發(fā)布時間：2017-11-24 19:00

  本文關(guān)鍵詞：肌動蛋白結(jié)合蛋白Twinfilin-1在血管平滑肌細胞遷移中的作用及軟脈靈對Twinfilin-1的影響

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【摘要】：目的1、觀察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)對表皮生長因子(EGF)誘導(dǎo)的血管平滑肌細胞(VSMCs)遷移的影響,同時觀察PI3Ks對肌動蛋白結(jié)合蛋白Twinfilin-1的影響及Twinfilin-1對細胞骨架重塑的調(diào)節(jié)。2、觀察軟脈靈藥物血清對血小板源性生長因子(PDGF)誘導(dǎo)的VSMCs內(nèi)Twinfilin-1和細胞骨架的的影響。方法第一部分組織塊貼壁法培養(yǎng)大鼠胸主動脈平滑肌細胞,第3-5代細胞用于實驗,細胞做如下方法處理:空白對照(Control組)、25ng/ml EGF(EGF組)及5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L PI3Ks阻滯劑LY294002(LY294002低、中、高濃度組),后三組在實驗時先以相應(yīng)濃度LY294002預(yù)處理細胞1h,再加入同濃度EGF干預(yù)。用劃痕損傷法觀察細胞遷移情況,記錄下EGF誘導(dǎo)后第0,6,12h VSMCs細胞間“裸露”區(qū)域面積,轉(zhuǎn)化成相對值(%)。EGF誘導(dǎo)6h后,以Western blot法檢測細胞內(nèi)Twinfilin-1的表達水平,用激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)Twinfilin-1分布及細胞骨架微絲排列變化。第二部分灌胃法制備大鼠軟脈靈藥物及非藥物血清,組織塊貼壁法培養(yǎng)大鼠胸主動脈平滑肌細胞,第3-5代細胞用于實驗,實驗分為空白對照(Control)、PDGF(10ng/ml)、10%軟脈靈藥物血清+PDGF、10%非藥物血清+PDGF及LY294002(50μmol/L)+PDGF五組,后三組在實驗時先以相應(yīng)藥物預(yù)處理細胞1h,再加入同濃度PDGF干預(yù)。在干預(yù)第6h時以激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)Twinfilin-1表達和分布情況及微絲排列變化。結(jié)果第一部分劃痕后6h、12h,與Control相比,25ng/ml EGF明顯促進細胞遷移(細胞間“裸露”區(qū)域的面積相對值/%,6h:EGF 73.33±2.83 vs Control 92.14±4.34;12h:EGF 44.77±4.23 vs Control 82.96±2.67,均P0.01)。LY294002呈濃度依賴性抑制EGF誘導(dǎo)的VSMCs遷移(5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L預(yù)處理后細胞“裸露”區(qū)域面積相對值/%依次為:6h:78.93±2.52,85.86±3.16,90.27±2.78;12h:54.63±3.30,70.59±2.91,81.13±3.03;均P0.01vs EGF)。與Control相比,EGF誘導(dǎo)VSMCs內(nèi)Twinfilin-1表達增多,LY294002呈濃度依賴性抑制Twinfilin-1表達。激光共聚焦觀察到在靜息狀態(tài)下細胞內(nèi)Twinfilin-1表達較少,可見核周聚集的現(xiàn)象,余胞質(zhì)內(nèi)均勻彌散分布,細胞內(nèi)肌動蛋白纖維絲少,絲狀偽足不明顯。EGF誘導(dǎo)細胞后Twinfilin-1表達增多并重新分布,表現(xiàn)為核周聚集現(xiàn)象減弱,均勻彌散到整個細胞質(zhì)中特別在細胞偽足伸出處定位;同時細胞內(nèi)應(yīng)力纖維明顯增多,排列整齊有序,細胞伸出小偽足。LY294002呈濃度依賴性抑制Twinfilin-1表達與重定位,核周聚集現(xiàn)象雖不如Control組明顯但開始出現(xiàn)了核周聚集的趨勢;同時細胞內(nèi)應(yīng)力纖維減少,肌動蛋白纖維絲排列雜亂無序,絲狀偽足不明顯。LY294002濃度越大,肌動蛋白纖維絲排列越松散無序。第二部分Control組內(nèi)Twinfilin-1主要聚集在核周,余胞質(zhì)內(nèi)少量均勻分布,細胞骨架重塑情況不明顯,未見到明顯的應(yīng)力纖維。PDGF誘導(dǎo)細胞后Twinfilin-1表達增多,在細胞突起和細胞偽足處可見到Twinfilin-1分布;同時細胞骨架重組,胞內(nèi)應(yīng)力纖維明顯增多,排列整齊有序,延伸至細胞偽足處。軟脈靈藥物血清干預(yù)細胞后,Twinfilin-1表達較非藥物血清組減弱,并且重定位現(xiàn)象受抑制,Twinfilin-1未定位到細胞突起及偽足處;同時細胞骨架微絲減少,排列松散,偽足處應(yīng)力纖維減少,與LY294002干預(yù)情況相似。結(jié)論1、EGF通過PI3Ks通路促進血管平滑肌細胞遷移,誘導(dǎo)細胞內(nèi)Twinfilin-1表達和重分布。2、Twinfilin-1表達與重分布伴隨細胞骨架肌動蛋白纖維絲結(jié)構(gòu)的重塑。3、軟脈靈藥物血清可抑制PDGF誘導(dǎo)的Twinfilin-1表達及重分布,抑制細胞骨架的重塑。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54

【參考文獻】

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1 張騰騰;張利軍;王蓓蓓;李憲奎;張俊霞;魏俊燕;張麗儥;;PI3K/Akt在肺炎衣原體感染誘導(dǎo)血管平滑肌細胞遷移中的作用[J];中國動脈硬化雜志;2012年03期

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本文編號：1223238