發(fā)布時間：2018-04-26 07:42

  本文選題：動脈粥樣硬化 + 慢病毒　； 參考：《吉林大學》2016年碩士論文

【摘要】：目的:為了研究PPARγ在動脈粥樣硬化發(fā)病過程中的作用,本文中建立特異性PPARγ高表達細胞模型,用于研究PPARγ與相關配體的相互作用及其在動脈粥樣硬化過程中所參與的細胞信號通路和泡沫細胞形成的機制。首先根據(jù)人類cDNA文庫中PPARγ的基因序列設計引物,采用RT-PCR技術以巨噬細胞總RNA為模板擴增得到PPARγ完整編碼區(qū)序列,將其克隆至慢病毒過表達載體中,通過脂質體共轉染技術將慢病毒包裝載體與過表達載體共轉染至293T細胞中,之后包裝成慢病毒侵染293T細胞,構建得到穩(wěn)轉型過表達細胞株,最后采用western-blot及雙熒光素酶報告基因鑒定PPARγ的表達及活性。通過以上的實驗操作成功重組質粒,并經(jīng)測序證實克隆的PPARγ序列完整,插入方向正確,病毒侵染后293T細胞PPARγ蛋白大量表達,雙熒光素酶報告基因檢測發(fā)現(xiàn)在特異性配體作用下過表達的PPARγ能夠很好地啟動下游啟動子元件,由此證明成功建立了高表達PPARγ的細胞株,并最終獲得了相應的蛋白及生物學功能,為進一步研究PPARγ的相關功能及其激活劑和抑制劑提供有利的細胞模型工具。
[Abstract]:Objective: to study the role of PPAR 緯 in the pathogenesis of atherosclerosis, a specific cell model of high expression of PPAR 緯 was established in this paper. To study the interaction of PPAR 緯 with related ligands, the cellular signaling pathway involved in atherosclerosis and the mechanism of foam cell formation. Firstly, primers were designed according to the gene sequence of PPAR 緯 in human cDNA library. The complete encoding region of PPAR 緯 was amplified by RT-PCR using macrophage total RNA as template, and cloned into lentivirus overexpression vector. The lentivirus packaging vector and over-expression vector were co-transfected into 293T cells by liposome co-transfection, and then they were packaged as lentivirus to infect 293T cells. Finally, western-blot and double luciferase reporter genes were used to identify the expression and activity of PPAR 緯. The recombinant plasmid was successfully constructed and sequenced, and the cloned PPAR 緯 sequence was confirmed to be complete and inserted in the correct direction. The PPAR 緯 protein was expressed in 293T cells after infection. The detection of double luciferase reporter gene showed that overexpression of PPAR 緯 under specific ligand could well activate downstream promoter element, which proved that the cell line with high expression of PPAR 緯 was successfully established. Finally, the corresponding protein and biological functions were obtained, which provided a useful cell model tool for the further study of the related functions of PPAR 緯 and its activators and inhibitors.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5

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