【摘要】：研究背景及目的:HPH是一種低氧所引起的慢性進(jìn)行性疾病,主要有持續(xù)肺動(dòng)脈壓力升高、并伴有右心室肥大及肺血管結(jié)構(gòu)改建等特點(diǎn)。在高原心臟病(High Altitude Heart Disease,HAHD)發(fā)病的過程中HPH所扮演的角色非常關(guān)鍵。HAHD作為慢性高原病患者重要的死亡原因,也是高原上的常見疾病。因此,HPH及其發(fā)病機(jī)制的探索一直是高原醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。由于HPH的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,迄今尚缺乏有效的預(yù)防及治療措施。以往研究發(fā)現(xiàn),HPH的發(fā)生發(fā)展中炎癥免疫反應(yīng)發(fā)揮有重要作用,但具體機(jī)制仍有待完善。Th17細(xì)胞是一類具有強(qiáng)大的致炎性的細(xì)胞,有研究表明,其在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。Th17細(xì)胞隸屬于CD4+T輔助細(xì)胞系,作為一種CD4+T輔助細(xì)胞的新亞型,它不同于Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞。低氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factors,HIFs)是低氧反應(yīng)的氧感知信號(hào)途徑中的關(guān)鍵分子,能介導(dǎo)低氧性肺血管改建等多種低氧反應(yīng)。HIF-1的上調(diào)與激活可促進(jìn)幼稚T細(xì)胞(Na?ve T cell)向Th17細(xì)胞分化,抑制其向Treg分化。HIF-1通過STAT3途徑,可直接激活Th17細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤獨(dú)受體(RORγt),并參與調(diào)控Th17的功能。白介素-17(Interleukin-17)是Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子,促進(jìn)炎癥反應(yīng)是IL-17的主要生物學(xué)效應(yīng)。IL-17在促進(jìn)T細(xì)胞活化、募集及活化中性粒細(xì)胞中具有重要作用,其次,IL-17還能刺激纖維細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的增殖,以此來增加膠原沉積,介導(dǎo)組織炎癥反應(yīng)。近年來,多項(xiàng)研究表明,已在慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘(Asthma)等慢性炎癥性疾病和多種自身免疫性疾病中發(fā)現(xiàn)了Th17細(xì)胞的身影,并在其中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。因此,本研究采用低壓低氧暴露復(fù)制小鼠HPH模型,利用該動(dòng)物模型,探討低壓低氧暴露后Th17細(xì)胞的變化特點(diǎn)及其與肺血管改建之間的關(guān)系。以更深一步揭示HPH及其發(fā)病機(jī)制,為尋求關(guān)鍵有效的HPH防治靶點(diǎn)提供線索和依據(jù)。方法:1.動(dòng)物分組雄性balb/c小鼠50只,按低氧暴露時(shí)間差異隨機(jī)分為5組,每組10只。低壓低氧組小鼠分別置與模擬海拔6000m的低壓艙內(nèi)飼養(yǎng)3、7、14、28d。常氧組即0d組,置常壓常氧環(huán)境下飼養(yǎng)。動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng),實(shí)驗(yàn)前12h禁食,自由飲水。采用持續(xù)性低壓低氧方法復(fù)制hph模型,即低氧處理組小鼠置于低壓氧艙內(nèi)24h連續(xù)低壓低氧處理不同時(shí)間后檢測所需指標(biāo)。2.檢測方法于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)通過心導(dǎo)管檢測右室收縮壓(rvsp),隨后快速處死取材,測量右心室重量(rvhi)指數(shù);masson染色肺組織石蠟切片,觀察肺血管改建及細(xì)胞外基質(zhì)沉積情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟組織及肺組織中th17細(xì)胞(cd4+il-17+rorγt+)所占比例變化;elisa檢測血清中il-4、il-6、il-17水平及肺組織中il-17水平變化;westernblot檢測肺組織中rorγt蛋白表達(dá)情況;rt2-pcr檢測肺組織rorγt的mrna表達(dá)水平。結(jié)果:1.rvsp及rvhi的變化rvsp及rvhi檢測結(jié)果表明,低氧暴露7d、14d、28d后小鼠右心室收縮壓(rvsp)和右心肥厚指數(shù)(rvhi)明顯高于對照組。差異顯著且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01)。2.小鼠血清細(xì)胞因子的變化elisa檢測結(jié)果顯示,低壓低氧后各組小鼠血清il-4、il-6水平較常氧對照組明顯升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01)。低壓低氧7d、14d、28d組血清的il-17水平與常氧對照組相比顯著升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3.脾臟組織th17細(xì)胞比例的變化流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,在低氧誘導(dǎo)下,脾臟組織中il-17+rorγt+cd4+t細(xì)胞百分比隨缺氧時(shí)間的增長呈上升趨勢,14d、28d組與對照組差異顯著且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。4.肺組織rorγt的mrna水平rt2-pcr結(jié)果顯示,在低氧誘導(dǎo)下,肺組織中rorγt的mrna表達(dá)明顯升高,7d、14d、28d組與常氧對照組相比有差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01)。5.肺組織il-17水平elisa結(jié)果顯示,低氧暴露14d、28d組與對常氧照組相比,肺組織中il-17水平顯著升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。6.肺組織RORγt蛋白水平表達(dá)升高Western blot結(jié)果可以看出,低氧誘導(dǎo)下,肺組織中RORγt的蛋白表達(dá)水平升高,與對照組相比有差異且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。7.肺組織Th17細(xì)胞比例的變化流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,在低氧誘導(dǎo)下,肺組織中Th17細(xì)胞的水平明顯呈上升趨勢,與對照組相比顯著升高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。8.相關(guān)性分析肺組織中RORγt的mRNA表達(dá)水平、IL-17表達(dá)量與心室收縮壓、右室肥厚指數(shù)呈顯著正相關(guān)。結(jié)論:1.低壓低氧可使脾臟Na?ve T細(xì)胞向Th17分化。2.肺組織中RORγt的m RNA表達(dá)水平及IL-17水平顯著升高。提示低壓低氧時(shí)肺組織中浸潤的Th17細(xì)胞增多。3.小鼠在模擬海拔6000 m低壓低氧環(huán)境生存7 d即可造成RVSP和數(shù)RVHI明顯升高,肺血管周圍沉積的膠原纖維增多。4.低壓低氧時(shí)浸潤至肺組織的Th17細(xì)胞與肺血管改建及HPH的發(fā)生有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R544.1

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