【摘要】：肺高壓(Pulmonary Hypertension,PH)是一種漸進(jìn)的、復(fù)雜的并且常�？梢灾旅幕静±磉^(guò)程。雖然其確切的發(fā)生機(jī)制仍不清楚,但各類型的肺高壓都有一個(gè)共同特征即持續(xù)的肺血管收縮和血管重塑。無(wú)論是肺血管的收縮還是重塑都與肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞胞漿Ca2+濃度升高密切相關(guān)。先前研究證實(shí)在慢性低氧(Chronic Hypoxia,CH)與野百合堿(Monocrotaline,MCT)致PH模型大鼠中及肺動(dòng)脈高壓患者中鈣池操縱性鈣內(nèi)流(Store-Operated Calcium Entry,SOCE)功能均有增強(qiáng)且胞漿鈣濃度升高,同時(shí)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Ca N)及活化T細(xì)胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFATc)被激活。本研究進(jìn)一步在MCT致PH模型大鼠中觀察SOCE功能何時(shí)增強(qiáng),并采用Ca N的抑制劑環(huán)孢素A(cyclosporin A,Cs A)通過(guò)不同給藥方式進(jìn)行干預(yù)觀察其對(duì)CH與MCT致PH模型大鼠SOCE功能的影響,為其可能成為臨床上治療PH的靶向藥物提供病理生理學(xué)依據(jù)。第一部分環(huán)孢素A抑制兩種肺高壓大鼠模型的形成目的:觀察CH及MCT致肺高壓大鼠RVSP和RVMI隨時(shí)間的變化,并使用Cs A通過(guò)不同給藥方式干預(yù)觀察其對(duì)兩種肺高壓大鼠時(shí)間點(diǎn)RVSP及RVMI的影響從而確定其如何抑制兩種肺高壓模型的形成。方法:①模型建立方法:健康雄性SD大鼠150-160g按50mg/kg一次性腹腔注射MCT后隨機(jī)分為1、3、5、7、14、21d六組。每組進(jìn)一步分為三小組,分別給予Cs A每天給藥干預(yù)、隔天給藥干預(yù)及空白對(duì)照組。健康雄性SD大鼠200-220g用相同的方法進(jìn)行分組后暴露于低氧環(huán)境(氧濃度為10%)。正常組大鼠也進(jìn)行相同的分組后常規(guī)飼養(yǎng)。②血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)方法:分別測(cè)定上述各組大鼠RVSP,測(cè)量完畢后取出心臟測(cè)定RVMI。結(jié)果:①M(fèi)CT注射后的早期大鼠RVSP尚未升高,1w時(shí)高于正常對(duì)照組,隨后呈時(shí)間依賴性升高直到3w(只描述所觀察時(shí)間段內(nèi)的變化),Cs A干預(yù)可抑制該模型1、2、3w時(shí)RVSP的升高,且每天給藥較隔天給藥抑制效果為顯著。②CH致PH模型早期RVSP呈時(shí)間依賴性升高,1w時(shí)達(dá)峰值,隨后穩(wěn)定于該水平。Cs A干預(yù)無(wú)法抑制模型早期RVSP的升高,但能夠顯著降低這一模型的RVSP從第5d到第7d的增加幅度,并最終穩(wěn)定于一低水平。③正常雄性SD大鼠給予Cs A,與正常對(duì)照組相比其RVSP及RVMI均無(wú)顯著差異。④MCT致PH模型早期RVMI尚未升高,2w時(shí)顯著高于正常水平,隨后也呈時(shí)間依賴性升高直到3w。Cs A干預(yù)可顯著抑制該模型2w、3w時(shí)RVMI的升高幅度,且每天給藥幾乎能夠完全抑制這一模型右心室肥厚的形成。⑤CH致PH模型早期(1d后)RVMI即呈時(shí)間依賴性升高直到3w,Cs A干預(yù)可抑制相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)RVMI的升高幅度,且每天給藥時(shí)能夠完全抑制這一模型右心室肥厚的形成。⑥Cs A能夠顯著抑制兩種模型肺血管重塑的形成。結(jié)論:①Cs A能夠抑制上述兩種肺高壓模型的形成,且具有抑制右心室收縮壓的升高及右心室肥厚的雙重作用。②Cs A對(duì)兩種模型右心室肥厚的抑制作用比在抑制RVSP升高中所起的作用更為顯著。第二部分環(huán)孢素A衰減肺高壓大鼠PASMCs[Ca2+]i的增加及SOCE功能的增強(qiáng)目的:觀察MCT致PH模型大鼠PASMCs SOCE隨時(shí)間的變化及Cs A對(duì)這兩種模型大鼠PASMCs SOCE功能的影響。方法:在前已述及的建立模型的基礎(chǔ)上,采用:①酶解法培養(yǎng)原代PASMCs;②fluo-3熒光檢測(cè)[Ca2+]i方法及Mn2+淬滅fura-2熒光方法,分別測(cè)定CH3w及Cs A干預(yù)大鼠的PASMCs由CPA誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流量及Ca2+內(nèi)流速率;③用上述同樣的方法測(cè)定MCT注射后1、2、3w及正常對(duì)照組1、2、3w及相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)Cs A干預(yù)大鼠的PASMCs由CPA誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流量及Ca2+內(nèi)流速率。結(jié)果:①成功培養(yǎng)各組大鼠PASMCs,且經(jīng)免疫組織化學(xué)鑒定純度在95%以上;②CH3w大鼠的PASMCs[Ca2+]i及由CPA誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流量及Ca2+內(nèi)流速率均顯著高于正常水平,Cs A干預(yù)能夠抑制其升高。③MCT注射后1w時(shí)大鼠的PASMCs由CPA誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流量已顯著高于正常對(duì)照組,隨后呈時(shí)間依賴性升高直到3w。同時(shí)其[Ca2+]i也呈時(shí)間依賴性增加。Cs A干預(yù)能顯著降低相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)大鼠的PASMCs由CPA誘導(dǎo)的鈣跨膜內(nèi)流量,每天給藥較隔天給藥有進(jìn)一步降低的趨勢(shì)。同時(shí)其也能夠抑制胞漿鈣濃度的增加。④正常對(duì)照組1、2、3w大鼠的PASMCs由CPA誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流量無(wú)明顯改變,但Cs A每天給藥能輕度升高這一指標(biāo)。⑤MCT注射后1w時(shí)大鼠的PASMCs由CPA誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流速率已顯著高于正常水平,隨后呈時(shí)間依賴性升高直到3w。Cs A干預(yù)能顯著降低相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)大鼠的PASMCs由CPA誘導(dǎo)的鈣跨膜內(nèi)流速率,每天給藥較隔天給藥有進(jìn)一步下降的趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑥正常對(duì)照組1、2、3w大鼠CPA誘導(dǎo)的PASMCs胞膜Ca2+內(nèi)流速率及幅度無(wú)明顯改變,但Cs A每天給藥能輕度增加Ca2+內(nèi)流速率及幅度。結(jié)論:1.MCT模型的形成過(guò)程中SOCE增強(qiáng)及胞漿鈣濃度的增加均呈時(shí)間依賴性。2.Cs A能夠抑制上述兩種肺高壓模型SOCE功能的增強(qiáng)及胞漿鈣濃度的升高。3.Cs A能夠輕度增強(qiáng)正常大鼠SOCE功能。綜上所述,SOCE功能增強(qiáng)在CH及MCT致PH大鼠的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。SOCE功能增強(qiáng)可介導(dǎo)PASMCs胞漿鈣濃度的升高,進(jìn)而促進(jìn)PA的收縮及重塑。Cs A干預(yù)可部分抑制該兩種模型的形成。其可能機(jī)制為抑制這兩種模型中的SOCE功能的增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為Cs A可能成為臨床治療PH的前景藥物提供了病理生理學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R544.1

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