本文關(guān)鍵詞：CD47在骨髓增生異常綜合征發(fā)病機(jī)制中作用的研究

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【摘要】：目的骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndromes,MDS)是一種異質(zhì)性疾病,是造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病。本研究以MDS患者為研究對(duì)象,在細(xì)胞和個(gè)體層次分析CD47在MDS發(fā)病機(jī)制的作用。分析分選后CD34+CD38-CD47+細(xì)胞中細(xì)胞核因子kB(NF-kB)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)(mTOR)等關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白及磷酸化表達(dá);分選后MDS患者CD34+CD38-CD47+細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)分析。本文初步探討了CD47在MDS發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮的作用,進(jìn)而可以為將來(lái)骨髓增生異常綜合征的靶向調(diào)節(jié)和治療奠定基礎(chǔ)。方法第一部分收集21例MDS患者為實(shí)驗(yàn)組(MDS組),20例非惡性貧血患者為對(duì)照組。流式細(xì)胞儀分選CD34+CD38-CD47+細(xì)胞,實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)法檢測(cè)CD34+CD38-CD47+細(xì)胞NF-kB、PI3K、AKT、PTEN、mTOR mRNA表達(dá)。第二部分收集10例MDS患者為實(shí)驗(yàn)組(MDS組),8例急性髓系白血病(AML)患者為陽(yáng)性對(duì)照組,11例非惡性貧血患者為陰性對(duì)照組。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD34+CD38-CD47+細(xì)胞pNF-kB、pAKT、pmTOR蛋白的表達(dá)。第三部分收集5例MDS患者為實(shí)驗(yàn)組(MDS組),4例非惡性貧血患者為對(duì)照組,將MDS患者/對(duì)照組患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞分別與正常人來(lái)源的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng),使用熒光染料羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)分別標(biāo)記MDS患者/對(duì)照組患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞,在熒光顯微鏡下觀察測(cè)定并比較兩群細(xì)胞的被吞噬指數(shù)。第四部分外周血單個(gè)核細(xì)胞轉(zhuǎn)化巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)○1使用流式細(xì)胞術(shù)和光學(xué)顯微鏡研究MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞轉(zhuǎn)化巨噬細(xì)胞的比率,收集8例MDS患者為實(shí)驗(yàn)組(MDS組),5例健康志愿者為對(duì)照組;○2研究MDS患者來(lái)源的巨噬細(xì)胞識(shí)別功能(甘露糖受體,cd206),并與正常人來(lái)源的巨噬細(xì)胞相比較。收集10例mds患者為實(shí)驗(yàn)組(mds組),9例健康志愿者為對(duì)照組;采用流式細(xì)胞術(shù)分析7例mds患者(實(shí)驗(yàn)組)和11例健康志愿者(對(duì)照組)來(lái)源的巨噬細(xì)胞上的表面受體信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白a鏈(sirpa)的表達(dá);○3采用熒光顯微鏡法和流式細(xì)胞術(shù)法分別觀察mds患者/正常人來(lái)源的巨噬細(xì)胞的吞噬功能。收集5例mds患者為實(shí)驗(yàn)組(mds組),4例健康志愿者為對(duì)照組;○4用酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)檢測(cè)18例mds患者來(lái)源巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清inos水平,并與8例健康志愿者作為正常對(duì)照,比較mds患者來(lái)源調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞殺傷功能的負(fù)調(diào)控因子的表達(dá)。結(jié)果第一部分qpcr法檢測(cè)到mds組(n=21)cd34+cd38-cd47+細(xì)胞nf-kb、pi3k和mtormrna表達(dá)水平(分別為19.67±2.47、36.44±13.21和10.61±1.47)顯著高于對(duì)照組(n=20,分別為1.40±0.25、1.63±0.42和2.45±0.83,p0.05);mds組cd34+cd38-cd47+細(xì)胞akt和ptenmrna表達(dá)水平(分別為4.63±1.63和1.94±0.33)高于對(duì)照組(分別為1.39±0.24和1.48±0.27),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.05。第二部分流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)到mds組(n=10)cd34+cd38-cd47+細(xì)胞pnf-kb蛋白的平均熒光強(qiáng)度(1.18±0.15)顯著高于陰性對(duì)照組(n=11,0.80±0.07,p0.05),低于aml組(n=8,1.72±0.49),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.05;mds組cd34+cd38-cd47+細(xì)胞pakt蛋白的平均熒光強(qiáng)度(1.15±0.11)高于陰性對(duì)照組(1.01±0.12),低于aml組(1.89±0.68),但是均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.05;mds組cd34+cd38-cd47+細(xì)胞pmtor蛋白的平均熒光強(qiáng)度(1.09±0.04)顯著高于陰性對(duì)照組(0.94±0.04,p0.05),低于aml組(1.89±0.68),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.05。第三部分通過(guò)cfse染色分別標(biāo)記mds患者/對(duì)照組患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞,在熒光顯微鏡下觀察到mds組(n=5)的被吞噬指數(shù)(16.40±1.67)顯著低于對(duì)照組(n=4,47.75±9.56,p0.05)。第四部分○1流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MDS組(n=8)外周血單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率為(5.17±3.47)%,顯著低于正常對(duì)照組(66.18±13.43%,P0.05),光學(xué)顯微鏡下MDS組轉(zhuǎn)化為的巨噬細(xì)胞較正常對(duì)照組的形態(tài)較差;○2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到MDS組(n=10)巨噬細(xì)胞的識(shí)別受體CD14+CD68+CD206+的表達(dá)水平(9.73±2.59)顯著低于正常對(duì)照組(n=9,51.15±10.82,P0.05);MDS組(n=7)巨噬細(xì)胞表面受體CD14+CD68+SIRPα+的表達(dá)水平(0.51±0.09)顯著低于正常對(duì)照組(n=11,0.77±0.06,P0.05);○3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到MDS組(n=5)來(lái)源的巨噬細(xì)胞吞噬免疫微球的吞噬指數(shù)及吞噬百分率(分別為0.45±0.08、23.69%±3.22%)顯著低于正常對(duì)照組(n=4,分別為0.92±0.07、42.75%±2.13%,均P0.05);在熒光顯微鏡下觀察到MDS組(n=5)來(lái)源的巨噬細(xì)胞吞噬單個(gè)核細(xì)胞的吞噬指數(shù)(0.24±0.04)顯著低于正常對(duì)照組(n=4,0.48±0.96,P0.05);○4 MDS患者來(lái)源巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清iNOS水平(35.30±7.06)高于正常對(duì)照組(22.05±3.67),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。結(jié)論MDS患者CD34+CD38-CD47+細(xì)胞中的PI3K信號(hào)通路較對(duì)照組是激活的;MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞較對(duì)照組能夠明顯抑制巨噬細(xì)胞的吞噬;MDS患者來(lái)源的巨噬細(xì)胞識(shí)別及吞噬、殺傷功能較對(duì)照組明顯下降。本研究推測(cè)MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞通過(guò)抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用進(jìn)而促進(jìn)疾病的進(jìn)展,并且MDS患者的巨噬細(xì)胞功能下降可能是促進(jìn)MDS的疾病進(jìn)展的原因之一。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R551.3

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：1223020