本文關(guān)鍵詞： 下肢缺血性疾病 干細(xì)胞移植 水凝膠 滯留率 存活率　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：下肢缺血性疾病是老年人的常見(jiàn)疾病,也是世界上致殘率最高的疾病之一。目前的治療方法主要包括傳統(tǒng)的藥物治療和動(dòng)脈旁路術(shù),療效仍不理想。近幾年,干細(xì)胞移植作為一個(gè)新興的治療手段開(kāi)始應(yīng)用于下肢缺血性疾病的治療。它使用可分化,可自我更新的干細(xì)胞來(lái)代替死亡的肌肉細(xì)胞。干細(xì)胞治療的療效直接取決于注射后滯留在肌肉中的細(xì)胞的數(shù)量和存活率。但國(guó)內(nèi)外研究表明移植干細(xì)胞在肌肉中的滯留率和存活率極低,造成干細(xì)胞治療依然集中在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)階段,難以在臨床上應(yīng)用。所以提高移植干細(xì)胞滯留率和生存率是目前干細(xì)胞移植治療領(lǐng)域亟需解決的科學(xué)問(wèn)題。移植干細(xì)胞的載體是影響干細(xì)胞滯留率的一個(gè)主要因素,目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)理想的應(yīng)用于干細(xì)胞移植的專(zhuān)用載體,因此亟需創(chuàng)建一種新型高效的細(xì)胞載體。移植干細(xì)胞的生存率低是影響干細(xì)胞移植臨床應(yīng)用的又一個(gè)主要因素。缺血肢體處于一個(gè)低氧、低營(yíng)養(yǎng)的狀態(tài),移植細(xì)胞極易死亡,故而造成移植細(xì)胞的大量喪失,因此要真正實(shí)現(xiàn)下肢缺血性疾病干細(xì)胞治療的臨床應(yīng)用,就需要?jiǎng)?chuàng)造出可大幅提高干細(xì)胞存活率的微環(huán)境,但目前國(guó)內(nèi)外仍無(wú)有效解決該問(wèn)題的文獻(xiàn)報(bào)道。目的：擬制備出溫敏、pH敏感且機(jī)械性能適宜的水凝膠作為干細(xì)胞移植的載體,提高移植干細(xì)胞的滯留率,將氧氣釋放微球引入該載體,以期達(dá)到提高移植干細(xì)胞及周?chē)募∪饧?xì)胞在缺血、缺氧環(huán)境下的存活率,從而促進(jìn)肌細(xì)胞再生,且盡量多的保留原有的肌細(xì)胞,并觀察這種新型的干細(xì)胞移植體系的治療效果；利用本課題組制備的新型水凝膠作為干細(xì)胞移植的載體,提高移植干細(xì)胞的滯留率,將bFGF引入該載體,以期促進(jìn)一部分移植干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化,進(jìn)而促進(jìn)缺血肢體盡早到達(dá)血運(yùn)重建,改善肢體缺血狀態(tài),提高肌肉功能,并觀察該體系對(duì)小鼠下肢缺血的治療效果。探討新的移植體系可干預(yù)的影響移植干細(xì)胞功能的其他靶點(diǎn),為進(jìn)一步改善干細(xì)胞移植體系提供思路。方法：制備出水凝膠,建立新型細(xì)胞移植體系,并利用dsDNA濃度測(cè)定、活細(xì)胞熒光成像、免疫熒光染色、實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)等方法體外驗(yàn)證該體系對(duì)干細(xì)胞生存及分化的影響；建立小鼠下肢缺血模型,利用活細(xì)胞熒光成像、免疫熒光染色、實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、蛋白印跡法、蘇木精-伊紅染色、梅森三色染色、多普勒血流檢測(cè)、跑步測(cè)試等方法體內(nèi)驗(yàn)證該體系對(duì)干細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的存活分化的影響,以及該體系對(duì)小鼠缺血下肢血運(yùn)重建及恢復(fù)肌肉功能的效果。用成管實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、蛋白印跡法探討肢體缺血狀態(tài)影響干細(xì)胞功能的機(jī)制。結(jié)果：引入氧氣釋放微球的干細(xì)胞移植體系,體外檢測(cè),dsDNA濃度測(cè)定隨時(shí)間增加而增高,且明顯高于陰性對(duì)照組(P0.05),與活細(xì)胞熒光成像結(jié)果一致,證實(shí)新的移植體系能大大提高干細(xì)胞的生存率；免疫熒光染色、實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)也證實(shí)ORM組干細(xì)胞向肌肉細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞方向分化更多；在小鼠下肢缺血模型中,活細(xì)胞熒光成像也證實(shí)此移植體系能大大提高干細(xì)胞的生存率；免疫熒光染色證實(shí)ORM組干細(xì)胞向肌肉細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞方向分化更多；蘇木精-伊紅染色、梅森三色染色、多普勒血流檢測(cè)、跑步測(cè)試等方法證實(shí)此體系有效的改善了缺血肢體肌肉萎縮情況,有助于肌肉功能的恢復(fù)。引入bFGF的干細(xì)胞移植體系,體外檢測(cè),dsDNA濃度測(cè)定隨時(shí)間增加而增高,且明顯高于陰性對(duì)照組(P0.05),與活細(xì)胞熒光成像結(jié)果一致,證實(shí)此移植體系也能提高干細(xì)胞的生存率；免疫熒光染色、實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)也證實(shí)bFGF組干細(xì)胞向肌肉細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞方向分化更多；在小鼠下肢缺血模型中,活細(xì)胞熒光成像也證實(shí)此移植體系能大大提高干細(xì)胞的生存率；免疫熒光染色、蛋白印跡法證實(shí)bFGF組干細(xì)胞向肌肉細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞方向分化更多；蘇木精-伊紅染色、梅森三色染色、多普勒血流檢測(cè)也證實(shí)此體系有效的促進(jìn)缺血肢體盡快血運(yùn)重建,極大改善肌肉萎縮情況。成管實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)證實(shí)PA對(duì)EPCs功能有明顯抑制作用；蛋白印跡法證實(shí)PA誘導(dǎo)的神經(jīng)酰胺對(duì)EPCs的抑制作用是通過(guò)Akt/eNOS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)的。結(jié)論：新建立的干細(xì)胞移植體系能大大提高干細(xì)胞的滯留率和生存率,并能有效的分化成所需細(xì)胞系,改進(jìn)干細(xì)胞治療下肢缺血性疾病的效果。進(jìn)一步的機(jī)制探討為改進(jìn)此新型干細(xì)胞移植體系提供了靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王烈;黎成金;;急性下肢缺血性疾病治療方法的選擇[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2010年10期

2 趙念博;急性下肢缺血性疾病的介入治療[J];菏澤醫(yī)專(zhuān)學(xué)報(bào);2001年01期

3 向志,時(shí)德,戴遠(yuǎn)斌;下肢缺血性疾病導(dǎo)致的截肢[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年02期

4 姚燕丹,林少芒,胡以則;自體外周血干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊;2004年06期

5 楊智;沈煥;趙丹丹;段志泉;;因下肢缺血性疾病截肢176例分析[J];中國(guó)實(shí)用外科雜志;2007年04期

6 馬英梅;袁淑蘭;馮麗君;;中西醫(yī)結(jié)合治療下肢缺血性疾病體會(huì)[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2007年06期

7 趙萍;付璐;;9例自體骨髓干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的護(hù)理[J];天津護(hù)理;2007年03期

8 張文波;徐欣;;慢性下肢缺血性疾病的診斷進(jìn)展[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

9 沈艷霞;張永學(xué);;下肢缺血性疾病的治療現(xiàn)狀[J];國(guó)際心血管病雜志;2008年01期

10 楊學(xué)全;楊俊霞;;腰交感神經(jīng)滅活術(shù)治療下肢缺血性疾病[J];西部醫(yī)學(xué);2008年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 姜桂喜;王晉軍;薛智軍;苗進(jìn);;干細(xì)胞移植聯(lián)合中藥治療下肢缺血性疾病[A];2010年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合周?chē)芗膊W(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2010年

2 ;骨髓干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的研究進(jìn)展[A];2007年浙江省周?chē)芡饪颇陼?huì)論文匯編[C];2007年

3 黃中柯;樓岑;;干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病中核素顯像體內(nèi)示蹤的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2011年

4 范長(zhǎng)海;劉瑩;劉艷;隨曉云;楊義國(guó);崔紅隨;梁靜;孫萬(wàn)才;;“三聯(lián)療法”治療42例慢性下肢缺血性疾病患者臨床效果觀察[A];2010年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合周?chē)芗膊W(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2010年

5 孫萬(wàn)才;范長(zhǎng)海;;“三聯(lián)療法”治療42例慢性下肢缺血性疾病患者臨床效果觀察[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)周?chē)懿》謺?huì)2010年學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2010年

6 金畢;孫元;歐陽(yáng)晨曦;李毅清;胡德英;謝芬;賴(lài)傳善;;自體骨髓干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的研究[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)周?chē)芗膊?zhuān)業(yè)委員會(huì)周?chē)芗膊W(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

7 杜麗蘋(píng);溫志國(guó);李彥州;;外周血干細(xì)胞移植術(shù)治療下肢缺血性疾病102例臨床報(bào)道[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)周?chē)懿》謺?huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)暨中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)周?chē)懿》謺?huì)25年會(huì)慶論文集[C];2011年

8 艾明瑞;郝琳;于亞娜;;在營(yíng)衛(wèi)學(xué)說(shuō)指導(dǎo)下治療下肢缺血性疾病[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)周?chē)懿》謺?huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)暨中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)周?chē)懿》謺?huì)25年會(huì)慶論文集[C];2011年

9 楊曉鳳;吳雁翔;王紅梅;許憶峰;徐波;呂欣;張軼斌;王法;;自體外周血干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病臨床及實(shí)驗(yàn)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

10 付贏;;王軍主任診治下肢缺血性疾病經(jīng)驗(yàn)點(diǎn)滴[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)周?chē)懿》謺?huì)2010年學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 柳湘;治療下肢缺血性疾病[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

2 陳蕾;干細(xì)胞移植與中藥合用治療下肢缺血性疾病[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

3 陳蕾;干細(xì)胞移植與中藥合用治療下肢缺血性疾病[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

4 劉燕玲;治周?chē)懿∮行录夹g(shù)[N];健康報(bào);2003年

5 ;我國(guó)干細(xì)胞科研喜訊頻傳[N];人民政協(xié)報(bào);2004年

6 ;脛骨分離再生血管手術(shù)在哈獲成功[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 付明歡;可顯著提高下肢缺血性疾病干細(xì)胞移植效率的新型細(xì)胞移植體系研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 徐慶田;284例下肢缺血性疾�。摼遥┑幕仡櫺苑治鯷D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

2 王賓;白體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療下肢缺血性疾病研究[D];浙江大學(xué);2006年

3 高宗軼;自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的療效研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

4 李肖娟;自體骨髓干細(xì)胞移植聯(lián)合中藥治療下肢缺血性疾病的30例臨床觀察[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

5 白超;自體骨髓單核細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的療效觀察[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

6 王宏飛;介入療法和外科手術(shù)在治療下肢缺血性疾病中的比較[D];吉林大學(xué);2008年

7 朱曉鋒;下肢缺血性疾病術(shù)后辨證分型回顧性研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

8 付曉瑾;疏肝活血法對(duì)下肢缺血性疾病介入術(shù)后再狹窄的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：1471780