本文關鍵詞：血管性血友病的臨床分析及分子發(fā)病機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學》 2014年

血管性血友病的臨床分析及分子發(fā)病機制研究

歐陽皖雁  

【摘要】：第一部分162例血管性血友病的臨床分析 研究目的血管性血友病(von Willebrand disease．VWD)是由于血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)基因突變引起血漿中VWF數(shù)量減少或質量異常所導致的最常見的遺傳性出血性疾病，呈常染色體遺傳�；颊咦杂卓捎休p度或中度皮膚黏膜出血、鼻衄、胃腸道出血及外傷后出血不止等癥狀，女性常有月經過多。遺傳性VWD分為三種類型：1型(VWF量的部分缺乏)、2型(VWF質的缺陷，又分為2A、2B、2M和2N四個亞型)和3型(VWF量的完全缺乏)，這三種類型和各亞型間具有不同的生理病理機制，治療方法上也有各自特點。因此需要實驗室進行系列檢測以確保準確診斷和分型。本部分的回顧性研究代表了單中心血管性血友�。╒WD）患者的流行病學特點、臨床特征、診治現(xiàn)狀。方法回顧性分析162例VWD患者的臨床資料、分型診斷結果及治療、轉歸情況。結果162例患者中男性76例、女性86例，男性平均年齡7.2（2.0~41.0）歲，女性平均年齡20.7（5.0~48.0）歲。1型VWD患者86例（53.1%），2型42例（25.9%，2A型33例、2M型4例、2N型5例），3型34例（21.0%）。87例患者（53.7%）有明確家族史。出血表現(xiàn)以皮膚瘀斑（61.7%）、鼻出血（53.7%）、手術或外傷后出血不止（53.1%）為主，月經量多為女性患者常見主訴（66.3%）。Vicenza出血評分標準結果顯示56例患者（34.6%）有異常出血評分。45例患者（27.8%）予血制品替代治療，8例患者使用了1-去氨基-8-右旋-精氨酸血管加壓素治療。57例月經量多的女性患者中，25例并發(fā)貧血者予補鐵治療。對于出血量多不易控制的患者，8例需聯(lián)合孕激素控制出血，2例行子宮切除術。結論VWD是臨床表現(xiàn)有較大異質性的常見的遺傳性出血性疾病，對于疑診VWD的患者應分步進行確診及分型檢查，從而有效地實施個體化治療。 第二部分6例血管性血友病的實驗診斷和基因分析 研究目的血管性血友病因子(von Willebrand Factor，VWF)是血管內皮細胞和骨髓巨核細胞合成的一種糖蛋白。VWF質的缺陷和量的缺乏會導致血管性血友病(vonWillebrand disease，VWD)�；蚍治鲇兄诹私夥肿影l(fā)病機制，對攜帶者的判定、產前診斷以及患者的預后、治療都有重要的意義。本研究從6例VWD患者的臨床及基因診斷出發(fā)，探討基因型與表現(xiàn)型的相關性，旨在從分子水平闡明VWD的發(fā)病機制。方法采用第一部分所述VWD系列實驗，以全血細胞計數(shù)（主要為血小板計數(shù)）、部分激活的凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）和纖維蛋白原含量（Fg）作為VWD的篩查實驗；VWF抗原（VWF∶Ag）測定、VWF瑞斯托霉素輔因子活性（VWF∶Rco）、血漿凝血因子VIII活性（FVIII∶C）作為確診實驗；以VWF多聚體分析、瑞斯托霉素誘導的血小板聚集試驗（RIPA）、VWF膠原結合試驗（VWF∶CB）、VWF和凝血因子VIII結合試驗（VWF∶FVIIIB）作為分型實驗，確診6例遺傳性VWD（分別為3例2A型，3例3型）。為了增加對2A型和3型VWD分子發(fā)病機制的認識，我們用常規(guī)PCR分別擴增這6例VWD患者的VWF基因，并進行測序分析。結果6例患者中3例為2A型，3例為3型。測序結果鑒定到7個基因突變，包括4814AC(Y1605S)、752AG(E248G)、4789CT(R1597W)、421GA(D141N)、3379+1GA、2480GA(C827Y)、3897delT，其中4814AC(Y1605S)、752AG(E248G)、2480GA(C827Y)、3897delT為國際首次報道。Y1605S的雜合性突變恰位于A2區(qū)ADAMTS13蛋白酶裂解位點(Y1605-M1606)，使原來隱藏的位點得以暴露，VWF因子對ADAMTS13水解酶敏感性增加，導致2A型VWD的發(fā)生。E248G的雜合性突變位于D1區(qū)，屬于不成熟VWF蛋白的前肽部分，影響VWF多聚化，導致胞內貯留，是2A型VWD的發(fā)生原因。R1597W為2A型VWD較常見的突變類型，已被證實可導致VWF上ADAMTS13蛋白酶裂解位點(Y1605-M1606)附近的空間構象發(fā)生改變，，使突變蛋白對ADAMTS13敏感性增高。3379+1GA的純合突變影響正常RNA的剪切過程，產生含有提前終止密碼子的異常剪接體，使得血漿中VWF水平顯著減低。C827Y位于D’區(qū)，D’區(qū)Cys參與VWF鏈內二硫鍵形成，與分子內結構穩(wěn)定有關，影響多聚體的形成和促進突變蛋白的清除，其合并3897delT的框移突變導致VWF合成顯著減少，推測是3型VWD的發(fā)病機制。而3型VWD患者4中，僅發(fā)現(xiàn)D141N的雜合性突變，是否存在其他類型的突變及其發(fā)病機制仍需進一步鑒定和研究。結論VWD具有復雜的分子發(fā)病機制，這不僅要求有一套系統(tǒng)的實驗方法以對VWD進行明確診斷和分型，還需要運用多種分子生物學技術對其進行深入的研究。本組試驗所涉及的6例VWD患者經分型診斷試驗確診為3例2A型和3例3型，基因測序結果增加了對2A型和3型VWD發(fā)病機制的認識。然而遺憾的是，這6例VWD患者的突變類型沒有直接得到功能實驗證實。這需要采用定點突變技術構建攜帶特定突變位點的突變型VWF質粒，并在細胞中表達突變型質粒，以明確基因突變對VWF表達量及功能的影響。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R554.1
【目錄】：

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本文編號：158442