【摘要】：【研究背景】血管炎是指原發(fā)于血管內(nèi)皮及其周圍的炎癥或壞死的一組疾病的總稱,其組織病理學(xué)變化可表現(xiàn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、核塵、血管壁纖維素樣變性、壞死、甚至肉芽腫性改變等,血管周圍浸潤(rùn)的細(xì)胞可為嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞等。血管炎的分類較復(fù)雜,至今尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),目前臨床上根據(jù)累及血管管徑的大小或按照浸潤(rùn)細(xì)胞的不同類型對(duì)血管炎進(jìn)行分類。白細(xì)胞碎裂性血管炎(LCV)是皮膚科最常見的一組血管炎類疾病,包括臨床常見的過(guò)敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)、變應(yīng)性血管炎(allergic vasculitis,ACV)、蕁麻疹性血管炎(urticarial vasculitis,UV)等。LCV的常見誘因包括藥物、感染、食物、甚至系統(tǒng)性疾病等,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,涉及抗原、抗體、補(bǔ)體、內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞及各種炎癥因子等多種因素。目前,多數(shù)研究認(rèn)為L(zhǎng)CV與III型變態(tài)反應(yīng)有關(guān),免疫復(fù)合物-補(bǔ)體-中性粒細(xì)胞這三者之間連鎖反應(yīng)是免疫復(fù)合物型血管炎發(fā)病機(jī)制的核心環(huán)節(jié),另有研究表明,抗中性粒細(xì)胞漿抗體(ANCA)可能參與了LCV發(fā)病過(guò)程。近年來(lái),關(guān)于LCV的研究更多地集中在循環(huán)免疫復(fù)合物(circulating immune complex,CIC)及補(bǔ)體在血管基底膜沉積激發(fā)的組織病理過(guò)程,其他發(fā)病因素如參與血管壁間質(zhì)代謝的基質(zhì)金屬蛋白酶及新型細(xì)胞因子IL-37等在LCV發(fā)病中是否有意義、如何參與病理過(guò)程尚少見公開報(bào)道�；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)是一類含鋅、鈣離子且結(jié)構(gòu)與功能相近的內(nèi)肽酶超家族,能降解細(xì)胞外基質(zhì)和維持胞外基質(zhì)平衡�；|(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinase TIMPs)可以與活化的MMPs按照1:1比例配對(duì)形成TIMPs-MMPs復(fù)合物,從而拮抗MMPs對(duì)底物的降解。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)血管炎與MMPs關(guān)系的研究主要集中在大或中等血管炎,并證實(shí)MMPs及TIMPs在大或中等血管的炎癥發(fā)生發(fā)展中起重要作用,而對(duì)小血管的炎癥、尤其是LCV與MMPs的相關(guān)報(bào)道甚少。根據(jù)MMPs作用底物及結(jié)構(gòu)不同,MMPs分為六類:(1)膠原酶類:主要包括MMP-1、MMP-8、MMP-13三種。(2)明膠酶類:主要包括MMP-2、MMP-9。(3)間質(zhì)容解素:主要包括MMP-3、MMP-10。(4)基質(zhì)溶解因子:包括MMP-7、MMP-26。(5)膜型基質(zhì)金屬蛋白酶(MT-MMPs):MMP-14~MMP-17、MMP-24、MMP-25。(6)其他類型MMPs:MMP-12、MMP-19~MMP-21、MMP-27等,其中,MMP-9(明膠酶B)和MMP-3(間質(zhì)溶解素-1)兩者均可降解血管基底膜所特有的IV膠原,在已發(fā)現(xiàn)的4種TIMP中,TIMP-1可拮抗所有種類的MMPs,而且對(duì)MMP-9、MMP-3表現(xiàn)出較高的親和力。LCV的組織病理表現(xiàn)中可見多種炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)、血管壁纖維素樣壞死及核碎裂等,推測(cè)MMP-9、MMP-3、TIMP-1等參與了LCV疾病的發(fā)生發(fā)展。IL-37是近年新發(fā)現(xiàn)的IL-1家族成員,作為一種新型抗炎細(xì)胞因子,IL-37在免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中起著抑制多種促炎癥細(xì)胞因子的作用,已被證實(shí)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、化學(xué)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎及肝損傷中起防御作用,IL-37與血管炎的關(guān)系以及在LCV的發(fā)病中的作用尚未見報(bào)道�！灸康摹勘狙芯恳訪CV患者及其皮損組織病理蠟塊為研究對(duì)象,通過(guò)測(cè)定LCV患者不同樣本(血清、尿液、皮損)中MMP-9、MMP-3、TIMP-1和IL-37的表達(dá)水平,探討急性期LCV患者M(jìn)MP-9、MMP-3、TIMP-1及IL-37的表達(dá)是否相關(guān)及如何相關(guān),分析前述指標(biāo)在LCV的診斷及病情隨訪中作用,并為進(jìn)一步探討LCV的發(fā)病機(jī)理提供依據(jù)�！痉椒ā�1.研究對(duì)象:包括現(xiàn)癥病例和既往確診的LCV患者的組織病理蠟塊。(1)現(xiàn)癥病例為2016年3月—2017年1月間廣州市皮膚病防治所門診或住院的LCV患者,包括過(guò)敏性紫癜(HSP)、變應(yīng)性血管炎(ACV)、蕁麻疹性血管炎(UV)三種常見LCV,診斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)Chapel Hill會(huì)議(CHCC)2012年制定標(biāo)準(zhǔn),共30例,其中男13例,女17例,平均年齡(35.0±3.45)歲;正常對(duì)照組10例,其中男4例,女6例,平均年齡(38.4±3.68)歲。(2)蠟塊組織選自2011年1月-2016年10月間我院病理科保存經(jīng)臨床和病理確診的LCV石蠟包埋組織62例,變應(yīng)性血管炎24例,過(guò)敏性紫癜18例,蕁麻疹性血管炎20例。2、標(biāo)本采集:初診時(shí)采集血清、尿液、組織塊標(biāo)本備檢。復(fù)診標(biāo)本在治療3周后采集。3、檢測(cè)方法及指標(biāo):(1)利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清、尿樣中MMP-9、MMP-3、TIMP-1和IL-37蛋白表達(dá)水平;(2)免疫組化法檢測(cè)蠟塊標(biāo)本中MMP-9、MMP-3、TIMP-1和IL-37在病變組織與正常組織中蛋白表達(dá)強(qiáng)度;(3)實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定皮損組織和正常對(duì)照皮膚中上述指標(biāo)的m RNA表達(dá)水平。4、統(tǒng)計(jì)分析:運(yùn)用SPSS 16.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì),計(jì)量資料均數(shù)比較用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn),兩個(gè)不同指標(biāo)間相關(guān)性分析用相關(guān)系數(shù)R,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P㩳0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異【結(jié)果】(一)LCV患者血清MMPs、MMPs/TIMP、IL-37表達(dá)水平及其與治療的相關(guān)性1.治療前MMPs、MMPs/TIMP、IL-37檢測(cè)結(jié)果:(1)治療前LCV組MMP-9(1580.48±206.51)ng/ml水平明顯高于正常對(duì)照組(492.19±107.96)ng/ml(P0.01);LCV組MMP-9/TIMP-1值與對(duì)照組相比顯著升高(16.71±2.76 VS4.54±1.14,P0.01);LCV組IL-37(214.79±16.39)ng/ml顯著低于對(duì)照組(417.82±40.91)ng/ml(P0.01);(2)治療前LCV組MMP-3、TIMP-1及MMP-3/TIMP-1值與正常對(duì)照比較均無(wú)顯著差異(P0.05);(3)經(jīng)Spearman相關(guān)性分析:血清中TIMP-1與MMP-9表達(dá)呈中度正相關(guān)(r=0.555,P0.01),TIMP-1與MMP-3呈中度正相關(guān)(r=0.547,P0.01),MMP-3與IL-37表達(dá)呈輕度負(fù)相關(guān)(r=-0.397,P0.05);IL-37與MMP-9/TIMP-1值呈輕度負(fù)相關(guān)(r=-0.353,P0.05)。2.藥物治療對(duì)血清中MMPs、MMPs/TIMP、IL-37表達(dá)的影響:血清MMP-9表達(dá)較治療前下降60%(957.36±283.71ng/ml vs 381.24±98.16)ng/ml,;TIMP-1水平下降約52%(分別為228.33±92.4 ng/ml vs 108.56±20.07ng/ml;MMP-9/TIMP-1值下降58%(11.35±8.31 vs 4.79±2.54);IL-37水平上升約155%(290.54±35.70 ng/ml vs 741.91±191.30ng/ml),而治療前后血清MMP-3、MMP-3/TIMP-1值均未見顯著差異。(二)LCV患者尿液MMPs、MMPs/TIMP、IL-37表達(dá)水平及其與治療的相關(guān)性1.治療前MMPs、MMPs/TIMP、IL-37檢測(cè)結(jié)果:(1)治療前LCV組MMP-9(587.08±131.04)ng/ml水平明顯高于正常對(duì)照組(159.44±51.10)ng/ml(P0.05);MMP-3、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1值及MMP-3/TIMP-1值與正常對(duì)照組比較均未見顯著差異性(P0.05)。2.藥物治療對(duì)尿液中MMPs、MMPs/TIMP、IL-37表達(dá)的影響:尿液MMP-9表達(dá)水平下降75%(1106.20±423.70ng/ml vs 81.21±88.43ng/ml);MMP-9/TIMP-1值下降68%(56.50±30.58 vs 18.47±9.25);但治療前后尿液中MMP-3、TIMP-1、IL-37、MMP-3/TIMP-1值均未見顯著差異。(三)急性期LCV組織中MMPs、TIMP-1、IL-37免疫組化表達(dá)強(qiáng)度比較(1)MMPs、TIMP-1的表達(dá):MMP-9主要表達(dá)在角質(zhì)形成細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿,LCV組表達(dá)顯著高于對(duì)照組(0.069±0.001 vs0.013±0.001,P0.01);MMP-3在少量角質(zhì)形成細(xì)胞和個(gè)別血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿表達(dá),LCV組與正常組表達(dá)比較未顯示差異(P0.05);TIMP-1在表皮內(nèi)個(gè)別基底層細(xì)胞和真皮層個(gè)別淋巴細(xì)胞表達(dá),LCV組與正常組表達(dá)比較無(wú)顯著差異(P0.05);(2)MMPs/TIMP-1:LCV組MMP-9/TIMP-1值顯著高于對(duì)照組(4.83±0.30 vs0.14±0.03,P0.01);MMP-3/TIMP-1值與對(duì)照組比較,未顯示明顯差異性(0.09±0.01 vs 0.08±0.02,P0.05)(3)IL-37的表達(dá):IL-37表達(dá)見于部分角質(zhì)形成細(xì)胞,真皮內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿及散在膠原組織,LCV組表達(dá)顯著低于對(duì)照組(0.034±0.002 vs 0.096±0.004,P0.01)。(四)急性期LCV不同病種組間MMPs、IL-37免疫組化蛋白表達(dá)強(qiáng)度比較(1)皮損中MMP-9在ACV組、UV組、HSP組表達(dá)強(qiáng)度均高于對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),ACV組、UV組、HSP組間表達(dá)未見差異(P0.05);而皮損中MMP-3、TIMP-1在各組間表達(dá)均未顯現(xiàn)差異性(P0.05);(2)皮損中IL-37在ACV組、UV組、HSP組表達(dá)強(qiáng)度均低于對(duì)照組(P0.01),UV組、HSP組表達(dá)強(qiáng)度均低于ACV組(P0.01),但UV組與HSP組間未顯示差異性(P0.05)。(五)急性期LCV組織中MMPs、TIMP-1、IL-37m RNA表達(dá)比較(1)LCV組織中MMP-9m RNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組(3.10±0.63 vs 0.84±0.28,P0.01),IL-37m RNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組(29.53±4.80 vs 128.31±28.9),差異有顯著性(P0.01)。(2)LCV組織中MMP-3m RNA、TIMP-1m RNA與對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異(0.32±0.14 vs 0.25±0.14、2.42±1.37 vs 2.07±1.15,P0.05)�！窘Y(jié)論】1.MMP-9、IL-37可能共同參與LCV的發(fā)生及病情變化。2.MMP-9在LCV患者血清及皮損中表達(dá)升高,MMP-9和MMP-9/TIMP-1比值可能與LCV病情活動(dòng)程度正相關(guān)。3.MMP-9在LCV患者尿液中表達(dá)明顯升高,尿液可望作為判斷LCV病情的無(wú)創(chuàng)性指標(biāo)。4.IL-37在LCV患者血清及皮損中表達(dá)下降,提示IL-37水平可能與LCV病情活動(dòng)呈負(fù)相關(guān)。5.LCV患者皮損中MMP-9 m RNA轉(zhuǎn)錄水平與血清MMP-9表達(dá)基本一致,且高于對(duì)照組,而IL-37則相反,低于對(duì)照組。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R543

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2263973