本文關(guān)鍵詞：TGR5對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制

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【摘要】：背景:隨著生活方式改變,心血管病的發(fā)病率呈逐年上漲趨勢。心室重構(gòu)是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的必經(jīng)之路,它是由多種損傷因素共同參與的結(jié)果,其中NF-κB介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是重要一環(huán)。心臟組織是由心臟細(xì)胞及細(xì)胞外間質(zhì)共同組成,在心室重構(gòu)過程,心臟細(xì)胞中的心肌成纖維細(xì)胞起著重要作用。G蛋白偶聯(lián)受體(TGR5)作為一種膽汁酸膜受體,在多種組織、器官上均有表達(dá),對(duì)機(jī)體的能量代謝、免疫調(diào)控等反應(yīng)過程起著重要的作用。已有研究表明在單核-巨噬細(xì)胞[1,2]、膽道上皮細(xì)胞[3]、胃[4]等組織細(xì)胞膜上TGR5激動(dòng)可減輕NF-κB介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。但目前尚無相關(guān)研究明確TGR5激動(dòng)對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的影響。目的:探究G蛋白偶聯(lián)受體(TGR5)激動(dòng)對(duì)血管緊張素II誘導(dǎo)的乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影響,并探討可能存在的機(jī)制。方法:1、乳小鼠CFs的培養(yǎng)與鑒定:使用酶消化及差速貼壁法培養(yǎng)CFs,免疫熒光鑒定CFs。2、檢測TGR5 mRNA在乳小鼠CFs的表達(dá)量:使用RT-PCR法檢測CFs及心臟、肝臟、脾臟組織上TGR5mRNA表達(dá)量。3、TGR5過表達(dá)病毒制備與檢測。4、檢測TGR5病毒對(duì)CFs的感染效率:實(shí)驗(yàn)設(shè)置為(1)實(shí)驗(yàn)組:CFs-v+培養(yǎng)基組、CFs-v+Polybrene組、CFs-v+ENi.S組、CFs-v+Polybrene+ENi.S組(CFs-v指成功感染TGR5過表達(dá)病毒的CFs,“+”指陽性病毒,“-”指陰性病毒);(2)對(duì)照組:CFs+培養(yǎng)基組、CFs+Polybrene組、CFs+ENi.S組、CFs+Polybrene+ENi.S組。5、檢測TGR5過表達(dá)病毒感染后的CFs上TGR5 mRNA的表達(dá)情況:使用RT-PCR法檢測CFs、CFs-v(+)、心臟、肝臟、脾臟組織上TGR5 mRNA表達(dá)量。6、檢測血管緊張素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)、TGR5過表達(dá)病毒對(duì)CFs增殖的影響:(1)Ang Ⅱ?qū)嶒?yàn)分組設(shè)置為空白對(duì)照組:CFs+Ang II(0mol/L)組,Ang II干預(yù)組:CFs+Ang Ⅱ(10-5mol/L)組、CFs+Ang II(10-6mol/L)組、CFs+Ang Ⅱ(10-7mol/L)組;(2)TGR5實(shí)驗(yàn)組設(shè)置為對(duì)照組:Ang Ⅱ+CFs組,病毒干預(yù)組:Ang Ⅱ+CFs-v(+)組、Ang Ⅱ+CFs-v(-)組,使用MTT法檢測各組經(jīng)不同實(shí)驗(yàn)條件干預(yù)后在不同時(shí)間點(diǎn)的OD值,計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖或抑制率。7、檢測過表達(dá)TGR5及激動(dòng)TGR5后對(duì)CFs增殖的影響:實(shí)驗(yàn)分組為(1)CFs組;(2)CFs-v(+)組;(3)Ang Ⅱ+CFs-v(+)組;(4)Ang Ⅱ+CFs-v(-)組;(5)Ang Ⅱ+CFs-v(+)+諾米林(TGR5激動(dòng)劑)組;(6)Ang Ⅱ+CFs-v(-)+諾米林組,使用MTT法檢測各實(shí)驗(yàn)組干預(yù)不同時(shí)間后的增殖情況,使用Western Blot技術(shù)檢測各實(shí)驗(yàn)組TGR5、P65蛋白的相對(duì)表達(dá)量,使用ELISA技術(shù)檢測各實(shí)驗(yàn)組的c AMP、膠原蛋白Ⅰ/Ⅲ含量。結(jié)果:1、CFs培養(yǎng)成功,熒光免疫法檢測CFs純度大于90%。2、RT-PCR結(jié)果:正常情況下TGR5 mRNA在乳小鼠CFs上的表達(dá)量極少,CFs組TGR5 mRNA表達(dá)量明顯少于心臟組、肝臟組、脾臟組,顯著差異(P0.05);CFs-v(+)組TGR5 mRNA表達(dá)量較CFs組明顯升高,P0.05。3、MTT結(jié)果:不同濃度的Ang Ⅱ?qū)Fs均具有促增殖作用,Ang Ⅱ+CFs組的促增殖作用明顯強(qiáng)于CFs組(P0.05),而10-7mol/L Ang Ⅱ誘導(dǎo)24小時(shí)的促進(jìn)增殖作用最強(qiáng)。感染TGR5過表達(dá)病毒后,與CFs組抑制細(xì)胞增殖作用比較,CFs-(+)組抑制細(xì)胞增殖作用明顯增強(qiáng),P0.05。激動(dòng)TGR5后,與Ang II+CFs-v(+)組抑制細(xì)胞增殖作用比較,Ang Ⅱ+CFs-v(+)+諾米林組的抑制細(xì)胞增殖作用明顯增強(qiáng),P0.05;4、Western Blot結(jié)果:(1)感染TGR5后,與CFs組比較,CFs-v(+)組、Ang Ⅱ+CFs-v(+)組、Ang Ⅱ+CFs-v(+)+諾米林組上的TGR5蛋白表達(dá)量均明顯增高,P0.05;(2)感染TGR5病毒后,與CFs組比較,CFs-v(+)組上的P65蛋白表達(dá)量明顯減少,P0.05;激動(dòng)TGR5后,與Ang Ⅱ+CFs-v(+)組比較,Ang Ⅱ+CFs-v(+)+諾米林組的P65蛋白表達(dá)量明顯減少,P0.05。5、ELISA結(jié)果:(1)感染TGR5病毒后,與CFs-v組比較,CFs-v(+)組胞漿中c AMP濃度明顯升高,P0.05;激動(dòng)TGR5后,與Ang Ⅱ+CFs-v(+)組比較,Ang Ⅱ+CFs-v(+)+諾米林組胞漿中c AMP濃度較高,P0.05。(2)Ang Ⅱ誘導(dǎo)后,與CFs-v(+)組比較,Ang Ⅱ+CFs-v(+)組細(xì)胞合成分泌的膠原蛋白I/III量增多,P0.05;感染TGR5病毒后,與CFs組比較,CFs-v(+)組細(xì)胞合成分泌的膠原蛋白I/III量減少;激動(dòng)TGR5后,與Ang Ⅱ+CFs-v(+)組比較,Ang II+CFs-v(+)+諾米林組細(xì)胞合成分泌的膠原蛋白Ⅰ/Ⅲ量明顯減少,P0.05。結(jié)論:1、TGR5 mRNA在小鼠CFs上的表達(dá)量極少。2、激動(dòng)TGR5,可通過增加胞漿中c AMP,減少P65核轉(zhuǎn)位。3、激動(dòng)TGR5能抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的CFs增殖及膠原蛋白分泌,其可能機(jī)制是通過NF-κB信號(hào)通路抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的CFs增殖及膠原蛋白分泌。
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 Jia Lei;Yang Yumin;Zhu Deli;Gao Xiaohui;Wang Xiaoling;Xing Huihui;Bao Junping;Shu Liang;;Anti-proliferative effect of the extract of Guangzao (Fructus Choerospondiatis) on cultured rat cardiac fibroblasts[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2015年06期

2 陳偉偉;高潤霖;劉力生;朱曼璐;王文;王擁軍;吳兆蘇;李惠君;鄭哲;蔣立新;胡盛壽;;《中國心血管病報(bào)告2014》概要[J];中國循環(huán)雜志;2015年07期

3 林快樂;蔡正艷;周偉澄;;膽汁酸受體TGR5激動(dòng)劑研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2012年04期

4 辛毅;許秀芳;黃益民;張穎;李溫斌;;乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及熒光鑒定[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年05期

5 劉玉梅;王保和;;心室重構(gòu)時(shí)心肌膠原纖維的變化及基質(zhì)金屬蛋白酶對(duì)其的影響[J];中國康復(fù);2007年03期

6 陳勇兵,陳如坤,陳力,吳明,施立,楊文濤,錢永躍;乳鼠心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方法的改進(jìn)[J];江蘇醫(yī)藥;2005年03期

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本文編號(hào)：1300117