本文選題：單核細(xì)胞　切入點(diǎn)：動(dòng)脈粥樣硬化　出處：《甘肅中醫(yī)藥大學(xué)(原名：甘肅中醫(yī)學(xué)院)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的和意義:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,As)是心腦血管疾病的基礎(chǔ)病變,由粥樣斑塊導(dǎo)致血管重塑所引起相應(yīng)部位的缺血和出血事件,是全世界致殘、致死的重要病因。慢性炎癥和脂質(zhì)浸潤學(xué)說是廣大學(xué)者公認(rèn)的AS的發(fā)病機(jī)制,單核/巨噬細(xì)胞系作為機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的重要防線,參與了機(jī)體慢性炎癥和斑塊內(nèi)脂質(zhì)代謝的過程,其動(dòng)態(tài)變化在AS發(fā)生發(fā)展過程中起至關(guān)重要的作用。土槿乙酸(pseudolaric acid-B,PB)是一種藥理作用很豐富的中藥提取物,目前已發(fā)現(xiàn)有抗腫瘤、抗生育、抗血管生成和抗真菌的作用。本人所在研究團(tuán)隊(duì)的前期工作顯示PB可以激活單核細(xì)胞表面過氧化物酶增殖物激活受體(peroxisome proliferator activated receptor,PPAR),且有研究表明PPAR能夠參與炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)代謝的過程。因此,我們提出以下假說,PB通過調(diào)節(jié)單核/巨噬細(xì)胞系的變化參與慢性炎癥和斑塊內(nèi)脂質(zhì)代謝,調(diào)節(jié)AS的發(fā)生發(fā)展過程。研究方法,第一部分:以8周齡雄性Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠作為研究對象,高脂飲食喂養(yǎng)8周形成AS后,隨機(jī)分為基線組(n=7)、高脂飲食組(n=7)、PB+高脂飲食組(n=7)、正常飲食組(n=7)和PB+正常飲食組(n=7)�；�組直接取材,其它各組干預(yù)4周后取材。進(jìn)行如下檢測:(1)流式細(xì)胞術(shù)檢測各組外周血單核細(xì)胞亞群(Ly6Chi:Ly6G-CD11b+Ly6Chi,Ly6Clo:Ly6G-CD11b+Ly6Clo)比例的變化;(2)免疫熒光染色檢測主動(dòng)脈根部增殖巨噬細(xì)胞;(3)油紅O染色檢測主動(dòng)脈、頸總動(dòng)脈和主動(dòng)脈根部AS斑塊負(fù)荷的面積;(4)酶聯(lián)免疫分析(Enzyme linked immune sorbent assay,ELISA)法檢測血漿中甘油三酯和總膽固醇的水平。第二部分:以RAW264.7(小鼠巨噬細(xì)胞系)為研究對象,含有熒光素標(biāo)記的氧化型低密度脂蛋白(fluorescence Dil-labeled oxidized low density lipoprotein,Dil-ox-LDL)的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞,分為模型組、PB組和PB+GW966.2(PPARγ阻斷劑)組,每組3個(gè)樣本,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)Dil-ox-LDL的熒光強(qiáng)度。含有氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞24小時(shí)后形成泡沫細(xì)胞,分為模型組、PB組和PB+GW966.2(PPARγ阻斷劑)組,每組3個(gè)樣本,進(jìn)行如下檢測:(1)油紅O染色檢測泡沫細(xì)胞形成;(2)Real-time PCR檢測PB對PPARγ、肝X受體(liver X receptors,LXR)、ATP-結(jié)合盒(ATP-binding cassette transporter 1,ABC1)和CD36基因表達(dá)量的影響。研究成果:動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)(1)PB+高脂飲食組有降低Ly6Chi單核細(xì)胞亞群的趨勢,正常飲食組和PB+正常飲食組降低Ly6Chi單核細(xì)胞亞群的比例;(2)PB+高脂飲食組有降低斑塊內(nèi)增殖巨噬細(xì)胞的密度的趨勢,正常飲食組和PB+正常飲食組降低斑塊內(nèi)增殖巨噬細(xì)胞的密度;(3)PB+高脂飲食組有降低血漿總膽固醇和甘油三酯水平的趨勢,正常飲食組和PB+正常飲食組降低血漿總膽固醇、甘油三酯的水平;(4)PB+高脂飲食組和正常飲食組均有降低主動(dòng)脈根部、頸總動(dòng)脈和主動(dòng)脈的斑塊負(fù)荷的趨勢,PB+正常飲食組降低主動(dòng)脈根部、頸總動(dòng)脈和主動(dòng)脈的斑塊負(fù)荷。細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)(1)PB降低巨噬細(xì)胞內(nèi)Dil-ox-LDL的熒光強(qiáng)度;(2)PB能降低泡沫細(xì)胞內(nèi)PPARγ、LXRα和ABC1的表達(dá)量。結(jié)論及意義:1.高脂飲食可以升高Apo E-/-小鼠體內(nèi)甘油三酯和總膽固醇水平,使Ly6Chi單核細(xì)胞亞型的比例、斑塊內(nèi)增殖巨噬細(xì)胞的密度升高,促進(jìn)AS的形成。PB+高脂飲食組有降低脂質(zhì)、Ly6Chi比例、增殖巨噬細(xì)胞密度和斑塊負(fù)荷的趨勢。正常飲食組降低脂質(zhì)、Ly6Chi比例和增殖巨噬細(xì)胞密度,有降低斑塊負(fù)荷的趨勢。PB+正常飲食組不但能延緩AS病變的惡化,而且能逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣斑塊的進(jìn)程,減低斑塊負(fù)荷量。2.PB增強(qiáng)PPARγ的表達(dá)量,通過PPARγ-LXRα-ABC1通路調(diào)節(jié)脂質(zhì)吞噬和排出的平衡,降低巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)聚集的量,抑制泡沫細(xì)胞形成,在早期干預(yù)AS發(fā)生發(fā)展過程。3.本研究首次證實(shí)了PB聯(lián)合飲食干預(yù)有防治動(dòng)脈粥樣硬化的作用,進(jìn)一步發(fā)掘了傳統(tǒng)中藥土槿皮的藥用價(jià)值。
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【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)(原名：甘肅中醫(yī)學(xué)院)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 葛新;劉麗英;王輝;陳虹;董小青;;土槿乙酸體外抗(抑)菌作用的研究[J];中國消毒學(xué)雜志;2011年05期

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本文編號：1556993