本文選題：動(dòng)脈粥樣硬化 + 慢病毒�。� 參考：《吉林大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:為了研究PPARγ在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病過程中的作用,本文中建立特異性PPARγ高表達(dá)細(xì)胞模型,用于研究PPARγ與相關(guān)配體的相互作用及其在動(dòng)脈粥樣硬化過程中所參與的細(xì)胞信號(hào)通路和泡沫細(xì)胞形成的機(jī)制。首先根據(jù)人類cDNA文庫中PPARγ的基因序列設(shè)計(jì)引物,采用RT-PCR技術(shù)以巨噬細(xì)胞總RNA為模板擴(kuò)增得到PPARγ完整編碼區(qū)序列,將其克隆至慢病毒過表達(dá)載體中,通過脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染技術(shù)將慢病毒包裝載體與過表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中,之后包裝成慢病毒侵染293T細(xì)胞,構(gòu)建得到穩(wěn)轉(zhuǎn)型過表達(dá)細(xì)胞株,最后采用western-blot及雙熒光素酶報(bào)告基因鑒定PPARγ的表達(dá)及活性。通過以上的實(shí)驗(yàn)操作成功重組質(zhì)粒,并經(jīng)測(cè)序證實(shí)克隆的PPARγ序列完整,插入方向正確,病毒侵染后293T細(xì)胞PPARγ蛋白大量表達(dá),雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在特異性配體作用下過表達(dá)的PPARγ能夠很好地啟動(dòng)下游啟動(dòng)子元件,由此證明成功建立了高表達(dá)PPARγ的細(xì)胞株,并最終獲得了相應(yīng)的蛋白及生物學(xué)功能,為進(jìn)一步研究PPARγ的相關(guān)功能及其激活劑和抑制劑提供有利的細(xì)胞模型工具。
[Abstract]:Objective: to study the role of PPAR 緯 in the pathogenesis of atherosclerosis, a specific cell model of high expression of PPAR 緯 was established in this paper. To study the interaction of PPAR 緯 with related ligands, the cellular signaling pathway involved in atherosclerosis and the mechanism of foam cell formation. Firstly, primers were designed according to the gene sequence of PPAR 緯 in human cDNA library. The complete encoding region of PPAR 緯 was amplified by RT-PCR using macrophage total RNA as template, and cloned into lentivirus overexpression vector. The lentivirus packaging vector and over-expression vector were co-transfected into 293T cells by liposome co-transfection, and then they were packaged as lentivirus to infect 293T cells. Finally, western-blot and double luciferase reporter genes were used to identify the expression and activity of PPAR 緯. The recombinant plasmid was successfully constructed and sequenced, and the cloned PPAR 緯 sequence was confirmed to be complete and inserted in the correct direction. The PPAR 緯 protein was expressed in 293T cells after infection. The detection of double luciferase reporter gene showed that overexpression of PPAR 緯 under specific ligand could well activate downstream promoter element, which proved that the cell line with high expression of PPAR 緯 was successfully established. Finally, the corresponding protein and biological functions were obtained, which provided a useful cell model tool for the further study of the related functions of PPAR 緯 and its activators and inhibitors.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R543.5

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本文編號(hào)：1805097