【摘要】：【目的】1.設(shè)立冠心病患者組并以健康志愿者為對(duì)照,運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分離和鑒定相關(guān)差異蛋白,初步闡明差異蛋白在冠心病中的作用。2.分別測(cè)定不同劑量薤白皂苷化合物對(duì)ADP誘導(dǎo)活化的大鼠血小板膜糖蛋白CD62P表達(dá)率及血小板聚集率的影響,探討薤白皂苷化合物對(duì)血小板活化和聚集過(guò)程的影響。3.應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定出最優(yōu)劑量薤白皂苷化合物作用下的大鼠血小板差異蛋白,探究差異蛋白在血小板活化及聚集中的作用。【研究方法】1.為探討冠心病患者血小板蛋白質(zhì)組學(xué)改變,本研究納入冠心病患者組以及健康志愿者人組作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,靜脈抽取10ml空腹全血,采用差速離心的方法制備血小板,將血小板溶于Lysis buffer中,并通過(guò)丙酮沉淀的方法提取蛋白,用基質(zhì)輔助激光解析/電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-TOF)進(jìn)行鑒定,并查詢差異蛋白作用。分析其對(duì)冠心病發(fā)展的影響。2.為了驗(yàn)證薤白皂苷作用后血小板活化功能的改變,研究選擇雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。用生理鹽水(2m L/d)、阿司匹林(30mg/kg/d)、不同濃度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷化合物灌胃大鼠7天后,制備大鼠血小板懸液,加入終濃度20μM ADP激活10min。檢測(cè)大鼠血小板膜糖蛋白CD62P表達(dá)率,探討不同劑量薤白皂苷化合物作用血小板后的活化功能改變。3.為了驗(yàn)證薤白皂苷作用后血小板聚集功能的改變,研究選擇雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。用生理鹽水(2m L/d)、阿司匹林(30mg/kg/d)、不同濃度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷化合物灌胃大鼠7天后,制備大鼠血小板懸液,加入終濃度20μM ADP激活10min。檢測(cè)大鼠血小板聚集率,探討不同劑量薤白皂苷化合物作用血小板后的聚集功能改變。4.為了鑒定最優(yōu)劑量薤白皂苷化合物作用下的大鼠血小板差異蛋白,探討薤白皂苷對(duì)ADP誘導(dǎo)大鼠血小板的蛋白質(zhì)組影響。研究選擇雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,實(shí)驗(yàn)分為2個(gè)處理組:2m L/d生理鹽水對(duì)照組、最優(yōu)劑量薤白皂苷組(經(jīng)檢測(cè)為抑制血小板活化和聚集的最優(yōu)劑量)。用上述劑量灌胃大鼠7天后制備血小板懸液,加入終濃度20u M ADP激活10min。提取血小板蛋白質(zhì)采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分離及鑒定,并探究差異蛋白在血小板活化和聚集環(huán)節(jié)所起作用�！窘Y(jié)果】1.通過(guò)雙向電泳分別獲得2張冠心病患者凝膠和健康志愿者凝膠,分析出17個(gè)差異蛋白。質(zhì)譜鑒定并搜索數(shù)據(jù)庫(kù)后發(fā)現(xiàn),與健康志愿組相比,冠心病組有7個(gè)蛋白表達(dá)出現(xiàn)差異:Plastin-2、Coronin-1A、Clusterin、Annexin A1、Chloride intracellular channel protein 1、Peroxiredoxin-6、Peroxiredoxin-2。2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,不同濃度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷均能一定程度上降低CD62P表達(dá)率,且呈一定的濃度依賴性,且薤白高劑量組抑制作用最為顯著。3.血小板聚集率結(jié)果顯示,不同濃度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷與對(duì)照組相比,均能一定程度上抑制血小板的聚合作用,且亦呈一定的濃度依賴性。根據(jù)血小板抑制率公式計(jì)算阿司匹林組、薤白低劑量組、薤白中劑量組、薤白高劑量組對(duì)ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集的抑制率依次為19.08%、14.46%、22.06%、33.85%。薤白高劑量組作用更為突出。4.薤白皂苷高劑量處理組和對(duì)照組血小板總蛋白分別獲得3張凝膠圖譜,質(zhì)譜并搜索數(shù)據(jù)庫(kù)后發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,薤白高劑量處理組有7個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)改變:Calreticulin、Actin、LIM and SH3 domain protein 1、RCG55135、Protein phosphatase 1、Suppressor of IKBKE 1、Ribulose-5-phosphate-3-epimerase�！窘Y(jié)論】1.血小板蛋白質(zhì)Plastin-2、Peroxiredoxin-2、Peroxiredoxin-6、Annexin A1、Chloride intracellular channel protein 1、Clusterin、Coronin-1A是冠心病患者與健康人差異表達(dá)蛋白。2.不同濃度的薤白皂苷能夠一定程度上抑制ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板活化及聚集,其中高劑量組效果更明顯。3.血小板蛋白質(zhì)Calreticulin、Actin、LIM and SH3 domain protein 1、RCG55135、Protein phosphatase 1、Suppressor of IKBKE 1、Ribulose-5-phosphate-3-epimerase是薤白皂苷處理ADP激活大鼠血小板的差異表達(dá)蛋白。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of different doses of Allium macrostemon on platelet activation and platelet aggregation in patients with coronary heart disease ( CHD ) and to investigate the effects of different doses of Allium macrostemon on platelet activation and platelet aggregation . In order to study the effect of macrostemon on platelet aggregation after 7 days , the rats were divided into two groups : normal saline ( 2m L / d ) , aspirin ( 30 mg / kg / day ) , different concentration ( 168 mg / kg , 337 mg / kg , 674mg / kg ) . The results showed that compared with the control group , the inhibitory rate of macrostemon on ADP - induced platelet aggregation was 19.08 % , 14.46 % , 22.06 % and 33.85 % . Conclusion : Plastin - 2 , Peroxiretin - 2 , Peroxiretin - 6 , annexin A1 , Chloride intracellular channel protein 1 , Tazterin , Coronin - 1A are the differentially expressed proteins of ADP - induced platelet activation and aggregation in patients with coronary heart disease .
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2122954