【摘要】：目的:探討miR-155在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)自噬中的作用。方法:1.采用濃度為100μg/m L的ox-LDL對(duì)HUVECs作用處理,分別在不同的時(shí)刻收集細(xì)胞,用電鏡觀察HUVECs內(nèi)的超微改變,同時(shí)采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)LC3和p62的mRNA的表達(dá)及mi R-155的表達(dá),用Western blot技術(shù)測(cè)定LC3-II及p62的蛋白水平,初步觀察ox-LDL對(duì)HUVECs自噬水平及miR-155水平的改變。2.將HUVECs分為正常對(duì)照組,ox-LDL組,ox-LDL+miR-155mimic組,ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+miRNA negative control(NC)組五個(gè)試驗(yàn)組。其中正常對(duì)照組不加任何干擾,而ox-LDL組,ox-LDL+miR-155mimic組,ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+miRNA NC組則用ox-LDL(100μg/m L)進(jìn)行誘導(dǎo)刺激。用電鏡觀察各組細(xì)胞內(nèi)的自噬體的形狀和數(shù)量,用qRT-PCR方法測(cè)定LC3和p62的mRNA的水平,用Western blot技術(shù)檢測(cè)LC3-II及p62的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.我們用100μg/m L的ox-LDL處理HUVECs 6小時(shí)、12小時(shí)后,電鏡結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)較多的自噬體及自噬溶酶體,qRT-PCR技術(shù)顯示LC3m RNA表達(dá)上調(diào),而p62mRNA表達(dá)下調(diào),western blot結(jié)果顯示LC3-II/GAPDH的水平上升,而p62/GAPDH的水平下降。由于細(xì)胞內(nèi)LC3上調(diào)及p62下調(diào)在6小時(shí)的時(shí)候最明顯,因此,我們將6小時(shí)作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的作用時(shí)間點(diǎn)。此外,qRT-PCR結(jié)果顯示ox-LDL處理后的細(xì)胞內(nèi)miR-155的表達(dá)增加。2.用miR-155mimic,miR-155inhibior及miR-155 NC對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,并用100μg/mL ox-LDL處理細(xì)胞6小時(shí)后,我們發(fā)現(xiàn),上調(diào)miR-155的表達(dá)后,細(xì)胞內(nèi)自噬體及自噬溶酶體的數(shù)量明顯增加,同時(shí)LC3的表達(dá)水平提高,p62的表達(dá)程度降低,而下調(diào)miR-155的水平后,細(xì)胞內(nèi)自噬體的數(shù)目減少,LC3表達(dá)降低,p62的表達(dá)水平升高。結(jié)論:ox-LDL能夠介導(dǎo)HUVECs自噬,并上調(diào)miR-155表達(dá);miR-155能夠調(diào)節(jié)ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs自噬。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R543.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2440539