein such as HDL and LDL. As a result of the presence of a receptor-activated transcription factor-hepatic X receptor (LXRE) on the CETP promoter, the expression of CETP can be regulated at the transcription level by LXR. DNA topoisomerase 鈪，

本文編號(hào)：2491737