本文關(guān)鍵詞：血管性血友病的臨床分析及分子發(fā)病機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2014年

血管性血友病的臨床分析及分子發(fā)病機(jī)制研究

歐陽皖雁  

【摘要】：第一部分162例血管性血友病的臨床分析 研究目的血管性血友病(von Willebrand disease．VWD)是由于血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)基因突變引起血漿中VWF數(shù)量減少或質(zhì)量異常所導(dǎo)致的最常見的遺傳性出血性疾病，呈常染色體遺傳。患者自幼可有輕度或中度皮膚黏膜出血、鼻衄、胃腸道出血及外傷后出血不止等癥狀，女性常有月經(jīng)過多。遺傳性VWD分為三種類型：1型(VWF量的部分缺乏)、2型(VWF質(zhì)的缺陷，又分為2A、2B、2M和2N四個亞型)和3型(VWF量的完全缺乏)，這三種類型和各亞型間具有不同的生理病理機(jī)制，治療方法上也有各自特點(diǎn)。因此需要實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行系列檢測以確保準(zhǔn)確診斷和分型。本部分的回顧性研究代表了單中心血管性血友病（VWD）患者的流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床特征、診治現(xiàn)狀。方法回顧性分析162例VWD患者的臨床資料、分型診斷結(jié)果及治療、轉(zhuǎn)歸情況。結(jié)果162例患者中男性76例、女性86例，男性平均年齡7.2（2.0~41.0）歲，女性平均年齡20.7（5.0~48.0）歲。1型VWD患者86例（53.1%），2型42例（25.9%，2A型33例、2M型4例、2N型5例），3型34例（21.0%）。87例患者（53.7%）有明確家族史。出血表現(xiàn)以皮膚瘀斑（61.7%）、鼻出血（53.7%）、手術(shù)或外傷后出血不止（53.1%）為主，月經(jīng)量多為女性患者常見主訴（66.3%）。Vicenza出血評分標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果顯示56例患者（34.6%）有異常出血評分。45例患者（27.8%）予血制品替代治療，8例患者使用了1-去氨基-8-右旋-精氨酸血管加壓素治療。57例月經(jīng)量多的女性患者中，25例并發(fā)貧血者予補(bǔ)鐵治療。對于出血量多不易控制的患者，8例需聯(lián)合孕激素控制出血，2例行子宮切除術(shù)。結(jié)論VWD是臨床表現(xiàn)有較大異質(zhì)性的常見的遺傳性出血性疾病，對于疑診VWD的患者應(yīng)分步進(jìn)行確診及分型檢查，從而有效地實(shí)施個體化治療。 第二部分6例血管性血友病的實(shí)驗(yàn)診斷和基因分析 研究目的血管性血友病因子(von Willebrand Factor，VWF)是血管內(nèi)皮細(xì)胞和骨髓巨核細(xì)胞合成的一種糖蛋白。VWF質(zhì)的缺陷和量的缺乏會導(dǎo)致血管性血友病(vonWillebrand disease，VWD)�；蚍治鲇兄诹私夥肿影l(fā)病機(jī)制，對攜帶者的判定、產(chǎn)前診斷以及患者的預(yù)后、治療都有重要的意義。本研究從6例VWD患者的臨床及基因診斷出發(fā)，探討基因型與表現(xiàn)型的相關(guān)性，旨在從分子水平闡明VWD的發(fā)病機(jī)制。方法采用第一部分所述VWD系列實(shí)驗(yàn)，以全血細(xì)胞計數(shù)（主要為血小板計數(shù)）、部分激活的凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）和纖維蛋白原含量（Fg）作為VWD的篩查實(shí)驗(yàn)；VWF抗原（VWF∶Ag）測定、VWF瑞斯托霉素輔因子活性（VWF∶Rco）、血漿凝血因子VIII活性（FVIII∶C）作為確診實(shí)驗(yàn)；以VWF多聚體分析、瑞斯托霉素誘導(dǎo)的血小板聚集試驗(yàn)（RIPA）、VWF膠原結(jié)合試驗(yàn)（VWF∶CB）、VWF和凝血因子VIII結(jié)合試驗(yàn)（VWF∶FVIIIB）作為分型實(shí)驗(yàn)，確診6例遺傳性VWD（分別為3例2A型，3例3型）。為了增加對2A型和3型VWD分子發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，我們用常規(guī)PCR分別擴(kuò)增這6例VWD患者的VWF基因，并進(jìn)行測序分析。結(jié)果6例患者中3例為2A型，3例為3型。測序結(jié)果鑒定到7個基因突變，包括4814AC(Y1605S)、752AG(E248G)、4789CT(R1597W)、421GA(D141N)、3379+1GA、2480GA(C827Y)、3897delT，其中4814AC(Y1605S)、752AG(E248G)、2480GA(C827Y)、3897delT為國際首次報道。Y1605S的雜合性突變恰位于A2區(qū)ADAMTS13蛋白酶裂解位點(diǎn)(Y1605-M1606)，使原來隱藏的位點(diǎn)得以暴露，VWF因子對ADAMTS13水解酶敏感性增加，導(dǎo)致2A型VWD的發(fā)生。E248G的雜合性突變位于D1區(qū)，屬于不成熟VWF蛋白的前肽部分，影響VWF多聚化，導(dǎo)致胞內(nèi)貯留，是2A型VWD的發(fā)生原因。R1597W為2A型VWD較常見的突變類型，已被證實(shí)可導(dǎo)致VWF上ADAMTS13蛋白酶裂解位點(diǎn)(Y1605-M1606)附近的空間構(gòu)象發(fā)生改變，，使突變蛋白對ADAMTS13敏感性增高。3379+1GA的純合突變影響正常RNA的剪切過程，產(chǎn)生含有提前終止密碼子的異常剪接體，使得血漿中VWF水平顯著減低。C827Y位于D’區(qū)，D’區(qū)Cys參與VWF鏈內(nèi)二硫鍵形成，與分子內(nèi)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定有關(guān)，影響多聚體的形成和促進(jìn)突變蛋白的清除，其合并3897delT的框移突變導(dǎo)致VWF合成顯著減少，推測是3型VWD的發(fā)病機(jī)制。而3型VWD患者4中，僅發(fā)現(xiàn)D141N的雜合性突變，是否存在其他類型的突變及其發(fā)病機(jī)制仍需進(jìn)一步鑒定和研究。結(jié)論VWD具有復(fù)雜的分子發(fā)病機(jī)制，這不僅要求有一套系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法以對VWD進(jìn)行明確診斷和分型，還需要運(yùn)用多種分子生物學(xué)技術(shù)對其進(jìn)行深入的研究。本組試驗(yàn)所涉及的6例VWD患者經(jīng)分型診斷試驗(yàn)確診為3例2A型和3例3型，基因測序結(jié)果增加了對2A型和3型VWD發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識。然而遺憾的是，這6例VWD患者的突變類型沒有直接得到功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)。這需要采用定點(diǎn)突變技術(shù)構(gòu)建攜帶特定突變位點(diǎn)的突變型VWF質(zhì)粒，并在細(xì)胞中表達(dá)突變型質(zhì)粒，以明確基因突變對VWF表達(dá)量及功能的影響。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R554.1
【目錄】：

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本文編號：158442