本文選題：心肌成纖維細胞　切入點：β3腎上腺素能受體　出處：《石河子大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:使用Ang II誘導(dǎo)心肌成纖維細胞纖維化,應(yīng)用攜帶β3-AR基因片段的慢病毒感染、β3-AR激動劑及拮抗劑的方法對心肌成纖維細胞進行干預(yù),觀察β3-AR對心肌成纖維細胞纖維化的影響,探討β3-AR與TGF-β/Smad信號通路對心肌成纖維細胞纖維化的作用,證明β3-AR激活后可能通過TGF-β/Smad信號通路介導(dǎo)心肌成纖維細胞纖維化,促進心肌重構(gòu)。方法:使用差速貼壁法分離培養(yǎng)心肌成纖維細胞,分別用攜帶β3-AR基因片段的慢病毒感染、β3-AR激動劑及拮抗劑干預(yù)心肌成纖維細胞,流式儀檢測心肌成纖維細胞的最佳慢病毒感染率,篩選出慢病毒對心肌成纖維細胞的最適感染復(fù)數(shù)。用膜蛋白試劑盒提取心肌成纖維細胞β3-AR膜蛋白,普通試劑盒提取總蛋白,BCA法進行蛋白定量,Western blot法檢測各樣品中β3-AR蛋白的特異性,分別觀察慢病毒感染和β3-AR激動劑拮抗劑誘導(dǎo)的心肌成纖維細胞中β3-AR及纖維化相關(guān)因子的表達水平及其相關(guān)性。Western blot和q RT-PCR檢測各組TGF-β/Smad信號通路及纖維化相關(guān)因子COL-I、COL-III蛋白表達和m RNA的水平。WST-1法檢測各組心肌成纖維細胞增殖情況。實驗分組1:正常對照組;慢病毒感染組:攜帶β3-AR的慢病毒感染心肌成纖維細胞1h后再加入Ang II培養(yǎng)72h;空病毒對照組:空的慢病毒感染心肌成纖維細胞1h后再加入Ang II培養(yǎng)72h;Ang II組:加入Ang II培養(yǎng)72h。實驗分組2:正常對照組;BRL組:先加入BRL,1h后加入Ang II培養(yǎng)72h;SR組:先加入SR,1h后加入Ang II培養(yǎng)72h;Ang II組:加入Ang II培養(yǎng)72h。結(jié)果:1.慢病毒成功感染心肌成纖維細胞,最適MOI為100,感染72h時效果最佳,感染率達到72.9㳠;2.Western blot檢測結(jié)果示:慢病毒感染及激動劑干預(yù)都能使心肌成纖維細胞β3-AR高表達,較正常對照組及Ang II組均升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),慢病毒感染組β3-AR表達高于激動劑干預(yù)組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),拮抗劑干預(yù)組β3-AR表達較Ang II組降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);3.Western blot檢測結(jié)果示:慢病毒感染組心肌成纖維細胞中TGF-β/Smad信號通路及纖維化相關(guān)因子COL-I、COL-III蛋白表達水平較空病毒感染組、Ang II組及正常對照組相比均升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),空病毒感染組與Ang II組表達水平無明顯差別(P0.05),但均高于正常對照組(P0.05),β3-AR激動劑干預(yù)組表達高于β3-AR拮抗劑干預(yù)組、Ang II組和正常對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),β3-AR拮抗劑干預(yù)組表達較Ang II組降低,但仍高于正常對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);4.q RT-PCR檢測慢病毒感染組心肌成纖維細胞中TGF-β1、COL-I、COL-III m RNA水平與空病毒感染組、Ang II組及正常對照組相比均升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),空病毒感染組與Ang II組無明顯差別(P0.05),但均高于正常對照組(P0.05),β3-AR激動劑干預(yù)組TGF-β1、COL-I、COL-III m RNA水平高于β3-AR拮抗劑干預(yù)組、Ang II組和正常對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),β3-AR拮抗劑干預(yù)組水平較Ang II組降低,但仍高于正常對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);5.WST-1測心肌成纖維細胞增殖情況:慢病毒感染組心肌成纖維細胞增殖水平與空病毒感染組、Ang II組及正常對照組相比均增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),空病毒感染組與Ang II組無明顯差別(P0.05),但均高于正常對照組(P0.05),β3-AR激動劑干預(yù)組較拮抗劑干預(yù)組、Ang II組及正常對照組相比增殖水平均增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),β3-AR拮抗劑干預(yù)組增殖水平較Ang II組降低,但仍高于正常對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.慢病毒感染和β3-AR激動劑干預(yù)心肌成纖維細胞均能使β3-AR過表達;2.β3-AR過表達可促進心肌成纖維細胞增殖和纖維化;3.β3-AR過表達可能通過TGF-β/Smad信號通路介導(dǎo)心肌成纖維細胞纖維化,促進心肌重構(gòu),參與心力衰竭的進展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R542.2
，

本文編號：1586396