本文選題：血友病A　切入點(diǎn)：連鎖分析　出處：《貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:由于常用于血友病A(Hemophilia A,HA)間接基因診斷的多態(tài)位點(diǎn)對(duì)HA家系的診斷率有限,本研究通過(guò)對(duì)FⅧ基因內(nèi)5個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)位點(diǎn)的雜合度進(jìn)行分析,以尋找新的可用于HA家系基因診斷的多態(tài)位點(diǎn)。方法:收集16個(gè)無(wú)血緣關(guān)系的HA家系成員及3例家系不全的HA患者血樣用于家系連鎖分析及基因診斷;50例漢族正常女性血樣用于5個(gè)SNP位點(diǎn)的多態(tài)性分析。采用血漿凝固法(一期法)進(jìn)行凝血因子Ⅷ活性(FVIII:C)檢測(cè)。對(duì)重型患者采用長(zhǎng)距離PCR(LD-PCR)檢測(cè)FⅧ基因內(nèi)含子22倒位;雙管多重PCR擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)內(nèi)含子1倒位。通過(guò)連鎖分析的方法將常用的Bcl I、HindⅢ和Stl4(DXS52)3個(gè)多態(tài)位點(diǎn)用于HA家系的間接基因診斷,其中Bcl I及HindⅢ位點(diǎn)采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerase Chain Reaction-Restrict Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)方法進(jìn)行分析,Stl4(DXS52)位點(diǎn)采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)進(jìn)行產(chǎn)物分析。選取FⅧ基因內(nèi)在亞洲人群中雜合度較高且多態(tài)位點(diǎn)只具有二等位基因的5個(gè)SNP位點(diǎn)(rs1509787、rs1800291、rs3861554、rs1470586、rs6649625),運(yùn)用RFLP方法對(duì)50例漢族正常女性的這5個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),把雜合度較高的SNP位點(diǎn)用于HA家系的間接基因診斷。結(jié)果:(1)根據(jù)FVIII:C活性檢測(cè)結(jié)果,19例先證者中有4例為重型(FVIII:C活性1%),10例為中型(FVIII:C活性:1%-5%),5例為輕型(FVIII:C活性:5%-25%)。(2)4例重型HA患者中有1例為內(nèi)含子22倒位,檢出率為25%(1/4),未檢出內(nèi)含子1倒位。(3)聯(lián)合應(yīng)用Bcl I、Stl4(DXS52)2個(gè)位點(diǎn)作連鎖分析,可對(duì)16個(gè)家系中6個(gè)家系進(jìn)行間接基因診斷,家系的診斷率為37.5%(6/16),其中有2個(gè)家系可以用Bcl I位點(diǎn)提供診斷信息,4個(gè)家系可以用Stl4(DXS52)位點(diǎn)提供診斷信息。(4)5個(gè)FVIII基因內(nèi)SNP位點(diǎn)在所研究的人群中有3個(gè)位點(diǎn)具有多態(tài)性,即rs1509787、rs3861554和rs1470586,雜合子頻率分別為0.120、0.460和0.400,多態(tài)信息量分別為0.1064、0.3444、0.3108。(5)利用這3個(gè)位點(diǎn)對(duì)16個(gè)家系進(jìn)行間接基因診斷,有7個(gè)家系可作出診斷,家系的診斷率為43.75%(7/16),其中有5個(gè)家系可以用rs3861554位點(diǎn)提供診斷信息,2個(gè)家系可以用rs1509787位點(diǎn)提供診斷信息,1個(gè)家系可以用rs1470586位點(diǎn)提供診斷信息。(6)聯(lián)合運(yùn)用這5種多態(tài)位點(diǎn)可對(duì)9個(gè)家系進(jìn)行診斷,家系的診斷率為56.25%(9/16)。結(jié)論:(1)內(nèi)含子22倒位和內(nèi)含子1倒位檢測(cè)對(duì)所選家系中重型HA進(jìn)行直接基因診斷的診斷率有限。(2)FⅧ基因內(nèi)的3個(gè)SNP位點(diǎn)rs1509787、rs3861554、rs1470586在所選人群中具有較高的雜合率,可用于HA家系的基因診斷。(3)聯(lián)合應(yīng)用這3個(gè)SNP位點(diǎn)及常用的Bcl I和Stl4(DXS52)兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行家系連鎖分析可提高HA家系的診斷率。
[Abstract]:Objective: due to the limited diagnostic rate of polymorphic loci for indirect gene diagnosis of hemophilia hemophilia, we analyzed the heterozygosity of 5 single nucleotide polymorphisms (SNPs) in F 鈪，

本文編號(hào)：1644329