【摘要】：背景近年來隨著遺傳學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,基因表達(dá)分析被廣泛應(yīng)用于疾病的研究�；谕庵苎墓谛牟〔町惢虮磉_(dá)分析為為冠心病的早期預(yù)防、診斷和治療提供了新的視角�；虮磉_(dá)分析不僅有助于探索冠心病的復(fù)雜性,并且可以充分提供每個個體的遺傳風(fēng)險信息,從而實現(xiàn)對高危人群的早期預(yù)防。外周血基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的變化可以在疾病過程中反應(yīng)病人病理和生理狀況的變化。然而,對于基因表達(dá)的調(diào)控是一個非常復(fù)雜的過程,轉(zhuǎn)錄調(diào)控的改變與許多疾病的發(fā)病相關(guān)。中介體復(fù)合物(MED)在真核生物的轉(zhuǎn)錄過程中起到至關(guān)重要的作用。由MED6基因編碼的中介體復(fù)合物亞基6蛋白是MED的重要組成部分。既往研究表明MED6基因廣泛參與了脂肪酸、甘油三酯和酮體的代謝通路。本課題組在前期進(jìn)行的冠心病外周血差異基因表達(dá)分析中發(fā)現(xiàn),冠心病病人外周血中MED6基因呈現(xiàn)顯著低表達(dá)。目的本研究將進(jìn)一步明確MED6基因是否在冠心病病人外周血中存在表達(dá)差異,以及MED6基因表達(dá)量的變化是否可能作為冠心病風(fēng)險評估重要參考指標(biāo)。在臨床資料的分析基礎(chǔ)之上,結(jié)合MED6基因表達(dá)水平的分析結(jié)果,我們設(shè)想MED6基因可能通過影響甘油三酯代謝促進(jìn)了冠心病的發(fā)病,并對MED6基因的生物學(xué)功能進(jìn)行驗證。方法選取確診冠心病病人106例作為冠心病組,105例非冠心病者為對照組。對所有納入研究對象進(jìn)行詳細(xì)的臨床資料收集和分析比較。根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果,按照Gensini評分系統(tǒng)對冠狀動脈血管病變嚴(yán)重程度進(jìn)行評分。采用熒光定量PCR的方法來檢測MED6基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)差異。并采用RNA干擾技術(shù)對MED6基因的生物學(xué)功能進(jìn)行驗證。結(jié)果研究對象的臨床資料分析結(jié)果表明:在年齡、性別、BMI、高血壓病史、吸煙史、收縮壓、舒張壓及總膽固醇(TC)等方面,兩組未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異。而與對照組相比,冠心病組合并糖尿病情況及空腹血糖水平明顯高于對照組;冠心病家族史比例明顯高于對照組;血甘油三酯水平(TG)和低密度脂蛋白膽固醇水平(LDL-C)明顯高于對照組;相反,高密度脂蛋白膽固醇水平(HDL-C)明顯低于對照組,差別均有統(tǒng)計學(xué)意義。外周血RNA實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示,冠心病組2-△Ct為0.013±0.012,對照組2-△Ct為0.036±0.034,兩組差別有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(t=-6.45,P=0.00)。MED6基因的相對表達(dá)量統(tǒng)計采用2-ΔΔCt方法。結(jié)果顯示,在m RNA水平冠心病組外周血中MED6基因表達(dá)明顯低于對照組,其相對表達(dá)量為0.37±0.36倍。逐步Logistic回歸分析結(jié)果顯示:本研究資料中MED6基因高表達(dá)可使冠心病的患病風(fēng)險降低85%。MED6基因的低表達(dá)、糖尿病、LDL-C增高和HDL-C降低均是冠心病的獨立危險因素。雙變量相關(guān)分析結(jié)果顯示:MED6基因的相對表達(dá)量與血漿TG水平呈顯著的負(fù)相關(guān),與Gensini分值呈顯著的負(fù)相關(guān)。表明MED6基因表達(dá)量越低,血漿TG濃度可能越高。MED6基因的表達(dá)量越低,冠狀動脈粥樣硬化病變越重。根據(jù)冠心病組和對照組各樣本實時熒光定量PCR所得MED6相對表達(dá)量的2-△Ct值繪制ROC曲線,曲線下面積(AUC)為0.79±0.03(P=0.00)。以約登指數(shù)最大值確定的MED6基因相對表達(dá)量cutoff值為0.014。敏感度為76.40%,特異性為71.43%。陽性預(yù)測值為72.97%,陰性預(yù)測值為75.00%。在體外培養(yǎng)的大鼠心肌細(xì)胞中靶向的沉默MED6基因,轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示,在RNA水平干擾組MED6基因表達(dá)量表達(dá)明顯低于陰性對照組,其相對表達(dá)量為0.33±0.07(P=0.00)。Western Blot結(jié)果顯示:干擾組與陰性對照組間β-actin蛋白表達(dá)上無明顯差異,而MED6基因蛋白的表達(dá)存在差異顯著。干擾組MED6蛋白的表達(dá)為陰性對照組的0.32±0.02倍。達(dá)到預(yù)期的干擾效率。轉(zhuǎn)染過程中分別留取干擾組和陰性對照組轉(zhuǎn)染前、轉(zhuǎn)染后12小時、轉(zhuǎn)染后24小時、轉(zhuǎn)染后36小時和轉(zhuǎn)染后48小時的培養(yǎng)基上清進(jìn)行TG濃度的檢測。結(jié)果顯示:干擾組TG濃度于轉(zhuǎn)染后12小時呈明顯增高趨勢,而陰性對照組TG濃度隨時間變化無差異。結(jié)論MED6基因在冠心病病人外周血中表達(dá)顯著降低;MED6基因表達(dá)量與血漿TG水平呈負(fù)相關(guān),對TG代謝的影響可能是MED6基因促進(jìn)冠心病發(fā)病的機(jī)制之一;外周血中MED6基因的低表達(dá)可能作為冠心病早期預(yù)警的重要遺傳學(xué)參考指標(biāo)。
[Abstract]:The expression of MED6 gene in peripheral blood of patients with coronary heart disease ( CHD ) was significantly lower than that of control group . The expression of MED6 gene was significantly lower than that of control group . The results showed that the expression of MED6 gene was significantly lower than that of control group . The results showed that the expression of MED6 gene was significantly lower than that of negative control group .
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R541.4

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本文編號：2121796