【摘要】：（一）通心絡(luò)保護(hù)急性心肌梗死再灌注心肌損傷的機制：基于Sigmoid Emax數(shù)學(xué)模型的再分析目的：通心絡(luò)(Tongxinluo, TXL)可模擬缺血預(yù)適應(yīng),發(fā)揮縮小急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)無再流面積和心肌缺血/再灌注后梗死范圍的作用,初步機制為保護(hù)了心肌微血管內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)和功能,然而其核心機制尚不清楚。本研究通過評價致死性缺血/再灌注損傷(ischemia reperfusion inj ury, IRI),即再灌注后壞死范圍的嚴(yán)重程度,IRI(%)=壞死范圍(%)-無再流范圍(%),比較TXL對心肌微血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)-功能網(wǎng)絡(luò)的影響,探索TXL減輕心肌IRI的關(guān)鍵指標(biāo)。方法：本研究根據(jù)課題組以往19篇已發(fā)表文獻(xiàn)的結(jié)果數(shù)據(jù),將心肌無再流范圍和梗死范圍的關(guān)系建立數(shù)學(xué)模型。共納入168只中華小型豬的實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析。通過比較缺血預(yù)適應(yīng)(ischemia preconditioning, IPC)、后適應(yīng)、TXL、纈沙坦、地爾硫卓、法舒地爾、瑞舒伐他汀、尼可地爾、辛伐他汀、卡維地洛、替羅非班、維拉帕米、腺苷共13種干預(yù)條件下IRI的程度,確定了缺血預(yù)適應(yīng)組和鈣拮抗劑組分別是IRI程度最輕和最重的兩個組。用主成分分析的方法確定了缺血預(yù)適應(yīng)發(fā)揮心肌保護(hù)的9個關(guān)鍵指標(biāo),即SUR2, iNOS活性,eNOS活性,VE-cadherin, β-catenin, γ-catenin, P-selectin,PKA活性以及eNOS表達(dá)。在這9個關(guān)鍵指標(biāo)中,進(jìn)一步分析確定了TXL發(fā)揮心肌保護(hù)的關(guān)鍵指標(biāo),并與他汀對比。結(jié)果：壞死范圍和無再流范圍符合Sigmoid Emax模型,壞死范圍下降空間(NRS)與IRI的嚴(yán)重度呈正相關(guān)(R2=0.92,P0.01)；NRS與壞死范圍呈正相關(guān)(R2=0.57,P0.01)。心肌微血管內(nèi)皮功能性和結(jié)構(gòu)性指標(biāo)與NRS均成正相關(guān)(R2=0.64,R2=0.62,P均0.01)。TXL使SUR2. iNOS活性、eNOS活性、VE-cadherin、β-catenin、γ-catenin和P-selectin等指標(biāo)均向假手術(shù)組方向恢復(fù),并與他汀組相當(dāng)(P均0.05)。另外,AMI/再灌注模型組增加PKA活性和eNOS表達(dá),TXL可進(jìn)一步增加PKA活性和eNOS表達(dá),也與他汀組相當(dāng)(P均0.05)。在以上九個指標(biāo)中,TXL明顯上調(diào)eNOS活性、eNOS、VE-cadherin、β-catenin、γ-catenin表達(dá),與IPC組無差別(P均0.05),并與他汀組相當(dāng)(P均0.05),與CCB組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。因此,這五個微血管內(nèi)皮功能和結(jié)構(gòu)指標(biāo)可能是TXL減輕IRI的關(guān)鍵指標(biāo)。結(jié)論：本研究提示致死性IRI是心肌壞死的重要原因之一。TXL預(yù)處理可通過模擬IPC改善心臟微血管內(nèi)皮功能和可能與屏障相關(guān)的結(jié)構(gòu),減輕心肌IRI,且其效用與他汀類相當(dāng)。（二）通心絡(luò)通過保護(hù)內(nèi)皮屏障功能減輕糖尿病心肌再灌注損傷的細(xì)胞實驗研究：Angptl4的核心作用及機制目的：我們的系列研究發(fā)現(xiàn),通心絡(luò)能夠防治AMI再灌注后的無再流面積,縮小梗死面積,機制與保護(hù)了心肌微血管內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)和功能的完整性有關(guān)。然而,保護(hù)物質(zhì)的有無及是什么并不清楚。針對這一問題,本課題組前期利用蛋白芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn),心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HCMEC)在接受缺氧/復(fù)氧(H/R)處理后血管生成素樣蛋白-4(Angptl4)的表達(dá)和分泌上調(diào),而TXL可進(jìn)一步增加Angptl4的表達(dá)和分泌水平。因此Angptl4可能是TXL防治心肌無再流并減輕心肌再灌注損傷的保護(hù)物質(zhì)。另一方面,本課題組既往研究證實：TXL可顯著改善心肌無再流和再灌注損傷,都是基于非疾病狀態(tài)時,特別是內(nèi)皮功能狀態(tài)正常時,與臨床轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)還有距離。但在糖尿病時以及明確的內(nèi)皮功能損傷的情況下,TXL是否仍具有保護(hù)AMI無再流的保護(hù)作用尚不清楚。腫瘤相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),Angptl4由內(nèi)皮細(xì)胞分泌,可調(diào)控內(nèi)皮屏障功能。PPARy激活可上調(diào)Angptl4的表達(dá)。研究也發(fā)現(xiàn)Angptl4也能保護(hù)缺血/再灌注損傷心肌,但是否也是通過保護(hù)了內(nèi)皮屏障功能而實現(xiàn)尚不清楚。心肌組織中的PPARα表達(dá)豐富,能否調(diào)控Angptl4也不清楚。本研究旨在深入研究高糖和氧-糖-血清剝奪/復(fù)氧(OGSD/R)共同刺激下TXL對內(nèi)皮屏障功能的影響是否通過Angptl4起作用,并與PPARα有關(guān)?以明確內(nèi)皮細(xì)胞分泌的Angptl4在TXL保護(hù)內(nèi)皮屏障中的核心作用和保護(hù)物質(zhì)及其機制。方法：人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞在高糖(18mM)培養(yǎng)基中培養(yǎng),將第5-6代細(xì)胞隨機分為正常糖OGSD/R組、高糖OGSD/R組、胰島素組Angptl4組1μg/ml)、TXL組Angptl4+陰性siRNA組、TXL+陰性siRNA組、Angptl4+Angptl4 siRNA組、TXL+Angptl4 siRNA組、Angptl4+MK886組(PPARα抑制劑,1μM)、TXL+MK886組、MK886組,共12組,每組6次重復(fù)。利用siRNA敲低內(nèi)皮細(xì)胞Angptl4的表達(dá),以證實內(nèi)皮細(xì)胞是否通過Angptl4發(fā)揮保護(hù)作用。各組給予OGSD/R干預(yù)。熒光定量檢測各組單層內(nèi)皮通透性。共聚焦顯微鏡下觀察內(nèi)皮細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)變化、觀察黏附連接蛋白VE-cadherin定位和內(nèi)化。ELISA法檢測細(xì)胞上清中Angptl4的含量、胞核PPARα活性。Real time-PCR法檢測Angptl4 mRNA表達(dá)。采用Western blot檢測Angptl4表達(dá),內(nèi)皮屏障相關(guān)細(xì)胞間連接蛋白總integrin-α5、總β-integrin、總JAM-A、總Occludin、總p120-catenin、總VE-cadherin的表達(dá)。采用膜蛋白提取法提取內(nèi)皮細(xì)胞膜蛋白,并采用Western blot測定細(xì)胞間連接蛋白膜integrin-α5、膜JAM-A、膜VE-cadherin的表達(dá),以評價Angptl4、TXL和PPARα通路在高糖OGSD/R狀態(tài)下對心肌微血管內(nèi)皮屏障功能的作用和影響。結(jié)果：1.與正常單層內(nèi)皮細(xì)胞相比,正常和高糖OGSD/R組內(nèi)皮細(xì)胞通透性均顯著增高(P均0.05),且高糖比正常糖組顯著增高(P0.05)。與高糖OGSD/R組比較,胰島素、Angptl4和TXL預(yù)處理組內(nèi)皮通透性均顯著降低(P均0.05),而且TXL與胰島素及Angptl4的效果相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組內(nèi)皮通透性均顯著增高(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于HCMEC自身的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組內(nèi)皮通透性顯著增高(P0.05),提示PPARα通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。2.測定內(nèi)皮細(xì)胞Occludin、JAM-A、VE-cadherin、p120-catenin、integrin-α5、 integrin-β1表達(dá),用于評價內(nèi)皮細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)的完整性。與正常糖OGSD/R組比較,高糖OGSD/R組JAM-A、VE-cadherin的表達(dá)均顯著降低(P均0.05)。與高糖OGSD/R組比較,胰島素和TXL預(yù)處理組JAM-A、VE-cadherin、integrin-a5表達(dá)均顯著增高(P均0.05),而Angptl4組JAM-A、integrin-a5表達(dá)均顯著增高P均0.05),且TXL與胰島素及Angptl4對JAM-A表達(dá)的作用相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組JAM-A、VE-cadherin的表達(dá)均顯著降低(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于HCMEC自身的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組JAM-A、VE-cadherin、integrin-α5、integrin-β1表達(dá)顯著降低(P0.05),提示PPARα通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。3.檢測內(nèi)皮細(xì)胞膜JAM-A、膜VE-cadherin和膜integrin-α5的表達(dá)可更好地反映屏障相關(guān)細(xì)胞間連接蛋白的功能。與正常糖OGSD/R組比較,高糖OGSD/R組三種內(nèi)皮屏障相關(guān)膜蛋白表達(dá)均顯著降低(P均0.05)。與高糖OGSD/R組比較,胰島素、Angptl4和TXL預(yù)處理組膜VE-cadherin、膜integrin-α5的表達(dá)均顯著增高(P均0.05),而且TXL與胰島素及Angptl4對膜VE-cadherin和膜integrin-a5表達(dá)的作用相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組膜VE-cadherin和膜integrin-α5的表達(dá)均顯著降低(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于HCMEC自身的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組膜integrin-α5的表達(dá)顯著降低(P0.05),提示PPARa通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。4.檢測內(nèi)皮細(xì)胞Anpglt4的表達(dá)。與正常糖OGSD/R組比較,高糖OGSD/R組Angptl4表達(dá)均顯著降低(P均0.05)。與高糖OGSD/R組比較,胰島素、Angptl4和TXL預(yù)處理組Angptl4表達(dá)均顯著增高(P均0.05),而且TXL與胰島素及Angptl4(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組Angptl4表達(dá)均顯著降低(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL對Angptl4的上調(diào)。與TXL組比較,TXL+MK886組Angptl4表達(dá)顯著降低(P0.05),提示PPARα通路抑制劑能阻斷TXL對Angptl4的上調(diào)。5.測定內(nèi)皮細(xì)胞PPARα活性,用于評價TXL的保護(hù)機制。與正常糖OGSD/R組比較,高糖OGSD/R組PPARa活性均顯著降低(P均0.05)。與高糖OGSD/R組比較,胰島素和TXL預(yù)處理組PPARα活性均顯著增高(P均0.05),且TXL與胰島素的效果相當(dāng)(P0.05),而Angptl4組比胰島素和TXL組均顯著降低(P均0.05),說明Angptl4不能激活PPARα。與TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組PPARα活性無顯著改變(P0.05),提示敲低Angptl4的表達(dá)不能阻斷TXL對PPARa的活化。與TXL組比較,TXL+MK886組PPARa活性顯著降低(P0.05),提示PPARa通路抑制劑能阻斷TXL對PPARa的活化。結(jié)論：1.正常糖和高糖OGSD/R均致心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞的屏障功能損傷,且后者損傷更重。2.胰島素、Angptl4和TXL均能保護(hù)高糖OGSD/R的內(nèi)皮屏障功能,且TXL保護(hù)內(nèi)皮屏障的效果不亞于胰島素和Angptl4。3.TXL能夠保護(hù)心肌微血管內(nèi)皮通透性：Angptl4是其核心保護(hù)物質(zhì)。4.TXL對內(nèi)皮屏障的保護(hù)作用與其通過PPARα通路上調(diào)Angptl4有關(guān)。（三）通心絡(luò)通過保護(hù)內(nèi)皮屏障功能減輕糖尿病心肌再灌注損傷的動物實驗研究：Angptl4的核心作用及機制目的：以動物實驗方法進(jìn)一步驗證細(xì)胞實驗的發(fā)現(xiàn)的結(jié)果,研究目的如下：1.探明非糖尿病非糖尿病瘦鼠、糖尿病鼠分別發(fā)生AMI再灌注后心肌梗死范圍和再灌注損傷的程度,對心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HCMEC)凋亡的影響以及對心肌微血管內(nèi)皮屏障功能有無損傷。2.胰島素、Angptl4和TXL能否保護(hù)糖尿病鼠AMI再灌注后心肌梗死范圍和再灌注損傷、HCMEC凋亡及心肌微血管內(nèi)皮屏障功能。3.Angptl4 siRNA敲低Angptl4的表達(dá)能否消除TXL對糖尿病鼠AMI再灌注后心肌梗死范圍和再灌注損傷、HCMEC凋亡及心肌微血管內(nèi)皮屏障功能的保護(hù)作用.4.PPARα是否參與調(diào)控TXL對糖尿病AMI再灌注后心肌梗死范圍和再灌注損傷、HCMEC凋亡及內(nèi)皮屏障功能的保護(hù)作用。方法：12周齡雄性ZDF大鼠104只,隨機分為糖尿病鼠假手術(shù)組、糖尿病鼠MI對照組、非糖尿病非糖尿病瘦鼠MI組、胰島素組(5U/100g體重)、TXL組(5mg/100g體重,AMI前1h給予單次負(fù)荷劑量)、Angptl4組(10μg/kg體重)、TXL+陰性siRNA組、Angptl4+陰性siRNA組、TXL+Angptl4 siRNA組、Angptl4+Angptl4 siRNA組、TXL+MK886組(PPARα通路抑制劑,0.4mg/kg體重)、Angptl4+MK886組和MK886組,共13組,每組8只。開胸結(jié)扎冠狀動脈45 min,再開放180min,建立AMI再灌注模型。使用siRNA在體敲低Angptl4的表達(dá)。術(shù)中監(jiān)測血流動力學(xué)變化；病理染色法測定心肌梗死面積(area of necrosis,AN);采用Miles法通過熒光定量測定心肌組織萃取液中異硫氰酸熒光素-右旋糖酐(FITC-dextran)的濃度；蘇木素-伊紅染色法評估心肌組織灶性出血程度；免疫組化法測定心肌組織髓過氧化物酶(MPO)和胞漿連環(huán)蛋白-p120(p120-catenin)表達(dá)；電鏡觀察心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；化學(xué)法測定隨機血糖和血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)活性；ELISA法測定血清心肌鈣蛋白I(cTnI)水平和心肌組織PPARα活性；TUNEL測定心肌組織細(xì)胞凋亡,并結(jié)合內(nèi)皮標(biāo)記分子CD34雙染法測定心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡；蛋白印跡(Western blot)方法檢測PPARα、Angptl4、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)、整合素-α5(Interin-α5)和連接黏附分子(JAM-A)的表達(dá),以評價Angptl4.TXL和PPARα通路在糖尿病鼠MI再灌注時對心臟微血管內(nèi)皮屏障功能的作用和影響。結(jié)果：1.AMI再灌注期間大鼠的心臟血流動力學(xué)檢測：在缺血前、缺血后45min及再灌注180min時,與糖尿病鼠假手術(shù)組相比,糖尿病鼠和非糖尿病瘦鼠MI對照組血流動力學(xué)參數(shù)LVEDP、dp/dtmax及dp/dtmin均顯著惡化(P均0.05),且糖尿病鼠比非糖尿病瘦鼠組顯著惡化(P均0.05)。與糖尿病鼠MI對照組比較,胰島素組、Angptl4組及TXL組LVEDP、dp/dtmax及dp/dtmin均顯著改善(P均0.05),且TXL與胰島素及Angptl4的效果相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組LVEDP、dp/dtmax及dp/dtmin均顯著惡化(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于內(nèi)源性的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組LVEDP、dp/dtmax及dp/dtmin均顯著惡化(P均0.05),提示PPARa通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。2.檢測心肌壞死區(qū)范圍、CK活性、cTnI水平、心肌組織細(xì)胞凋亡以評估AMI再灌注后心肌損傷程度：與糖尿病鼠假手術(shù)組相比,糖尿病鼠和非糖尿病瘦鼠MI對照組心肌壞死區(qū)范圍、CK活性、cTnI水平、心肌組織細(xì)胞凋亡均顯著增加(P均0.05),且糖尿病鼠比非糖尿病瘦鼠組更高(P均0.05)。與糖尿病鼠MI對照組比較,胰島素組、Angptl4組及TXL組心肌壞死區(qū)范圍、CK活性、cTnI水平、心肌組織細(xì)胞凋亡均顯著降低(P均0.05),且TXL與胰島素及Angptl4的效果相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組心肌壞死區(qū)范圍、CK活性、cTnI水平、心肌組織細(xì)胞凋亡均顯著增加(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于內(nèi)源性的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組心肌壞死區(qū)范圍、CK活性、cTnI水平、心肌組織細(xì)胞凋亡均顯著增加(P均0.05),提示PPARα通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。3.危險區(qū)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的檢測：與糖尿病鼠假手術(shù)組相比,糖尿病鼠和非糖尿病瘦鼠MI對照組心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡均顯著增加(P均0.05),且糖尿病鼠比非糖尿病瘦鼠組顯著增加(P均0.05)。與糖尿病鼠MI對照組比較,胰島素組、Angptl4組及TXL組心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡均顯著降低(P均0.05),且TXL與胰島素及Angptl4的效果相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡均顯著增加(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于內(nèi)源性的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡均顯著增加(P均0.05),提示PPARa通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。4.檢測危險區(qū)心肌FITC-右旋糖酐含量、灶性出血、髓過氧化物酶(MPO)表達(dá)以評估心肌微血管內(nèi)皮屏障功能。與糖尿病鼠假手術(shù)組相比,糖尿病鼠和非糖尿病瘦鼠MI對照組心肌FITC-右旋糖酐含量、灶性出血、MPO表達(dá)均顯著增加(P均0.05),且糖尿病鼠比非糖尿病瘦鼠組顯著增加(P均0.05)。與糖尿病鼠MI對照組比較,胰島素組、Angptl4組及TXL組心肌FITC-右旋糖酐含量、灶性出血、MPO表達(dá)均顯著降低(P均0.05),且TXL與胰島素及Angptl4的效果相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組心肌FITC-右旋糖酐含量、灶性出血、MPO表達(dá)均顯著增加(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于內(nèi)源性的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組心肌FITC-右旋糖酐含量、灶性出血、MPO表達(dá)均顯著增加(P均0.05),提示PPARa通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。5.檢測危險區(qū)心肌JAM-A、VE-cadherin、p120-catenin和Integrin-a5的表達(dá)以評估心肌內(nèi)皮屏障結(jié)構(gòu)完整性：與糖尿病鼠假手術(shù)組相比,糖尿病鼠和非糖尿病瘦鼠MI對照組心肌JAM-A、VE-cadherin和p120-catenin的表達(dá)均顯著降低(P均0.05),且糖尿病鼠比非糖尿病瘦鼠組顯著降低(P均0.05)。與糖尿病鼠MI對照組比較,胰島素組、Angptl4組及TXL組心肌JAM-A、VE-cadherin、p120-catenin和Integrin-a5的表達(dá)均顯著增加(P均0.05),且TXL與Angptl4對上述四種連接蛋白表達(dá)的作用相當(dāng)(P均0.05),TXL與胰島素對其中JAM-A、VE-cadherin、p120-catenin蛋白表達(dá)的作用相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組心肌JAM-A、VE-cadherin和p120-catenin的表達(dá)均顯著降低(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL的保護(hù)作用,TXL的保護(hù)作用依賴于內(nèi)源性的Angptl4。與TXL組比較,TXL+MK886組心肌JAM-A、VE-cadherin、p120-catenin和Integrin-a5的表達(dá)均顯著降低(P均0.05),提示PPARa通路抑制劑能阻斷TXL的保護(hù)作用。6.檢測心肌Angptl4蛋白表達(dá)：與糖尿病鼠假手術(shù)組相比,糖尿病鼠和非糖尿病瘦鼠MI對照組心肌Angptl4蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.05),且糖尿病鼠比非糖尿病瘦鼠組顯著降低(P均0.05)。與糖尿病鼠MI對照組比較,胰島素組、Angptl4組及TXL組心肌Angptl4蛋白表達(dá)均顯著增加(P均0.05),且TXL與胰島素及Angptl4的效果相當(dāng)(P均0.05)。與Angptl4+Angptl4 siRNA組和TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組心肌Angptl4蛋白表達(dá)均顯著降低(P均0.05),說明敲低Angptl4的表達(dá)能阻斷TXL對Angptl4的上調(diào)。與TXL組比較,TXL+MK886組心肌Angptl4蛋白表達(dá)均顯著降低(P均0.05),提示PPARα通路抑制劑能阻斷TXL對Angptl4的上調(diào)。7.檢測危險區(qū)心肌PPARα的活性以探明TXL的保護(hù)機制：與糖尿病鼠假手術(shù)組相比,糖尿病鼠和非糖尿病瘦鼠MI對照組心肌PPARα活性均顯著降低(P均0.05),且糖尿病鼠比非糖尿病瘦鼠組顯著降低(P0.05)。與糖尿病鼠MI對照組比較,胰島素和TXL預(yù)處理組PPARα活性均顯著增加(P均0.05),且TXL與胰島素的效果相當(dāng)(P0.05),而Angptl4組比胰島素和TXL組均顯著降低(P均0.05),說明Angptl4不能激活PPARα。與TXL組比較,TXL+Angptl4 siRNA組心肌PPARα活性無顯著改變(P0.05),提示敲低Angptl4的表達(dá)不能阻斷TXL對PPARa的活化。與TXL組比較,TXL+MK886組PPARα活性顯著降低(P0.05),提示PPARα通路抑制劑能阻斷TXL對PPARα的活化。結(jié)論：1.非糖尿病瘦鼠和糖尿病鼠MI再灌注后均致心肌再灌注損傷、心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及內(nèi)皮屏障功能損傷,且糖尿病鼠損傷更重。2.胰島素、Angptl4和TXL均能保護(hù)糖尿病鼠MI再灌注后的心肌再灌注損傷、心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及內(nèi)皮屏障功能損傷,且TXL的保護(hù)效果不亞于胰島素和Angptl4。3.TXL能夠保護(hù)糖尿病鼠MI再灌注后的心肌再灌注損傷、心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及內(nèi)皮屏障功能損傷；Angptl4是其核心保護(hù)物質(zhì)。4.TXL對糖尿病再灌注心肌的保護(hù)作用與其通過PPARα通路上調(diào)Angptl4有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2136928