本文選題：血栓調(diào)節(jié)蛋白 + 苯并芘�。� 參考：《山西醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:環(huán)境因素對心血管系統(tǒng)的影響愈發(fā)加重,煙草、石油等高分子有機物質(zhì)不完全燃燒產(chǎn)生的多環(huán)芳烴類化合物苯并芘具有顯著的致癌作用,近年發(fā)現(xiàn)苯并芘能夠影響內(nèi)皮細胞的生理功能,參與動脈粥樣硬化進展,包括損害及斑塊形成。血栓調(diào)節(jié)蛋白廣泛表達在內(nèi)皮細胞上,參與內(nèi)皮細胞的抗炎、抗凝等作用,苯并芘是否會影響血栓調(diào)節(jié)蛋白的報道少見。Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子2被稱為內(nèi)皮細胞的“分子開關(guān)”,可以通過多種途徑影響內(nèi)皮細胞生理功能,使其處于功能靜止狀態(tài),有研究顯示Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子2可以上調(diào)血栓調(diào)節(jié)蛋白的表達。本研究探討苯并芘對人內(nèi)皮細胞表面血栓調(diào)節(jié)蛋白的影響及Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子2在這一影響中的作用。方法:分離培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞,VIII因子鑒定,第2~4代細胞用于實驗。分組:對照組:0.1%DMSO組,陽性對照組:20ng/ml TNF-a組,實驗組:四種不同濃度0.1mg/L,1mg/L,2mg/L,5mg/L的苯并芘溶液組,共六組。(1)CCK8方法檢測0.1%DMSO及不同濃度苯并芘溶液不同時間(6h,24h)干預細胞后,各組的吸光度A值;(2)以上濃度組不同時間(6h,24h)干預細胞及2mg/L苯并芘溶液不同時間(0h,1h,6h,12h,24h)干預細胞,熒光二抗標記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體已標記的細胞,每組分別計數(shù)10000個細胞,流式細胞儀檢測并比較各組的平均熒光強度;(3)各濃度組不同時間(6h,24h)干預細胞及2mg/L苯并芘溶液(0h,1h,6h,12h,24h)干預細胞后,SYBR Green染料法RT-PCR檢測各組TM mRNA的表達;(4)各濃度組24h干預細胞及2mg/L苯并芘溶液不同時間(0h,1h,6h,12h,24h)干預細胞后,利用SYBR Green染料法進行RT-PCR檢測各組LKLF mRNA的表達;(5)分別用LKLF siRNA,Control siRNA-A轉(zhuǎn)染細胞24小時后,再次用0.1%dmso、2mg/l苯并芘溶液分別孵育細胞24h,比較各組tm的平均熒光強度及tmmrna的表達。結(jié)果:(1)低倍鏡下觀察,細胞的形狀為短梭形、多角形,核仁清晰。viii因子鑒定:95%以上的細胞染色陽性,含有棕色顆粒,為內(nèi)皮細胞。(2)24h組中,2mg/l,5mg/l組與對照組的差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。6h組雖然有隨著濃度升高吸光度a值下降的趨勢,但無統(tǒng)計學差異(p0.05);(3)6h及24h組均可觀察到隨著苯并芘的濃度升高tm平均熒光強度較對照組有下降的趨勢,6h組差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),24h組濃度達到0.1mg/l時的熒光強度即有統(tǒng)計學差異(p0.05),同一濃度2mg/l組中,平均熒光強度有隨著時間延長而下降的趨勢,同0h相比較,1h及24h處平均熒光強度差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(4)與對照組相比,6h及24h組均可觀察到隨著苯并芘的濃度升高tmmrna相對表達量2-△△ct值有下降的趨勢,其中6h組濃度達2mg/l時2-△△ct值便有統(tǒng)計學差異(p0.05),24h組中濃度達到0.1mg/l時即有統(tǒng)計學差異(p0.05),在2mg/l組中,2-△△ct值有隨著時間延長而下降的趨勢,同0h相比較,達到1h處差異便有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(5)不同濃度組可以觀察到隨著苯并芘濃度的升高,klf2mrna的表達量降低,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05);同一濃度2mg/l不同時間組間均有統(tǒng)計學差異(p0.05)。(6)相對于controlsirna-a,各組間tm蛋白及tmmrna表達均有所下降(p0.05)。與lklfsirna組相比較,lklfsirna+2mg/l組的tm蛋白平均熒光強度和tmmrna相對表達量下降明顯減少(p0.05)。結(jié)論:苯并芘一定程度上抑制huvecs的增殖、血栓調(diào)節(jié)蛋白的表達及klf2mrna的生成量,且通過轉(zhuǎn)錄后基因沉默klf2mrna或許可以干預苯并芘對tm的影響。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of environmental factors on cardiovascular system , such as increasing severity of cardiovascular system , incomplete combustion of polycyclic aromatic hydrocarbons ( PAHs ) compounds produced by incomplete combustion of high molecular organic materials such as tobacco and petroleum . The expression of LKLF mRNA was detected by SYBR Green dye method at different time ( 0h , 1h , 6h , 12h , 24h ) . Compared with control group , there was a significant difference between the two groups ( p < 0.05 ) . The concentration of 2 - 鈻，

本文編號：1962711