【摘要】：研究背景與研究目的:目前冠心病、高血壓等慢性血管性疾病發(fā)病率逐年增加,防治工作極為重要。內(nèi)皮細胞功能紊亂是血管性疾病發(fā)生、發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)。血管內(nèi)脂質(zhì)代謝失調(diào)及缺氧等多種原因?qū)е聝?nèi)皮細胞的損傷,血液與血管之間的屏障作用減弱,造成血小板黏附聚集,血管痙攣,血栓形成,血管腔狹窄。因此,保護及維持血管內(nèi)皮細胞的正常功能,促進受損內(nèi)皮細胞的增殖及提高細胞存活率是目前慢性損傷性血管疾病的研究熱點。微小RNA(mircoRNA)是一種典型的多功能非編碼RNA,能在轉(zhuǎn)錄水平降解或者抑制靶標mRNA的表達,調(diào)控細胞的生物功能,與細胞生成,炎癥及腫瘤發(fā)展等多種病理生理相關(guān)。自噬是細胞內(nèi)一種保護性程序,能夠消化降解細胞內(nèi)損傷的細胞器來維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。微小RNA通過自噬對動脈粥樣硬化的發(fā)生與進展的研究已有報道,而其中miR-155在損傷內(nèi)皮細胞的作用研究甚少。本課題擬討論miR-155對氧化應(yīng)激條件下受損內(nèi)皮細胞功能的影響,并探討其可能調(diào)控機制。方法:1、在SicenceCELL細胞庫中購買人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(HUVECs),雙氧水(H2O2)處理細胞后構(gòu)建氧化應(yīng)激細胞模型,通過檢測細胞內(nèi)毒性物質(zhì)氧自由基的生成量及自噬程度等指標對細胞模型進行鑒定;2、在成功復(fù)制體外氧化應(yīng)激細胞模型上,利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染miR-155,監(jiān)測轉(zhuǎn)染后細胞毒性物質(zhì)的生成量及細胞增殖存活率的影響。同時采用RT-PCR和Western blotting、共聚焦免疫熒光技術(shù)檢測損傷后細胞內(nèi)的自噬發(fā)生的程度;3、探索ATG5在miR-155調(diào)控功能紊亂的內(nèi)皮細胞的作用。結(jié)果:1、通過對不同濃度時間的H2O2摸索,在400nmol/l濃度12小時處理的內(nèi)皮細胞氧自由基生成量趨于平穩(wěn),而自噬水平最高。利用此濃度及時間點復(fù)制體外氧化應(yīng)激細胞模型。2、抑制miR-155表達后損傷的內(nèi)皮細胞內(nèi)自噬程度增高,細胞內(nèi)活性氧ROS生成減少,細胞存活率增加。3、miR-155通過調(diào)控ATG5的表達來調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞自噬水平來影響內(nèi)皮細胞的功能。結(jié)論:miR-155通過自噬減少細胞毒性物質(zhì)ROS的生成,提高氧化應(yīng)激條件下受損內(nèi)皮細胞的存活率;其中,自噬的調(diào)控作用可能是通過ATG5通路來實現(xiàn)。
[Abstract]:Background and objective: the incidence of coronary heart disease, hypertension and other chronic vascular diseases is increasing year by year. Endothelial dysfunction is an important pathological basis for the occurrence and development of vascular diseases. The dysfunction of lipid metabolism in blood vessel and anoxia lead to the injury of endothelial cells and the weakening of the barrier between blood and blood vessel, resulting in platelet adhesion, vasospasm, thrombosis and stenosis of blood vessel. Therefore, protecting and maintaining the normal function of vascular endothelial cells, promoting the proliferation of injured endothelial cells and increasing the cell survival rate are the research focus of chronic vascular diseases. MicroRNA (mircoRNA) is a typical multifunctional non-coding RNAs that can degrade or inhibit the expression of target mRNA at the transcriptional level, regulate the biological function of cells, and be related to many pathophysiology, such as cell formation, inflammation and tumor development. Autophagy is a protective procedure in cells that can digest organelles that degrade intracellular damage to maintain the homeostasis of the intracellular environment. MicroRNA has been reported on the pathogenesis and progression of atherosclerosis through autophagy, but the role of miR-155 in the injury of endothelial cells is rarely studied. The purpose of this study was to investigate the effects of miR-155 on the function of injured endothelial cells under oxidative stress and its possible regulatory mechanisms. Methods Cell models of oxidative stress were established by treating human umbilical vein endothelial cell line (HUVECs) with hydrogen peroxide (H _ 2O _ 2) in the Sicence cell bank. The cell model was identified by detecting the amount of oxygen free radicals and the degree of autophagy. The effects of transfection of miR-155 on the production of cytotoxic substances and the survival rate of cell proliferation were monitored. At the same time, RT-PCR and Western blotting were used to detect the degree of autophagy after injury by confocal immunofluorescence, and to explore the role of ATG5 in endothelial cells with miR-155 regulatory dysfunction. Results the oxygen free radical production of endothelial cells treated with 400nmol/l for 12 hours tended to be stable and autophagy was the highest by groping for H2O2 at different concentrations. In vitro oxidative stress cell model was established at this concentration and time point. After inhibiting the expression of miR-155, the degree of intracellular autophagy was increased, and the production of reactive oxygen species (Ros) was decreased. Cell survival increased. 3miR-155 affected endothelial cell function by regulating the expression of ATG5 to regulate the level of endothelial autophagy. Conclusion the fraction miR-155 reduces the production of Ros by autophagy and increases the survival rate of injured endothelial cells under oxidative stress, and the regulation of autophagy may be mediated by ATG5 pathway.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R54

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本文編號：2121697