【摘要】：研究背景與研究目的:目前冠心病、高血壓等慢性血管性疾病發(fā)病率逐年增加,防治工作極為重要。內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂是血管性疾病發(fā)生、發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)。血管內(nèi)脂質(zhì)代謝失調(diào)及缺氧等多種原因?qū)е聝?nèi)皮細(xì)胞的損傷,血液與血管之間的屏障作用減弱,造成血小板黏附聚集,血管痙攣,血栓形成,血管腔狹窄。因此,保護(hù)及維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能,促進(jìn)受損內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及提高細(xì)胞存活率是目前慢性損傷性血管疾病的研究熱點(diǎn)。微小RNA(mircoRNA)是一種典型的多功能非編碼RNA,能在轉(zhuǎn)錄水平降解或者抑制靶標(biāo)mRNA的表達(dá),調(diào)控細(xì)胞的生物功能,與細(xì)胞生成,炎癥及腫瘤發(fā)展等多種病理生理相關(guān)。自噬是細(xì)胞內(nèi)一種保護(hù)性程序,能夠消化降解細(xì)胞內(nèi)損傷的細(xì)胞器來(lái)維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。微小RNA通過(guò)自噬對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與進(jìn)展的研究已有報(bào)道,而其中miR-155在損傷內(nèi)皮細(xì)胞的作用研究甚少。本課題擬討論miR-155對(duì)氧化應(yīng)激條件下受損內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響,并探討其可能調(diào)控機(jī)制。方法:1、在SicenceCELL細(xì)胞庫(kù)中購(gòu)買(mǎi)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVECs),雙氧水(H2O2)處理細(xì)胞后構(gòu)建氧化應(yīng)激細(xì)胞模型,通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)毒性物質(zhì)氧自由基的生成量及自噬程度等指標(biāo)對(duì)細(xì)胞模型進(jìn)行鑒定;2、在成功復(fù)制體外氧化應(yīng)激細(xì)胞模型上,利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染miR-155,監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞毒性物質(zhì)的生成量及細(xì)胞增殖存活率的影響。同時(shí)采用RT-PCR和Western blotting、共聚焦免疫熒光技術(shù)檢測(cè)損傷后細(xì)胞內(nèi)的自噬發(fā)生的程度;3、探索ATG5在miR-155調(diào)控功能紊亂的內(nèi)皮細(xì)胞的作用。結(jié)果:1、通過(guò)對(duì)不同濃度時(shí)間的H2O2摸索,在400nmol/l濃度12小時(shí)處理的內(nèi)皮細(xì)胞氧自由基生成量趨于平穩(wěn),而自噬水平最高。利用此濃度及時(shí)間點(diǎn)復(fù)制體外氧化應(yīng)激細(xì)胞模型。2、抑制miR-155表達(dá)后損傷的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬程度增高,細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS生成減少,細(xì)胞存活率增加。3、miR-155通過(guò)調(diào)控ATG5的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞自噬水平來(lái)影響內(nèi)皮細(xì)胞的功能。結(jié)論:miR-155通過(guò)自噬減少細(xì)胞毒性物質(zhì)ROS的生成,提高氧化應(yīng)激條件下受損內(nèi)皮細(xì)胞的存活率;其中,自噬的調(diào)控作用可能是通過(guò)ATG5通路來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:Background and objective: the incidence of coronary heart disease, hypertension and other chronic vascular diseases is increasing year by year. Endothelial dysfunction is an important pathological basis for the occurrence and development of vascular diseases. The dysfunction of lipid metabolism in blood vessel and anoxia lead to the injury of endothelial cells and the weakening of the barrier between blood and blood vessel, resulting in platelet adhesion, vasospasm, thrombosis and stenosis of blood vessel. Therefore, protecting and maintaining the normal function of vascular endothelial cells, promoting the proliferation of injured endothelial cells and increasing the cell survival rate are the research focus of chronic vascular diseases. MicroRNA (mircoRNA) is a typical multifunctional non-coding RNAs that can degrade or inhibit the expression of target mRNA at the transcriptional level, regulate the biological function of cells, and be related to many pathophysiology, such as cell formation, inflammation and tumor development. Autophagy is a protective procedure in cells that can digest organelles that degrade intracellular damage to maintain the homeostasis of the intracellular environment. MicroRNA has been reported on the pathogenesis and progression of atherosclerosis through autophagy, but the role of miR-155 in the injury of endothelial cells is rarely studied. The purpose of this study was to investigate the effects of miR-155 on the function of injured endothelial cells under oxidative stress and its possible regulatory mechanisms. Methods Cell models of oxidative stress were established by treating human umbilical vein endothelial cell line (HUVECs) with hydrogen peroxide (H _ 2O _ 2) in the Sicence cell bank. The cell model was identified by detecting the amount of oxygen free radicals and the degree of autophagy. The effects of transfection of miR-155 on the production of cytotoxic substances and the survival rate of cell proliferation were monitored. At the same time, RT-PCR and Western blotting were used to detect the degree of autophagy after injury by confocal immunofluorescence, and to explore the role of ATG5 in endothelial cells with miR-155 regulatory dysfunction. Results the oxygen free radical production of endothelial cells treated with 400nmol/l for 12 hours tended to be stable and autophagy was the highest by groping for H2O2 at different concentrations. In vitro oxidative stress cell model was established at this concentration and time point. After inhibiting the expression of miR-155, the degree of intracellular autophagy was increased, and the production of reactive oxygen species (Ros) was decreased. Cell survival increased. 3miR-155 affected endothelial cell function by regulating the expression of ATG5 to regulate the level of endothelial autophagy. Conclusion the fraction miR-155 reduces the production of Ros by autophagy and increases the survival rate of injured endothelial cells under oxidative stress, and the regulation of autophagy may be mediated by ATG5 pathway.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R54

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王旗;一種新的氧化應(yīng)激標(biāo)志物測(cè)定方法及應(yīng)用[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2001年11期

2 喬華,王廣發(fā),丁翠敏;氧化應(yīng)激與睡眠呼吸暫停綜合征[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);2005年08期

3 向光大;;氧化應(yīng)激與糖尿病血管并發(fā)癥及其對(duì)策[J];實(shí)用糖尿病雜志;2007年03期

4 張潔心;殷國(guó)勇;陸甘;;阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征與氧化應(yīng)激研究進(jìn)展[J];江蘇醫(yī)藥;2008年11期

5 凌靜;欒潔;;氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變[J];國(guó)際眼科雜志;2008年11期

6 馮欣;杜宇;潘坤;郭琳;;谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶與氧化應(yīng)激[J];醫(yī)學(xué)研究與教育;2010年05期

7 陳燕;李桂英;;慢性阻塞性肺疾病患者氧化應(yīng)激與肺功能的相關(guān)性[J];臨床肺科雜志;2012年11期

8 楊玲;許速;;氧化應(yīng)激與疾病發(fā)生的相關(guān)性[J];西南國(guó)防醫(yī)藥;2012年11期

9 李洪亮;張秋芳;鄭雪皎;喬靜;汪選斌;;中藥抗肝氧化應(yīng)激的研究進(jìn)展[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2013年12期

10 吳艷;黃志;;阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征與氧化應(yīng)激關(guān)系的探討[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2011年29期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王莉;姚華;馬玲;;尿酸與氧化應(yīng)激關(guān)系的研究進(jìn)展[A];老年?duì)I養(yǎng)研究進(jìn)展與老年?duì)I養(yǎng)供餐規(guī)范研討會(huì)暨糖尿病腎病醫(yī)學(xué)營(yíng)養(yǎng)治療進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2011年

2 黃園;陳志慶;邱卓君;丘衛(wèi);林燕;;運(yùn)動(dòng)對(duì)血液氧化應(yīng)激態(tài)的影響[A];2002年第9屆全國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

3 王博;李英賢;李瑩輝;;航天飛行中氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞骨架的調(diào)控作用[A];中國(guó)空間科學(xué)學(xué)會(huì)第16屆空間生命學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 朱紅軍;江鐘立;;運(yùn)動(dòng)、氧化應(yīng)激與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[A];第六次全國(guó)運(yùn)動(dòng)療法學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2002年

5 曲麗娜;陳海龍;畢蕾;黃增明;李瑩輝;;微重力下的氧化應(yīng)激與藥物防護(hù)[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

6 趙曉琴;王瑞元;;氧化應(yīng)激與糖尿病肌病[A];2011年中國(guó)生理學(xué)會(huì)運(yùn)動(dòng)生理學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)會(huì)議暨“運(yùn)動(dòng)與骨骼肌”學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

7 先宏;叢建波;郭林超;董國(guó)福;王長(zhǎng)振;吳可;孫存普;;海藻鐵蛋白多糖對(duì)氧化應(yīng)激的作用[A];第十六屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

8 張曉啟;劉爽;王振國(guó);;燒傷后氧化應(yīng)激與抗氧化劑治療[A];全國(guó)危重?zé)齻颊咴缙趶?fù)蘇對(duì)策專(zhuān)題研討會(huì)論文匯編[C];2005年

9 蘇穎;劉曉民;孫延明;欒穎;王月影;;辛伐他汀對(duì)2型糖尿病患者氧化應(yīng)激的影響[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會(huì)暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

10 胡高飛;朱圣華;周筠;馬瑩;慶宏;鄧玉林;;模擬微重力效應(yīng)導(dǎo)致大鼠腦氧化應(yīng)激及相關(guān)蛋白表達(dá)變化[A];中國(guó)空間科學(xué)學(xué)會(huì)第七次學(xué)術(shù)年會(huì)會(huì)議手冊(cè)及文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;預(yù)防疾病,進(jìn)入“氧化應(yīng)激”時(shí)代[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

2 靈諾;身體異常與“氧化應(yīng)激”有關(guān)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

3 朱作霖;氧化應(yīng)激干擾有望成為預(yù)防疾病新手段[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

4 記者 項(xiàng)錚;氧化應(yīng)激干擾有望成為預(yù)防疾病新手段[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

5 ;遠(yuǎn)離疾病,科學(xué)家找到新方法[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

6 郭楓;知未來(lái) 治未病[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

7 熊昌彪;氧化應(yīng)激研究與中醫(yī)治未病“不謀而合”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

8 朱作霖;疾病防治新思路——氧化應(yīng)激窗口期干預(yù)假設(shè)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

9 勝德;治“未”病提高人類(lèi)主體健康意識(shí)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

10 褚曉明;老年癡呆與氧化應(yīng)激有關(guān)聯(lián)[N];健康報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李思穎;Nrf2缺失加劇DOX引起的心臟毒性和心功能障礙[D];山東大學(xué);2015年

2 夏淑芳;高脂誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)甲狀腺激素穩(wěn)態(tài)的影響及槲皮素的調(diào)節(jié)作用[D];江南大學(xué);2015年

3 張鵬宇;硫化氫在臭氧誘導(dǎo)的小鼠氧化應(yīng)激模型中的作用機(jī)制[D];上海交通大學(xué);2014年

4 游牧;淮南市土壤砷分布特征及基于胰島素途徑的抗砷脅迫研究[D];安徽理工大學(xué);2015年

5 易旭;茅臺(tái)酒對(duì)二乙基亞硝胺引發(fā)小鼠HCC發(fā)生的影響及分子機(jī)制[D];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院;2014年

6 肖軍;氧化應(yīng)激通過(guò)親環(huán)蛋白A促進(jìn)人巨細(xì)胞病毒復(fù)制的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

7 崔艷軍;熱應(yīng)激和氧化應(yīng)激對(duì)肥育豬骨骼肌代謝的影響及硫辛酸的調(diào)控作用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

8 吳志勇;hOGG1基因多態(tài)性與糖尿病患者冠脈病變關(guān)系及其在mtDNA過(guò)表達(dá)對(duì)高糖誘導(dǎo)的VECs氧化應(yīng)激修復(fù)的研究[D];南昌大學(xué);2016年

9 許明明;肝腸間氧化應(yīng)激的相關(guān)性及食品的調(diào)節(jié)作用[D];浙江工商大學(xué);2016年

10 李俊;人參皂苷Rg1改善氧化應(yīng)激引起的糖皮質(zhì)激素抵抗的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 靳艷艷;白藜蘆醇對(duì)高糖“代謝記憶”介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖及氧化應(yīng)激的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 武小希;氧化應(yīng)激誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的改變及驗(yàn)證[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張文松;Nrf2/HO-1通路在氧化應(yīng)激致終末期腎病血管鈣化中的作用及機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

4 王倩;阿托伐他汀治療急性缺血性腦卒中的臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 李盼盼;活性羰基化合物誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激致細(xì)胞能量代謝障礙和毒性的機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 安美玲;CCK-8對(duì)甲基苯丙胺致神經(jīng)損傷的保護(hù)作用及氧化應(yīng)激機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉金蓮;氧化應(yīng)激在動(dòng)靜脈內(nèi)瘺血栓形成中的作用[D];延邊大學(xué);2015年

8 王琦;白藜蘆醇抑制肥胖相關(guān)的脂肪組織炎癥與氧化應(yīng)激及對(duì)睪丸內(nèi)分泌功能的保護(hù)[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

9 關(guān)瑾;體外研究羧基化多壁碳納米管誘發(fā)的氧化應(yīng)激效應(yīng)與機(jī)理[D];山東大學(xué);2015年

10 張斌;體外實(shí)驗(yàn)研究不同粒徑納米銀的氧化應(yīng)激效應(yīng)[D];山東大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2121697